马肝醇脱氢酶催化有机硅酮不对称还原反应动力学

探讨了马肝醇脱氢酶 (HLADH)催化三甲基硅乙酮及其碳结构类似物不对称还原反应动力学 .结果表明 ,在酶浓度低于 15 0mg/L时 ,底物浓度与反应初速度的关系符合米氏动力学方程 ;HLADH催化三甲基硅乙酮不对称还原反应的Km、vmax和Ea 分别为 2 67mmol/L、 0 118mmol/ (L·min·mg)和 3 7kJ/mol,其碳结构类似物的相应值分别为 3 5 6mmol/L、 0 0 84mmol/ (L·min·mg)和 61kJ/mol.

含离子液体[bmim]Cl的反应介质中马肝醇脱氢酶的催化特性

研究了马肝醇脱氢酶(HLADH)在含离子液体1-丁基-3-甲基咪唑氯酸盐([bmim]Cl)的反应介质中的催化特性.以乙醇为底物时,该酶在[bmim]Cl含量≤0.15 g/ml的体系中的活力高于在不含离子液体的体系中的活力;离子液体浓度过高(>0.15 g/ml)对酶活性有明显的抑制作用.反应温度和pH对含离子液体的反应介质中酶活力的影响规律与不含离子液体时的规律相似.与不含离子液体的反应介质相比,HLADH在含0.05 g/ml[bmim]Cl的体系中催化乙醇氧化的活化能下降,酶反应的Vmax和Km均升高.反应体系中低浓度(≤0.1 g/ml)的离子液体能提高酶的热稳定性,但高浓度(>0.1 g/ml)的离子液体可降低酶的热稳定性.紫外二阶导数光谱显示,在含不同浓度离子液体的反应介质中酶分子构象的变化有较大的差异.

底物中的硅原子对酶反应的影响

在酶工程学的研究史上，人们一方面不断地研制开发新的酶种；一方面利用固定化、酶分子改造和修饰等技术来提高酶的活性和稳定性；另一方面，则不断地开拓酶的新用途。酶催化非天然化合物的生物合成和转化（正是这一方面研究的新进展）。由于有机硅化合物在有机合成，尤其...

全细胞催化甘油生物合成L-果糖体系的构建

L-果糖是一种重要的稀少糖,广泛应用于食品、医药和化学合成等领域。通过构建E型马肝乙醇脱氢酶和NADH氧化酶重组大肠杆菌,再偶联醛缩酶重组大肠杆菌催化甘油合成L-果糖。对表达E型马肝乙醇脱氢酶和NADH氧化酶的菌株进行诱导条件的优化,诱导温度20℃,诱导时间16 h,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷添加浓度0.05 mmol/L。通过单因素实验研究温度、pH值、湿细胞量、甘油浓度对合成L-果糖的影响,利用正交试验进行优化,优化条件为:温度40℃,pH值为9.0,湿细胞质量浓度为25 g/L,甘油浓度为500 mmol/L。在优化条件下得到L-果糖2.67 g/L。采用全细胞转化方法以廉价的甘油为原料生产L-果糖,不仅省去了繁琐的酶纯化步骤,无须添加辅因子,而且生产成本低廉,期望为L-果糖产品绿色生产及现有技术改造提供理论参考。

马肝醇脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

利用RT-PCR技术从马肝扩增HLADH-E和HLADH-S基因,通过基因工程方法构建表达质粒pLY115E和pLY115S,在大肠杆菌中表达,并利用Ni柱分离纯化。利用紫外检测辅酶NADH在340nm的吸光值,来考察表达产物转化环己醇的活性。试验结果证明马肝醇脱氢酶HLADH-E和HLADH-S基因均能在大肠杆菌中表达,并且可溶性表达产物都具有氧化环己醇的活性,为马肝醇脱氢酶的进一步研究开发奠定了基础。