LncRNA HOTTIP单核苷酸多态性与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的关系

目的 探讨HOTTIP rs1859168和rs17427960单核苷酸多态性(SNP)与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变(CIN)发病风险的关系。方法 收集2019年11月至2021年5月盐城市第一人民医院诊断为CIN的患者142例作为CIN组,被诊断为宫颈癌的患者103例作为宫颈癌组,以同期住院的170例无妇科疾病的非肿瘤患者为对照组,采用TaqMan-MGB探针法方法进行基因分型,采用χ^(2)检验和logistic回归分析SNP位点与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的相关性。结果 与对照组相比,HOTTIP rs1859168和rs17427960在宫颈癌患者中的基因型分布存在显著性差异。在共显性模型中,携带rs1859168 CA基因型(ORadj=1.897,95%CI:1.090~3.300,Padj=0.023)及rs17427960 AC基因型(ORadj=1.787,95%CI:1.020~3.131,Padj=0.042)均显著增加了宫颈癌的发病风险;在显性模型中,rs1859168 CA+AA基因型(ORadj=1.690, 95%CI:1.004~2.844,Padj=0.048)增加了宫颈癌的发病风险。结论 HOTTIP rs1859168和rs17427960的SNP与宫颈癌的发病风险相关,可作为宫颈癌的潜在易感性位点。

lncRNA HOTTIP通过miR-637/KLK4轴促进肺癌SPC-A-1细胞的恶性生物学行为

目的:探讨lncRNA HOTTIP对肺癌细胞增殖、凋亡及EMT的影响及其作用机制。方法:利用qPCR检测lncRNA HOTTIP、miR-637和KLK4在肺癌SPC-A-1、正常肺上皮BEAS-2B细胞中的表达量;siRNA干扰SPC-A-1细胞中lncRNA HOTTIP的表达后,分别通过CCK-8、Transwell、流式细胞术和WB法检测SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT能力的变化。miRanda软件和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA HOTTIP和miR-637之间的靶向关系,RNA pull-down实验检测lncRNA HOTTIP和miR-637的吸附作用,检测lncRNA HOTTIP通过miR-637对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。利用TargetScan软件分析miR-637与KLK4的相关性,双荧光素酶报告基因实验检测miR-637与KLK4 mRNA之间的相互作用;检测miR-637通过KLK4 mRNA对SPC-A-1细胞增殖、侵袭、凋亡和EMT的调控。下调lncRNA HOTTIP和miR-637表达后,利用qPCR和WB检测KLK4 mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:与BEAS-2B细胞比,在SPC-A-1细胞中lncRNA HOTTIP呈高表达(P<0.01),miR-637呈低表达(P<0.01),KLK4呈高表达(P<0.01)。下调lncRNA HOTTIP后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著减弱,细胞凋亡率显著上升(P<0.01);lncRNA HOTTIP与miR-637具有靶向关系;下调miR-637表达后,SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT能力显著上升,细胞凋亡率显著降低(P<0.01)。miR-637与KLK43’UTR特异性结合。miR-637通过KLK4显著促进了SPC-A-1细胞增殖、侵袭与EMT,细胞凋亡率显著上升(P<0.01)。下调lncRNA HOTTIP使KLK4表达显著降低,而下调miR-637可促进KLK4表达(P<0.05)。结论:上调lncRNA HOTTIP可通过miR-637/KLK4轴促进肺癌SPC-A-1细胞的增殖、侵袭与EMT而抑制癌细胞凋亡。

长链非编码RNA HOXA远端转录本在口腔鳞状细胞癌中的表达及生物学意义

目的:探讨长链非编码RNA HOXA远端转录本(HOXA transcript at the distal tip,HOTTIP)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及对OSCC细胞生物学功能的影响。方法:收集2020年1月至2021年6月在郑州大学第一附属医院接受手术治疗的52例OSCC患者,采用RT-qPCR检测HOTTIP在OSCC组织和癌旁组织以及人OSCC细胞株HSC-4、SCC-9和CAL-27和人正常口腔角质细胞株HOK中的表达水平,并分析其与OSCC患者临床病理资料及总生存期(overall survival,OS)的关系。采用CCK-8、流式细胞术、Transwell和Western blot分析下调HOTTIP或共下调HOTTIP和miR-637对CAL-27细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)能力的影响。采用双荧光素酶报告基因实验分析HOTTIP和miR-637的靶向关系。结果:与癌旁组织相比,OSCC组织中HOTTIP的表达水平明显升高(P<0.05),且与肿瘤大小、TNM分期、分化程度、淋巴结转移及OS相关(P<0.05)。与人正常口腔角质HOK细胞相比,HSC-4、SCC-9和CAL-27细胞中HOTTIP的表达明显升高(P<0.05)。下调HOTTIP后,CAL-27细胞的增殖、迁移、侵袭及EMT能力明显减弱,细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。HOTTIP与miR-637具有靶向关系,且下调HOTTIP后,CAL-27细胞中miR-637表达明显升高(P<0.05)。同时下调HOTTIP和miR-637后,CAL-27细胞的增殖、迁移、侵袭与EMT能力明显增强,细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。结论:HOTTIP在OSCC组织和细胞中高表达,可靶向miR-637调控OSCC细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭和EMT能力。

LncRNA HOTTIP调节miR-615/IGF2分子轴促进肺癌细胞增殖和侵袭的实验研究

目的探讨长链非编码RNA同源异型基因簇A远端转录本(lncRNA HOTTIP)对肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法体外培养A549细胞,构建HOTTIP敲降载体、miR-615 inhibitor转染A549细胞,分为空白对照组、阴性对照组、HOTTIP shRNA组、HOTTIP shRNA+无序序列组、HOTTIP shRNA+miR-615 inhibit表达ors组。采用MTT、Transwell、免疫荧光法检测下调HOTTIP表达对A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响。采用双荧光素酶报告实验检测lncRNA HOTTIP、miR-615及IGF2的靶向调控关系。采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blotting检测HOTTIP、miR-615和IGF的表达量。结果A549细胞中HOTTIP相对表达量为1.74±0.08,高于BEAS-2B细胞的1.00±0.05(P<0.001)。HOTTIP shRNA组,HOTTIP相对表达量为0.43±0.04,低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。下调HOTTIP表达后,A549细胞增殖、侵袭和迁移活性低于空白对照组(P<0.05),细胞凋亡率相应增加(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实HOTTIP靶向作用miR-615,而miR-615可负调控IGF2的表达。HOTTIP shRNA组细胞miR-615表达量高于空白对照组,IGF2 mRNA表达量低于阴性对照组,而HOTTIP shRNA+miR-615 inhibitors组IGF2 mRNA和蛋白表达量较HOTTIP shRNA组升高(P<0.05)。结论敲除A549细胞中lncRNA HOTTIP表达后可通过上调miR-615并下调IGF2进而抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭活性。

长链非编码RNA同源异型基因簇A远端转录本在肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一种转录本长度超过200个核苷酸,没有蛋白质编码功能的特殊RNA分子。长期以来,lncRNA被当作基因组的"垃圾序列",但随着研究的不断深入,人们发现lncRNA广泛参与细胞的生物学过程。lncRNA与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关。而同源异型基因簇A远端转录本(HOTTIP)属于lncRNAs中的一种,其在多种恶性肿瘤中异常表达,所以了解HOTTIP在调节肿瘤细胞生命活动中的具体作用具有十分重要的意义。对其在肿瘤细胞发生、发展中的潜在分子机制进行分析,可为今后肿瘤的预防和治疗提供新思路。