造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC4基因表达的研究

目的探讨人类脐血造血干细胞(HSC)向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC4基因表达的情况及全反式维甲酸(ATRA)对HOXC4基因表达的影响。方法 (1)采用造血干/祖细胞体外培养技术,以ATRA持续干扰人类造血干细胞,观察人类脐血HSC经植物血凝素(PHA-M)诱导后,在培养过程第3、7、12天的淋巴细胞集落形成单位(CFU-TL)生成情况。(2)采用实时荧光定量PCR技术检测HSC向淋巴系祖细胞增殖分化过程中HOXC4基因的表达水平。(3)用RNA表达相对量(2-△△Ct)表示HOXC4基因相对表达量,采用x±s表示HOXC4基因的变化情况。结果 (1)人脐血HSC向淋巴系祖细胞增殖分化过程中,HOXC4基因呈规律的表达。(2)随培养时间推移,HOXC4基因在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显降低。(3)与正常组比较,ATRA可上调HOXC4基因的表达。结论 HOXC4基因在人脐血HSC向淋巴系祖细胞增殖分化过程中呈现规律表达,提示HOXC4基因与人类造血干细胞向淋巴系祖细胞增殖分化过程密切相关,是其调控基因之一。ATRA能显著上调HOXC4基因的表达。

人类巨细胞病毒感染对淋巴系祖细胞增殖过程中Hoxc4及Hoxc6基因表达的影响

本研究探讨人类脐血造血干细胞(HSC)向淋巴系祖细胞(CFU-TL)分化过程中hoxc4、hoxc6基因表达的情况,并且用人类巨细胞病毒(HCMV)和/或全反式维甲酸(ATRA)进行干扰,在基因水平探讨HCMV感染导致脐血CFU-TL损伤的机制。采用体外定向培养CFU-TL,经MTT法检测后,应用荧光定量RT-PCR技术检测经人HCMV和/或ATRA处理的人脐血CFU-TL中hoxc4、hoxc6基因的mRNA表达水平。HCMV-AD169滴度为106蚀斑形成单位(PFU)/ml,按0.1ml105PFU/ml接种培养体系。结果表明:正常对照组、病毒处理组、维甲酸处理组hoxc4、hoxc6基因均在增殖分化的第3天少量表达,第7天表达最强烈(p<0.05),第12天表达明显下降。各组中hoxc4基因表达量高于hoxc6组(p<0.05)。与正常对照组比较,维甲酸组(6×10-8mol/L)的hoxc4、hoxc6基因表达上调(p<0.05),而病毒处理组hoxc4、hoxc6基因表达下调(p<0.05)。结论:hoxc4与hoxc6基因在脐血CFU-TL中各组呈现规律的表达,提示hoxc4、hoxc6均与淋巴系造血有密切的相关性。HCMV能使hoxc4、hoxc6基因表达下调,提示HCMV致造血细胞损害可能与hoxc4、hoxc6基因表达异常有关。ATRA能显著上调hoxc4、hoxc6基因的表达。

HOXC4基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达

目的探讨HOXC4基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的作用机制,从而为进一步研究其在造血发育中的功能奠定基础。方法提取斑马鱼总RNA,利用RT-PCR克隆得到HOXC4基因片段,将克隆得到的基因片段和载体pCS2+用限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,把基因片段插入pCS2+中,重组质粒经双酶切及测序鉴定后,采用T3RNA聚合酶体外转录体系制备地高辛标记的HOXC4基因反义mRNA探针,然后行全胚胎原位杂交。结果构建HOXC4-pCS2+重组质粒,获得地高辛标记的反义mRNA探针并且完成其在野生型斑马鱼中的全胚胎原位杂交,显示HOXC4基因在Tuebingen野生型斑马鱼神经系统高表达。结论得到HOXC4基因在斑马鱼早期胚胎发育过程中的基本表达情况,为进一步研究该基因在造血发育过程中的功能奠定了基础。