HBV对HOXA10表达的影响及其机制研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)对同源框蛋白A10(HOXA10)表达的影响及其机制。方法选取慢性乙型肝炎(CHB)患者20例(CHB组)、体检健康者23名(正常对照组),分离其外周血单个核细胞(PBMC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和免疫印迹法检测肝癌细胞系HepG2、HepG2.2.15及CHB组、正常对照组PBMC中HOXA10mRNA和蛋白的表达。将HBV单个基因的表达质粒(pCMV-S、pCMV-E、pCMV-C、pCMV-X、pCMV-P)分别与含有HOXA10基因启动子的荧光素酶报告基因pGL3-HOXA10共转染HepG2细胞,并测定荧光素酶活性。结果HepG2.2.15细胞中HOXA10mRNA和蛋白的相对表达量均显著高于HepG2细胞(P=0.001)。HBV患者PBMC中HOXA10 mRNA的相对表达量显著高于正常对照组(P=0.001)。转染pCMV-X的HepG2细胞的荧光素酶活性显著高于转染对照载体pCMV-tag2B的HepG2细胞(P=0.001),转染其他质粒的HepG2细胞之间荧光素酶活性差异均无统计学意义(P>0.05)。转染pCMV-X的HepG2细胞的HOXA10 mRNA和蛋白的相对表达量显著高于转染空载体pCMV-tag2B的HepG2细胞(P=0.001)。结论HBV可能通过其X基因上调HOXA10的表达。

HOXA10直接调控人子宫内膜间质细胞中p/CAF启动子的活性

目的:筛选与鉴定转录因子同源框蛋白(HOX)A10下游靶基因。方法:用Ad-HOXA10重组腺病毒感染人子宫内膜间质细胞,通过染色体免疫共沉淀(ChIP)方法,筛选HOXA10的下游靶基因;采用萤光素酶报告基因实验结合腺病毒介导的HOXA10过表达和小干扰RNA介导的基因沉默实验,分析HOXA10对下游靶基因的转录调控作用。结果:ChIP-PCR筛选并鉴定p/CAF(p300/CBP相关因子)为HOXA10直接作用的靶基因;过表达HOXA10抑制p/CAF启动子活性达60%;基因沉默内源性HOXA10的表达可以激活p/CAF启动子活性超过2倍以上。结论:p/CAF是HOXA10新的靶基因,HOXA10可能通过调节p/CAF的表达来调控子宫内膜的发育。

Cbl- b通过HOXA10调控miR-99a和miR-125b参与CD4^+T细胞活化的机制研究

目的:探讨卡西塔斯B细胞淋巴瘤谱系b(Cbl-b)调控CD4^+T细胞活化的机制。方法:用CCK8试剂盒检测过表达微小RNA(miR)-99a和miR-125b的小鼠淋巴瘤细胞(EL4)细胞增殖活性。取抗CD3和抗CD28抗体活化野生型(WT)和Cbl-b缺失型(Cbl^-b-/-)CD4^+T细胞,激光共聚焦观察WT和Cbl^-b-/-CD4^+T细胞中同源异型盒蛋白A10(HOXA10)的入核情况。用双荧光素酶报告系统检测HOXA10对miR-99a和miR-125b的表达调控作用。用蛋白质印迹法和双荧光素酶报告系统检测miR-99a和miR-125b对靶基因的表达水平影响。结果:在Cbl^-b-/-CD4^+T细胞中,HOXA10在抗CD3抗体单独刺激时即可入核。HOXA10入核后促进miR-99a和miR-125b表达,而过表达miR-99a和miR-125b则抑制蛋白激酶B2和3(AKT2、AKT3)、磷酸肌醇-3-激酶催化亚基A和D(PIK3CA、PIK3CD)的表达。结论:Cbl-b通过阻止HOXA10核转位来抑制miR-99a和miR-125b表达,导致AKT2、AKT3、PIK3CA、PIK3CD(AKT/PI3K)表达增加,最终抑制CD4^+T细胞活化。