用BrdU法检测外周血淋巴细胞hprt突变的方法学探讨

目的 探索用 5 -溴脱氧尿嘧啶 (5 bromodeoxyuridine,BrdU)法检测次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因 (hypoxanthine guaninephosphoribosytransferasegene,hprt)突变的操作程序。 方法 用正交设计法就BrdU法的最佳检测条件进行了探讨。结果 本研究所得的最佳操作程序是 :将血样放入 4℃冰箱中冷藏2 4h ;培养基中 6 巯基鸟嘌呤 (6 thioguanine ,6 TG)最终浓度为 1×10 -4mol/L ;BrdU最终浓度用1× 10 -4mol/L ;加入BrdU后培养时间为 16h ;Giemsa染液浓度为 4 % ;染色时间为 15min。结论 BrdU法是一种较好的检测hprt突变的方法。

田湾核电站周围居民细胞微核率和HPRT突变率调查分析

目的建立田湾核电站周围30km范围内居民细胞微核发生率和体细胞HPRT基因位点突变频率基础数据库,掌握田湾核电站运行前的淋巴细胞微核发生率和体细胞HPRT基因位点突变频率的本底资料。方法采用分层整群随机抽样方法,以行政村和自然村组为最终抽样单位。在距核电站0～30km的范围内的27个村、社区,采集血样,并检查外周血淋巴细胞微核发生率和体细胞HPRT基因位点突变频率。结果631名抽检居民中男性微核率为4.40±2.15‰,HPRT突变率为(0.86±0.45)‰;女性微核率为(5.15±2.69)‰,HPRT突变率为(0.91±0.71)‰。按照距离分组平均微核率从(4.22±2.63)‰至(5.26±2.59)‰,HPRT突变率从(0.62±0.24)‰至(1.032±0.92)‰。结论微核率和HPRT突变率作为评价生物受照的生物剂量计,有十分广泛的应用前景,掌握核电站周围的居民的微核率和HPRT突变率的背景资料,对事故后辐射剂量评估和长期累积剂量的估算有十分重要的意义。

体细胞HPRT基因突变检测用于辐射剂量估算的可行性研究

用多核细胞法研究了 60 Coγ射线 0～ 4 .0 Gy照射诱发的体细胞 HPRT基因突变 ,探讨了其在辐射剂量估算中的适用范围和存在的问题。结果表明 ,HPRT基因突变频率 Y随照射剂量 D ( Gy)的增加而增加 ,在 0～ 4 .0 Gy剂量范围内可拟合为 Y=0 .4 0 2 2 +0 .2 710 D - 0 .0 4 60 D2 ,在 0～ 1.0 Gy低剂量范围内 ,更适于拟合直线模型 Y =0 .382 7+0 .2 94 8D;HPRT基因突变频率与染色体畸变、微核具有良好的相关性。说明 HPRT基因突变可以用于低 LET辐射剂量估算 ,尤其适用于低剂量照射引起的单基因突变检测和辐射危害评价。

多核细胞法和Brdurd法检测辐射诱发体细胞HPRT基因突变的比较研究

目的 研究放射性核素内照射诱发体细胞HPRT基因位点突变及其剂量 -效应关系 ,比较不同方法对HPRT基因位点突变的检出率。方法 给大鼠尾静脉注射晚期混合裂变产物后不同时间心脏穿刺取血。用多核细胞法和Brdurd法分别检测HPRT基因突变细胞 ,计算突变率 ,拟合出辐射诱发HPRT基因位点突变的剂量 -效应关系函数。结果 用多核细胞法检测的放射性核素内照射诱发HPRT基因位点突变率 (y ,‰ )和剂量 (D ,cSv)相关函数为y =1 14 98+0 1199lnD,r =0 970 6 ;用Brdurd法检测的相关函数为 y =6 5 310× 10 -2 +3 4 5 4 2× 10 -3 D ,r =0 984 6。多核细胞法检测HPRT基因位点突变检出率比Brdurd法高 11～ 17倍之多。结论 体细胞HPRT基因对电离辐射敏感 ,有可能作为辐射生物剂量计。

成人外周血淋巴细胞HPRT基因突变率及其影响因素的研究

目的 研究年龄范围在 2 1～ 5 0岁健康成年人外周血淋巴细胞HPRT基因位点突变率及其影响因素。方法 用多核细胞法检测淋巴细胞HPRT基因位点突变率 ,拟合HPRT基因位点突变率与年龄的相关函数。结果 成年人淋巴细胞HPRT基因位点突变率与年龄的相关函数为 :y =0 .75 5 5 +0 .0 44 0x ,r =0 .982 9(P <0 .0 5 )。吸烟对健康成人HPRT基因突变率有影响 (P <0 .0 5 ) ,而不同性别间无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 成年人HPRT基因位点突变率随年龄增长而增加 ,年递增率为 0 .0 44 0‰ ;吸烟对HPRT基因突变有影响 ,而性别则无影响。

hprt基因突变对宫颈癌放疗损伤的评估

目的:探讨hprt基因突变对宫颈癌放疗损伤的评估作用。方法:取15例宫颈鳞癌放疗患者放疗前及放疗累积剂量为10～60Gy时的外周静脉血,采用多核细胞法检测hprt基因突变率。结果:在照射累积剂量为30、40和50Gy时,hprt基因突变率在照射后升高,与照射前相比,差别有统计学意义(P<0.05)。当累积剂量达60 Gy时,hprt基因突变率虽然较照射前升高,但差别无统计学意义(P>0.05)。在0～40 Gy,hprt基因突变率基本呈线形上升,且突变率与累积剂量间呈现较好的剂量-效应关系(r=0.900,P<0.05)。回归方程为y=0.459+0.014x。结论:在累积剂量0～40 Gy范围内,hprt基因突变率在放疗后明显升高,呈现良好的剂量-效应关系,可用于评价放疗造成的损伤,是具有应用潜质的生物剂量计。

克隆法研究辐射诱发人外周血淋巴细胞HPRT基因突变

本文目的是用克隆法研究γ射线诱发人外周血淋巴细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸抗糖转移酶(HPRT)基因突变的量效关系。从健康成年人外周血分离淋巴细胞 ,每份分成两等份 ,其中一份加滋养细胞 ,另一份不加滋养细胞 ,种于 96孔板 ,进行淋巴细胞的克隆和突变细胞的筛选 ,比较二者结果 ;剂量效应关系实验为取一健康成年男子外周血 2 5mL分成 5等份 ,分别用 0、1、2、4和 6Gy照射 ,分离淋巴细胞 ,种于 96孔板 ,不加滋养细胞条件下观察淋巴细胞的克隆效率和HPRT基因突变频率的变化。结果表明加滋养细胞组的克隆效率高于不加滋养细胞组 (p <0 0 1 ) ,但二者HPRT基因突变频率无差别 (p >0 0 5 )。在一定剂量范围内 ,人外周血淋巴细胞克隆效率与照射剂量呈负相关 。

氡及其子体诱发大鼠体细胞HPRT基因位点的突变

[目的]用多核细胞法研究氡及其子体诱发大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)基因位点突变情况。[方法]Wistar雄性大鼠24只,采用HD-3型多功能移动式氡室进行动态吸入染毒,按照氡染毒的累计暴露量,分为3个实验组和1个对照组;获取大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞,以多核细胞法检测该两种细胞的HPRT基因突变频率。[结果]大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞的HPRT基因突变频率均随氡累积暴露剂量的增加而相应增加,剂量-效应关系明显,拟合的函数分别为(?)=1.785×10^(-5)D^2+ 1.174×10^(-3)D+1.054和(?)=3.538×10^(-5)D^2+8.338×10^(-4)D+1.032。[结论]氡及其子体能诱发大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞的HPRT基因突变,呈现一定的剂量-效应关系。

鼻咽癌患者外周血淋巴细胞HPRT基因位点突变率的研究

目的 研究鼻咽癌患者外周血淋巴细胞HPRT基因突变率及其影响因素。方法 应用多核细胞法检测外周血淋巴细胞HPRT基因突变率。结果 鼻咽癌患者HPRT基因突变率高于健康成人 (P <0 .0 5 ) ,吸烟和性别可影响鼻咽癌患者HPRT基因突变率 (P <0 .0 5 ) ,而年龄的影响不明显 (P >0 .0 5 )。结论 遗传损伤在鼻咽癌发病中具有重要意义 ,不同肿瘤患者应有不同的HPRT基因突变率本底值。

放射治疗对宫颈癌病人DNA损伤及hprt基因突变的初步研究

目的:评价放射治疗对宫颈癌患者造成的遗传学损伤。方法:取15例宫颈鳞癌放疗患者放疗前及放疗累积剂量为0Gy、10Gy、20Gy、30Gy、40Gy、50Gy、60Gy时的外周静脉血,以彗星实验检测淋巴细胞的DNA损伤,采用多核细胞法测hprt基因位点突变率。结果:各累积剂量组淋巴细胞DNA拖尾率比照射前显著升高(P<0.01),并且在0-60Gy之间,拖尾率与累积照射剂量之间成线性关系。各累积剂量组尾长比照射前均增加(P<0.01),在照射剂量累积30Gy时,尾长均值达最大。尾长与累积剂量间不成线性关系。hprt基因位点突变率在照射后升高,与照射前相比,在照射累积剂量为30Gy、40Gy和50Gy时,显示有统计学意义差别(P<0.05)。hprt基因突变率与累积剂量间呈现较好的剂量-效应关系。结论:宫颈癌患者放疗后造成外周血淋巴细胞DNA损伤及hprt基因突变,hprt基因突变和彗星实验用于评价放疗造成的损伤,具有较高的敏感性。

用BrdU法研究放射性核素内照射诱发大鼠体细胞HPRT基因突变

目的 研究晚期混合裂变产物内照射诱发Wistar大鼠外周血淋巴细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)基因突变情况。方法 将晚期混合裂变产物自尾静脉注入 ,再用 5 -溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)法测定HPRT基因的突变频率。结果 随着内照射剂量的增加 ,大鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变频率也不断上升 ,内照射剂量在 10 .178cSv以上的各组与对照组均有显著差异 (P <0 .0 1)。剂量效应关系符合线性模型。结论 BrdU法是一种快速、简便、较准确的测定放射性核素内照射损伤的方法 ,HPRT基因突变可作为一种很好的生物剂量计。

局部放射治疗诱发肿瘤患者外周血淋巴细胞HPRT基因突变与染色体畸变的研究

目的研究放射治疗对患者外周血淋巴细胞HPRT基因突变的剂量效应关系,并与染色体畸变剂量效应关系进行比较。方法选取未曾化疗、放疗的头颈肿瘤患者,分别于放疗前和照射后4、10、28、48和68Gy采集PBL进行微核率PBL染色体畸变和HPRT基因突变检测。结果PBL胞质分裂阻滞微核率和PBLHPRT基因突变率在照射后均显著增加,并随剂量累积而增加;PBL染色体畸变率在照射10Gy后显著增高。染色体畸变类型以断片为主,并出现了双着丝粒体、环状染色体和微小体等畸变类型。结论局部放射治疗对患者造成了明显的遗传损害,且与放射剂量有明显相关性。

影响检测HPRT基因突变率的因素探讨

恶性肿瘤的发生、发展与突变事件密切相关,检出人类在环境中接触的突变剂依赖于致突变试验。以次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因为报告基因的HPRT突变试验就是其中几个重要的致突变试验之一,由于其本身所具有的独特生物学特性,逐渐成为基因突变机制和修复机制理想的研究靶点,HPRT基因突变分析法也逐渐成为很有价值并被广泛应用的生物剂量计。但是,HPRT基因突变率的检测也受诸多因素影响,例如高剂量时,射线造成的已不仅仅是单基因损伤,另外,HPRT自发突变频率受年龄、样本数量等的影响。因此,HPRT基因突变频率已不能完全反映损伤程度与剂量之间的关系。

辐射诱导造血祖细胞(GM-CFU)的 HPRT 基因突变

研究了单次和分次１３７Ｃｓγ射线照射所致辐射残留损伤小鼠骨髓粒、巨噬系造血祖细胞（ＧＭＣＦＵ）的ＨＰＲＴ基因突变。结果证明单次照射时突变频率与照射剂量密切相关。总剂量相同的分次照射与单次照射的结果未见差异。辐射防护药ＷＲ２７２１对ＨＰＲＴ基因突变有防护作用。

X射线工作者体细胞HPRT基因位点突变频率的测定与分析

采用多核细胞法检测了３０例Ｘ线工作者的体细胞ＨＰＲＴ基因突变频率，并根据Ｘ线诱发的人体细胞ＨＰＲＴ基因位点突变剂量效应刻度曲线，推算了受照者的累积剂量和年剂量当量，对其工龄与突变率的关系等进行了分析。