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hsBLyS分泌型表达载体构建及CHO表达
被引量:
1
1
作者
吴海涛
胡云龙
+3 位作者
刁振宇
金丽娜
李洁
张双全
《南京师大学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
2004年第2期81-86,共6页
本实验引物延伸合成人红细胞生成素信号肽序列 ;信号肽序列和人可溶性B淋巴细胞刺激因子 (hu mansolubleBLymphocyteStimulator,hsBLyS)基因重叠延伸拼接成融合基因 ;融合基因插入pcDNA3、pcDNA3 1、pEFneo质粒 ;信号肽引物设计时 ,突...
本实验引物延伸合成人红细胞生成素信号肽序列 ;信号肽序列和人可溶性B淋巴细胞刺激因子 (hu mansolubleBLymphocyteStimulator,hsBLyS)基因重叠延伸拼接成融合基因 ;融合基因插入pcDNA3、pcDNA3 1、pEFneo质粒 ;信号肽引物设计时 ,突变同义密码 ,最终重组质粒成为分泌表达质粒 ;磷酸钙共沉淀将表达质粒和标志质粒pSV dhfr,共转染CHO—dhfr- 细胞 ;选择培养液筛选 ,氨甲喋呤扩增表达 ,获稳定表达rhsBLyS细胞株 ;ELISA检测浓缩表达上清 ,结果表明 :rhsBLyS表达量由 0 13 μg/mL上升至 0 5 5 μg/mL .
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关键词
hsblys
CHO
基因表达
信号肽
分泌型表达载体
免疫调节因子
下载PDF
职称材料
hsBLyS基因在中国仓鼠卵巢细胞中的表达及其在免疫小鼠中诱发的抗体反应
2
作者
吴海涛
吴玉蓉
+4 位作者
胡云龙
刁振宇
金丽娜
李洁
张双全
《动物学报》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期130-137,共8页
为建立稳定表达人可溶性B淋巴细胞刺激因子(hsBLyS)的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系,从人胎盘cDNA文库中扩增hsBLyS基因,将人红细胞生成素(EPO)信号肽序列和hsBLyS基因重叠延伸为融合基因;融合基因分别插入pcDNA3、pcDNA3.1、pEFneo质粒;磷...
为建立稳定表达人可溶性B淋巴细胞刺激因子(hsBLyS)的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系,从人胎盘cDNA文库中扩增hsBLyS基因,将人红细胞生成素(EPO)信号肽序列和hsBLyS基因重叠延伸为融合基因;融合基因分别插入pcDNA3、pcDNA3.1、pEFneo质粒;磷酸钙共沉淀将表达质粒和标志质粒pSVdhfr,共转染CHOdhfr细胞;选择培养液筛选,经氨甲喋呤选择压力扩增表达,获稳定表达hsBLyS的细胞系,表达量由0.13μg/ml上升至0.55μg/ml;同时利用pEFneo/hsBLyS重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测结果表明小鼠产生hsBLyS的特异性抗体。本实验建立了稳定表达hsBLyS的CHO细胞系,对其基因免疫小鼠抗体产生的特点做了初步探讨。
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关键词
hsblys
中国仓鼠
卵巢细胞
真核分泌表达
基因免疫
抗体反应
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职称材料
人B淋巴细胞刺激因子的可溶性功能区(hsBLys)的克隆、表达及分离纯化
3
作者
刘俊红
吴一凡
张双全
《芜湖师专学报》
2003年第2期95-98,共4页
在已有的pET30a/hs表达载体的基础上,构建了原核表达载体pET30a/hsBLYS(His6)、经双酶切分析和DNA测序后,转化入表达宿主大肠杆菌M15,IPTG诱导后得到高效表达(目的蛋白约占总菌蛋白的35%);表达产物大部分以包含体形式存在。采用本...
在已有的pET30a/hs表达载体的基础上,构建了原核表达载体pET30a/hsBLYS(His6)、经双酶切分析和DNA测序后,转化入表达宿主大肠杆菌M15,IPTG诱导后得到高效表达(目的蛋白约占总菌蛋白的35%);表达产物大部分以包含体形式存在。采用本室自行研制的Ni^2+亲和层析胶(Ni^2+—IDA)纯化可溶部分的重组融合蛋白,经SDS—PAGE鉴定为单一条带。
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关键词
人B淋巴细胞刺激因子
可溶性功能区
hsblys
分离纯化
克隆
诱导表达
亲和层析
免疫学
细胞因子
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职称材料
人B淋巴细胞刺激因子的真核表达以及表达条件的筛选
被引量:
2
4
作者
戴君勇
张双全
刘平
《南京师大学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
2001年第2期87-90,共4页
采用基因克隆、重组等方法 ,将人B淋巴细胞刺激因子 (hsBLyS)基因片段从人胎盘cDNA文库中克隆出来 ,测序鉴定后重组构建成真核表达载体pcDNA3.1(+) /hsBLyS .然后用磷酸钙法和脂质体法分别转染真核宿主细胞COS 7,并在其中表达 48h、36h...
采用基因克隆、重组等方法 ,将人B淋巴细胞刺激因子 (hsBLyS)基因片段从人胎盘cDNA文库中克隆出来 ,测序鉴定后重组构建成真核表达载体pcDNA3.1(+) /hsBLyS .然后用磷酸钙法和脂质体法分别转染真核宿主细胞COS 7,并在其中表达 48h、36h、72h、96h ;表达细胞经超声处理后离心 ,上清进行SDS PAGE鉴定 .结果表明 :对于hsBLyS来说 ,磷酸钙法比脂质体法转染效果好 ,而且对于磷酸钙法 ,表达量是 72h达到最高 .
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关键词
CDNA文库
脂质体法
真核表达
COS-7
hsblys
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职称材料
题名
hsBLyS分泌型表达载体构建及CHO表达
被引量:
1
1
作者
吴海涛
胡云龙
刁振宇
金丽娜
李洁
张双全
机构
南京师范大学生命科学学院
出处
《南京师大学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
2004年第2期81-86,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目 ( 3 0 2 70 193 ) .
文摘
本实验引物延伸合成人红细胞生成素信号肽序列 ;信号肽序列和人可溶性B淋巴细胞刺激因子 (hu mansolubleBLymphocyteStimulator,hsBLyS)基因重叠延伸拼接成融合基因 ;融合基因插入pcDNA3、pcDNA3 1、pEFneo质粒 ;信号肽引物设计时 ,突变同义密码 ,最终重组质粒成为分泌表达质粒 ;磷酸钙共沉淀将表达质粒和标志质粒pSV dhfr,共转染CHO—dhfr- 细胞 ;选择培养液筛选 ,氨甲喋呤扩增表达 ,获稳定表达rhsBLyS细胞株 ;ELISA检测浓缩表达上清 ,结果表明 :rhsBLyS表达量由 0 13 μg/mL上升至 0 5 5 μg/mL .
关键词
hsblys
CHO
基因表达
信号肽
分泌型表达载体
免疫调节因子
Keywords
hsblys
, Signal peptide, CHO, Secreting expression
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
hsBLyS基因在中国仓鼠卵巢细胞中的表达及其在免疫小鼠中诱发的抗体反应
2
作者
吴海涛
吴玉蓉
胡云龙
刁振宇
金丽娜
李洁
张双全
机构
南京师范大学生命科学学院江苏省分子医学生物技术重点实验室
出处
《动物学报》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2006年第1期130-137,共8页
基金
国家自然科学基金(No.30270193)~~
文摘
为建立稳定表达人可溶性B淋巴细胞刺激因子(hsBLyS)的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系,从人胎盘cDNA文库中扩增hsBLyS基因,将人红细胞生成素(EPO)信号肽序列和hsBLyS基因重叠延伸为融合基因;融合基因分别插入pcDNA3、pcDNA3.1、pEFneo质粒;磷酸钙共沉淀将表达质粒和标志质粒pSVdhfr,共转染CHOdhfr细胞;选择培养液筛选,经氨甲喋呤选择压力扩增表达,获稳定表达hsBLyS的细胞系,表达量由0.13μg/ml上升至0.55μg/ml;同时利用pEFneo/hsBLyS重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测结果表明小鼠产生hsBLyS的特异性抗体。本实验建立了稳定表达hsBLyS的CHO细胞系,对其基因免疫小鼠抗体产生的特点做了初步探讨。
关键词
hsblys
中国仓鼠
卵巢细胞
真核分泌表达
基因免疫
抗体反应
Keywords
hsblys
, CHO-dhfr-, Secretory expression, Gene immunization
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
人B淋巴细胞刺激因子的可溶性功能区(hsBLys)的克隆、表达及分离纯化
3
作者
刘俊红
吴一凡
张双全
机构
南京师范大学生命科学学院
出处
《芜湖师专学报》
2003年第2期95-98,共4页
文摘
在已有的pET30a/hs表达载体的基础上,构建了原核表达载体pET30a/hsBLYS(His6)、经双酶切分析和DNA测序后,转化入表达宿主大肠杆菌M15,IPTG诱导后得到高效表达(目的蛋白约占总菌蛋白的35%);表达产物大部分以包含体形式存在。采用本室自行研制的Ni^2+亲和层析胶(Ni^2+—IDA)纯化可溶部分的重组融合蛋白,经SDS—PAGE鉴定为单一条带。
关键词
人B淋巴细胞刺激因子
可溶性功能区
hsblys
分离纯化
克隆
诱导表达
亲和层析
免疫学
细胞因子
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
人B淋巴细胞刺激因子的真核表达以及表达条件的筛选
被引量:
2
4
作者
戴君勇
张双全
刘平
机构
南京师范大学生命科学学院
出处
《南京师大学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
2001年第2期87-90,共4页
文摘
采用基因克隆、重组等方法 ,将人B淋巴细胞刺激因子 (hsBLyS)基因片段从人胎盘cDNA文库中克隆出来 ,测序鉴定后重组构建成真核表达载体pcDNA3.1(+) /hsBLyS .然后用磷酸钙法和脂质体法分别转染真核宿主细胞COS 7,并在其中表达 48h、36h、72h、96h ;表达细胞经超声处理后离心 ,上清进行SDS PAGE鉴定 .结果表明 :对于hsBLyS来说 ,磷酸钙法比脂质体法转染效果好 ,而且对于磷酸钙法 ,表达量是 72h达到最高 .
关键词
CDNA文库
脂质体法
真核表达
COS-7
hsblys
Keywords
cDNA library
lipofection
eukaryotic expression
COS*.7
hsblys
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
hsBLyS分泌型表达载体构建及CHO表达
吴海涛
胡云龙
刁振宇
金丽娜
李洁
张双全
《南京师大学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
2004
1
下载PDF
职称材料
2
hsBLyS基因在中国仓鼠卵巢细胞中的表达及其在免疫小鼠中诱发的抗体反应
吴海涛
吴玉蓉
胡云龙
刁振宇
金丽娜
李洁
张双全
《动物学报》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
下载PDF
职称材料
3
人B淋巴细胞刺激因子的可溶性功能区(hsBLys)的克隆、表达及分离纯化
刘俊红
吴一凡
张双全
《芜湖师专学报》
2003
0
下载PDF
职称材料
4
人B淋巴细胞刺激因子的真核表达以及表达条件的筛选
戴君勇
张双全
刘平
《南京师大学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
2001
2
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