转hrpZ_(Psta)基因大豆株系的分子鉴定及其抗疫霉根腐病分析

以T_(7)、T_(8)代转hrpZ_(Psta)基因大豆株系JN29-705-21为供试材料,通过分子鉴定和室内人工接种疫酶菌进行抗病性分析。常规PCR结果表明:在T_(7)、T_(8)代转基因株系中均检测到转化的目的基因hrpZ_(Psta)、筛选标记Badh,启动子35S和终止子Nos,表明hrpZ_(Psta)基因在高世代转基因株系中能够稳定遗传;Southern杂交结果显示:hrpZPsta基因以单拷贝的形式整合到大豆基因组中,且整合位点不同;qRT-PCR检测结果表明:hrpZ_(Psta)基因在转化株系的根、茎、叶中均有表达,其中在叶中表达量最高,在茎中表达量最低,T_(7)代株系的根、茎、叶平均相对表达量分别为2.800,1.772,8.367,T_(8)代株系的根、茎、叶平均相对表达量分别为3.028,1.650,9.036;利用下胚轴侵染法对转化株系进行抗病鉴定分析,结果显示,转基因株系后代对疫霉根腐病的抗病级别为抗病,而非转基因受体株系抗性为中抗,表明转基因株系的抗病能力得到了提高。

抗病基因hrpZ_(Psta)转大豆‘吉农18’后代对疫霉根腐病的抗性分析

本试验以T7、T8代转基因株系JN18-hrpZ_(Psta)-45为试验材料,运用常规PCR技术、Southern杂交及qRT-PCR技术对T7、T8代大豆株系进行分子检测和稳定性鉴定,随即以下胚轴侵染法为理论依据完成疫霉根腐病抗性鉴定,同时分析其抗病性。结果表明:终止子Nos、启动子35S、筛选标记Bar的目的条带和转化的目的基因在T7、T8代转基因株系中被全部测获;Southern印迹杂交证实:目的基因在大豆基因组中以单拷贝方式完成整合;qRT-PCR检测证实:植株籽粒、叶、茎、根全部有目的基因表达,T7代株系的根、茎、叶、籽粒相对表达量均值分别为2.45、1.73、2.52、1.91,T8代株系的根、茎、叶、籽粒相对表达量均值分别为3.22、2.04、3.46、2.75,证实茎中的表达量最低、叶中最高,以抗病性标准为依据展开对照可以获得如下抗病性鉴定结论:转、非转基因二者的抗病级别分别为高抗、中抗。