hsMAD2基因及Nocodazole对人肝癌细胞生长和细胞周期的影响

目的观察hsMAD2过表达以及联合Nocodazole处理对HepG2细胞的生长和细胞周期的影响。方法将人全长hs-MAD2基因经脂质体包裹转染肝细胞肝癌HepG2细胞,经G418筛选期获得转基因癌细胞克隆,采用免疫细胞化学法、Westernblot方法检测hsMAD2的表达情况。观察细胞形态、测量生长曲线和分裂指数曲线,观察hsMAD2基因对HepG2细胞生长和细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测HepG2细胞周期的变化。然后观察在纺锤体阻滞剂50nmol/L Nocodazole作用下,hs-MAD2对HepG2细胞的影响。结果稳定表达外源性hsMAD2蛋白的HepG2细胞生长速度和细胞增殖能力并无变化;流式细胞仪检测结果显示HepG2-hsMAD2细胞周期G2、S期比例增加,而G1期细胞比例下降,但差异无显著性。经过nocodazole处理后,HepG2-hsMAD2细胞生长速度下降,差异具有显著性,细胞周期出现G2期阻滞。相反,HepG2在受到Nocodazole处理后无明显变化。结论单纯过表达外源性hsMAD2对细胞无影响。由于hsMAD2蛋白发挥了细胞周期关卡作用,使受到No-codazole破坏作用的细胞出现细胞周期的阻滞。

结肠癌中有丝分裂关卡基因hsMAD2表达的分析

目的:研究结肠癌组织中有丝分裂关卡基因HsMAD2的表达。方法:采用定量real-timeRT-PCR方法检测18例结肠癌及正常结肠组织中hsMAD2基因表达水平。结果:以hsMAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数比值为hs-MAD2基因mRNA水平的相对定量值。结肠癌和正常组织中的hsMAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数比值分别为0.1235±0.0752和0.0312±0.0598。hsMAD2基因的表达水平在结肠癌中显著高于正常结肠组织。结论:hsMAD2基因在结肠癌组织中的高表达,可能与癌细胞的异常增殖有关,是结肠癌发生发展的原因,可为临床结肠癌的治疗提供有效的靶点。