重组质粒pcEgr-hp53的构建及在A549和SKOV-3细胞中电离辐射诱导p53基因和蛋白的表达

目的构建重组质粒pcEgr-hp53,并探讨其在A549和SKOV-3细胞中的辐射诱导表达及抗癌作用。方法将野生型p53 cDNA全长插入pcDNA3.1质粒多克隆位点,用Egr-1启动子替代pcDNA3.1质粒CMV启动子,构建成pcEgr-hp53重组质粒;通过脂质体介导转染法将重组质粒pcEgr-hp53和pcDNA3.1分别转染入A549和SKOV3细胞株,并经G418筛选稳定克隆并扩增培养。采用RT-PCR和流式细胞术的方法检测了不同剂量X-射线照射转染后的A549和SKOV-3细胞p53基因转录水平和蛋白表达的变化。结果经限制性内切酶酶切鉴定,辐射诱导表达载体pcEgr-hp53构建正确。与0 Gy比较,A549-hp53和SKOV-3-hp53经0.5-5 Gy照射后,p53 mRNA水平增高;A549-hp53在2-5 Gy后,p53蛋白表达显著增高(P<0.01),SKOV-3-hp53其蛋白表达随剂量(0.5-5 Gy)增加而明显增加(P<0.05-P<0.01)。A549-hp53与A549-vect相同照射剂量组比较,其p53蛋白表达在0.5 Gy照射后明显下降(P<0.05),2-5 Gy照射后明显增高(P<0.01);SKOV-3-hp53与SKOV-3-vect相同照射剂量组比较,其蛋白表达在0 Gy时增高,0.5-5 Gy照射后明显增高(P<0.01)。结论X-射线可激活早期反应生长因子Egr-1,无论肿瘤细胞p53基因状态如何,均可诱导其下游基因p53 mRNA及其p53蛋白表达增强。