不同因素对桑枝多糖含量影响的研究

为了比较不同因素对桑枝多糖含量的影响,以葡萄糖为标准品,采用热水浸提法提取,使用苯酚硫酸法显色,利用紫外分光光度计测其吸光度(A)值,将A值代入标准曲线,得出多糖含量.通过对样品多糖含量的比较,发现不同部位中,上段>中段>下段;不同地区中,浙江>江苏>和县>云南>亳州>含山;不同组织结构中,形成层外组织结构>形成层内组织结构;不同粗细程度的粉末,过7号筛粉末>过6号筛粉末>过5号筛粉末>过4号筛粉末>过3号筛粉末,根据试验结果,得出多糖含量较高的桑枝样品条件为浙江上部形成层外组织过7号筛粉末样品.

棉花幼苗根总RNA提取的改进热酚法

获得高质量的植物总RNA比较困难,RNA的提取方法会因植物材料的不同而又有较大差异.棉花幼根含有大量多酚、多糖、单宁和其它多种次生代谢物,因此RNA提取难度较大.本文报道了棉花根样的高效获取方法和经研究改进的棉根RNA热酚提取法,该法可获得高质量棉根总RNA,并能成功进行反转录,制备cDNA.

改良热酚水法制备大肠杆菌O157:H7脂多糖抗原的研究

采用热酚水法提取肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7的脂多糖(LPS),经浓缩酶解,离心分离得纯化LPS,酸解制得O-特异性侧链(O-PS),能有效去除核酸及杂蛋白,抗原具有鲎试剂凝集活性及对产蛋鸡有较强的免疫原性,建立了一种改良热酚水法提取制备O157:H7特异性脂多糖抗原的方法。

肠出血性大肠杆菌O157∶H7脂多糖抗原的提取鉴定及间接ELISA法的建立

目的提取并纯化具有强免疫反应性和高特异性的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(E.coliO157∶H7)脂多糖(LPS)抗原,并研究其在E.coliO157∶H7 LPS抗体检测中的应用。方法应用热酚水法提取E.coliO157∶H7 LPS抗原,同时收集水相和酚相LPS,并对其产率、纯度及免疫反应性进行分析比较,用酸解法制备O-特异性多糖(O-SP),并以不同的LPS为包被抗原,建立间接ELISA法检测E.coliO157∶H7 LPS抗体。结果大分子量的E.coliO157∶H7 LPS优先溶于酚相,而水相中含有更多的小分子量LPS,与水相LPS相比酚相LPS具有更高的免疫反应性和纯度,酚相LPS经酸解去脂得到的O-SP具有更高的反应特异性。结论酚相LPS和O-SP都可用于E.coliO157∶H7 LPS抗体的ELISA检测,O-SP具有更高的特异性,是检测E.coliO157∶H7 LPS特异性抗体的理想材料。

一种快速大量提取禾谷类作物幼苗期总RNA的方法

为探索一种快速、大量提取禾谷类作物总RNA的方法,利用改良的热酚法提取禾谷类作物(玉米、水稻和小麦)幼苗期不同组织的总RNA,该方法在2.5 mL的离心管中进行,在提取缓冲液中增加了巯基乙醇,对传统的操作步骤进行了优化。提取的RNA质量较高,纯度检测表明RNA样品OD260/OD280在1.8-2.1之间,含量约为10μg/μL。RT-PCR和Northern杂交结果表明RNA可以满足进一步分子操作的需要。

3种方法提取大肠杆菌E.coli脂多糖的比较

寻找大肠杆菌E.coli脂多糖的最佳提取方法。分别用改良热酚法、超声波处理法、煮沸法从大肠杆菌细胞壁中提取脂多糖,经纯化后分别在721分光光度仪上测其吸光值;再用3种方法提取的脂多糖分别免疫草鱼,计数法测受试草鱼血液中白细胞的数量,愈创木酚法测受试鱼不同组织中过氧化氢酶的活力(用OD值表示)。改良热酚法、超声波处理法、煮沸法提取的脂多糖在稀释15倍时,其吸光值分别是1.973、1.003和1.153;改良热酚法、超声波处理法、煮沸法提取的脂多糖在稀释15倍时,免疫草鱼测得受试鱼的白细胞数量分别为159个/μL、160个/μL和135个/μL,测得受试鱼血液中的过氧化氢酶活力分别是0.09、0.083、0.078,测得脾脏中的过氧化氢酶活力分别是0.083、0.078、0.06。改良热酚法提取的大肠杆菌脂多糖浓度高、免疫活性强,是相对比较好的一种提取方法。

改性热固性酚醛树脂热熔胶膜成膜工艺及其性能

针对低成本且环保的热熔预浸工艺,研制一种满足热熔工艺成膜性和高耐热性要求的改性热固性酚醛树脂(MPF)胶膜。采用流变仪和差示扫描量热仪,对MPF的固化反应特性和凝胶特性进行分析,利用粘度预测函数,建立粘度-温度-时间的函数关系模型,预测胶膜树脂的低粘度平台,可指导热熔MPF胶膜的制备及成膜性能研究。为保证树脂充分浸渍纤维,热熔预浸工艺树脂浸润纤维预制体的温度应在95~135℃(粘度小于1 000 mPa·s)。热熔法MPF胶膜的成膜温度在75~95℃(粘度范围在1 000~3 000 mPa·s),75℃条件下,MPF低粘度保持时间可达到120 min。固化后的MPF在1 200℃的氮气气氛中,残炭率可达到65%。此类新型热熔法MPF可为其在高性能树脂基复合材料领域的应用提供参考。

改良盐酸胍法提取水稻纹枯病菌RNA的效果分析

为了选出一种适合水稻纹枯病菌RNA的提取方法,比较了改良的盐酸胍法同热酚法、Trizol法提取水稻纹枯病菌RNA的效果。结果表明:3种方法中,改良的盐酸胍法和Trizol法可以提取到高质量的RNA,热酚法的提取效果不理想。改良的盐酸胍法提取的RNA进行mRNA差异显示的结果表明,没有多糖对后继反应的干扰,是一种经济有效的水稻纹枯病菌RNA的提取方法。用该法提取RNA,可以满足分子克隆与基因表达分析等分子生物学后继试验。

几种提取热带假丝酵母总RNA方法比较

选择Trizol法、热酚法、酵母RNA提取试剂盒法3种方法提取热带假丝酵母总RNA,通过对总RNA进行质量浓度和纯度分析,比较不同方法对热带假丝酵母总RNA提取的影响。结果表明:使用酵母RNA提取试剂盒法提取热带假丝酵母总RNA是较为有效且简便的方法。

白茶与茶树非绿色器官的总RNA提取

常规TRIzol法适用于一般茶树品种绿色叶片和芽的总RNA提取,但对于白茶品种芽叶和茶树非绿色组织的多糖和其它次生代谢物质含量高,常规TRIzol法提取总RNA存在一定困难。本文尝试利用改良热酚法提取白茶和非绿色组织的总RNA。结果表明,该法对于白茶、胚根和胚芽总RNA提取效果良好,可以用于cDNA的制备和RT-PCR反应的研究。

响应面设计试验法优化复方药茶饮料提取工艺参数

目的优选复方药茶饮料的最佳提取工艺,为工业化生产提供依据。方法采用福林酚法测定药茶中茶多酚的含量并作为评价工艺的指标,响应面设计试验法优选复方药茶饮料最优提取工艺参数,单因素考察提取次数。结果药茶粉碎成20目,92℃热浸法提取2次,第1次加水量为药茶量的16倍,提取时间25 min;第2次加水量为药茶量的12倍,提取时间25 min。结论按此工艺制备复方药茶饮料可最大限度的保存茶香,提取工艺科学、合理、可行。

正交试验优化洋葱多糖提取工艺研究

目的确定提取洋葱多糖的最佳工艺条件,并测定其含量。方法采用热水提醇沉法提取洋葱多糖,并用正交试验设计对提取工艺条件进行优化;采用苯酚-硫酸法测定洋葱多糖含量。结果正交试验3个因素对多糖提取率的影响强度为料液比>提取温度>提取时间,料液比为1∶20,提取温度为70℃,提取时间为2 h时,洋葱多糖提取率(4. 57%)最高,提取的洋葱多糖含量为64. 56%。结论采用该方法洋葱多糖提取率高且含量也很高,操作简便,容易实施,重复性好,可作为洋葱多糖的含量测定方法。

猪痢疾密螺旋体水相抗原的提取及鉴定

本试验应用热水酚法提取了猪痢疾密螺旋体菌壁的水相抗原，并用琼扩法、火箭电泳法以及被动血凝法测定了该抗原的特异性。结果表明，该抗原能特异性地与兔抗猪痢疾密螺旋体的抗血清和单克隆抗体６Ｈ结合，而与抗非致病性密螺旋体抗血清不发生反应。

藏药沙棘枝叶多糖的提取与含量测定

目的确定得糖率最高的提取部位并测定该部位提取物中多糖含量.方法以沙棘枝叶多糖得率为标准,通过超声波辅助-乙醇回流脱脂-热水浸提提取方法,比较水提取物、甲醇提取物、乙酸乙酯提取物的得糖率;Sevage法除蛋白后,采用苯酚-浓硫酸法测定沙棘多糖中总糖的含量.结果乙酸乙脂提取物、甲醇提取物、水提物部位的得糖率分别为4.01%、4.84%、6.42%,且水提物中总糖平均含量为28.51%.结论超声波辅助方法提取沙棘枝叶中的多糖,得糖率高;苯酚-浓硫酸法测定沙棘枝叶中多糖含量的方法简便、灵敏、准确,适合于沙棘多糖含量的测定.

副猪嗜血杆菌SC096株荚膜多糖及其抗血清的制备

为获得副猪嗜血杆菌荚膜多糖及其抗血清,本试验采用热酚法提取副猪嗜血杆菌SC096株荚膜多糖,并进行SDS-PAGE及银染检测,然后用荚膜多糖制备的油乳疫苗免疫家兔制备抗血清,并进行琼脂扩散试验及间接血凝试验检测。试验结果显示,热酚法可制备高浓度的荚膜多糖;SDS-PAGE电泳及银染结果显示条带呈弥散性分布,荚膜多糖分子质量55ku左右;琼脂扩散试验结果呈阳性;间接血凝试验中红细胞发生高达10孔滴度的凝集现象。副猪嗜血杆菌SC096株荚膜多糖的提取及其抗血清的制备,为其他含荚膜的细菌抗血清的制备提供了方法和理论依据,也为细菌荚膜多糖抗原性及其疫苗研究奠定了基础。

一种改良的热酚法高效快速提取酿酒酵母总RNA

以酿酒酵母单倍体CE N.PK1与双倍体CEN.PK2为研究对象,利用改良热酚法,快速高效地提取酿酒酵母总RNA。结果显示应用该方法提取的酿酒酵母CEN.PK1和CEN.PK2的总RNA经分光光度计测定浓度为7.63μg/μL和3.77μg/μL,OD_(260/280)分别为2.10和2.04,OD_(260/230)分别为2.32和2.24,浓度与纯度均能达到后续分子生物学试验的要求。经PCR与荧光定量PCR检测,该方法提取的RNA无DNA污染,可作为PCR反应的模板,与Trizol方法提取RNA相比,该方法不仅浓度高并且可将提取时间由常规的2.5 h缩短为1.5 h,具有操作简单、高质、高效等优点,经多次试验证明,此方法同样适用于酿酒酵母总RNA的大量提取试验,有较高的实用价值。

一种用于黄曲霉高质量总RNA提取方法与应用

不断发展的研究技术对黄曲霉RNA的提取质量提出更高的要求,而真菌的细胞壁结构及其内源性RNase活性常是达到这一目标的主要障碍。以黄曲霉菌丝为材料,探讨了采用TES热酚法获得高质量总RNA的方法,并通过RT-PCR(反转录聚合酶链式反应)和RNA-Sequencing(转录组测序)对获得的RNA进行了质量验证。结果显示,TES热酚法不但所用试剂价格低廉,该法所提取的RNA质量较高,其浓度、纯度和完整性均可满足RT-PCR、转录组测序的文库构建和高通量测序等对RNA要求较高的分子生物学实验。

丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖提取纯化及活性分析

为了提取、纯化天鹅源丙型副伤寒沙门氏菌脂多糖（LPS）并检测其活性，试验通过热酚水法提取丙型副伤寒沙门氏菌LPS，采用DNaseI、RNaseA和蛋白酶K及醇沉法纯化LPS，测定LPS提取物中多糖、蛋白及核酸的含量，鲎试剂检测凝集活性，显色基质法测定其活性。结果显示，纯化的丙型副伤寒沙门氏菌LPS平均产率为1．48％，多糖含量为3．84％，蛋白含量为1．49％，核酸含量为5．45％，且核酸片段低于100bp，SDS-PAGE电泳和银染结果显示条带主要集中在10～15ku范围内，与2EU／mL鲎试剂的最小凝集浓度是10．99ng／mL，显色基质法测定其活性为9．82×10^5EU／mg。该试验提取、纯化的丙型副伤寒沙门氏菌LPS纯度较高，生物活性良好。

十字花科黑腐病菌RNA提取与质量鉴定

十字花科黑腐病菌,学名野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv. campestris,简称Xcc),是一类γ-变形菌纲的革兰氏阴性细菌,能在世界范围内侵染十字花科植物,给农业生产造成重大损失。RNA是分子生物学的主要研究对象之一,提取高质量的RNA是研究十字花科黑腐病菌基因表达调控机理的基础。由于Xcc能产生大量胞外多糖及黄单胞色素,且细菌RNA半衰期较短,目前尚缺少一种大量提取Xcc高质量RNA的有效方法。该研究在参考多种RNA提取方法的基础上,建立了一种简单、有效的适合十字花科黑腐病菌RNA的提取方法。得到的RNA样品经过紫外分光光度法和甲醛变性凝胶电泳检测,证实为完整、均一的总RNA,达到了表达谱分析及cDNA文库构建的要求。

不同方法提取酿酒酵母总RNA的比较

选择试剂盒法、总核糖核酸(RNA)提取试剂(Trizol)法、热酚法3种方法提取酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)总RNA,根据提取效果,选用酵母破壁酶辅助破壁并进行不同菌体量优化,通过对总RNA进行浓度和纯度的分析,比较不同方法对酿酒酵母总RNA提取的影响。结果表明,试剂盒法和Trizol法不适合提取酿酒酵母总RNA,但通过添加酵母破壁酶,可以提高提取效果。热酚法适合提取酿酒酵母总RNA,但添加酵母破壁酶反而会导致RNA降解。因此,使用热酚法提取酿酒酵母总RNA是较为有效且简便的方法。