hsa-let-7a-5p调控牙周膜干细胞增殖及凋亡

目的探讨hsa-let-7a-5p对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖及凋亡的影响。方法将let-7a-5p mimics、mimics nc、let-7a-5p inhibitor、inhibitor nc转染进入PDLSCs,通过RT-qPCR测定转染效率,通过CCK-8、细胞周期、EdU实验检测let-7a-5p对PDLSCs增殖的影响,通过细胞凋亡实验检测PDLSCs的凋亡率。结果let-7a-5p成功转染进入PDLSCs。let-7a-5p mimics可抑制PDLSCs增殖能力(P<0.05),促进PDLSCs凋亡(P<0.01)。let-7a-5p inhibitor可促进PDLSCs增殖能力(P<0.05),抑制PDLSCs凋亡(P<0.01)。结论hsa-let-7a-5p可抑制PDLSCs增殖,促进PDLSCs凋亡。

hsa-Let-7a-5p靶向结合TGF-βR1抑制局限性硬皮病成纤维细胞纤维化

目的探讨hsa-Let-7a-5p对局限性硬皮病成纤维细胞(LSFs)纤维化过程的影响及其与转化生长因子-β受体(TGF-βR)和TGF-β/Smad信号通路的关系。方法将携带hsa-Let-7a-5p和shTGF-βR1的慢病毒载体及空白慢病毒载体感染LSFs。CCK-8法和划痕实验检测各组LSFs的增殖和迁移情况。RT-qPCR、免疫荧光和Western blot检测转染的效率以及各组LSFs的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-βR1、TGF-β、p-Smad2/3的mRNA和蛋白表达水平。结果病毒感染LSFs后,shTGF-βR1组的TGF-βR1表达量明显低于对照组(P<0.05);shTGF-βR1组的细胞增殖率、迁移能力均有所降低;shTGF-βR1组的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-β、p-Smad2/3的mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(P<0.05)。生物信息学分析表明hsa-Let-7a-5p可以与TGF-βR13′-UTR的靶区位置配对,hsa-Let-7a-5p慢病毒转染组的hsa-Let-7a-5p表达量明显高于对照组(P<0.05),TGF-βR1表达量明显降低(P<0.05)。hsa-Let-7a-5p组的细胞增殖率、迁移能力均有所降低;hsa-Let-7a-5p组的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-β、p-Smad2/3的mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(P<0.05)。结论hsa-Let-7a-5p在体外通过靶向结合TGF-βR1调控TGF-β/Smad通路,抑制LSFs增殖与迁移,降低LSFs的纤维化标志物,从而抑制局限性硬皮病的纤维化。

Hsa-let-7b-5p抑制非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭

目的探讨hsa-let-7b-5p在非小细胞肺癌临床诊断和靶向治疗中的价值。方法收集2020年9月-10月的13对哈尔滨医科大学附属肿瘤医院病理类型相同的非小细胞肺癌癌组织及其癌旁组织,通过RNA-Seq获得差异表达的miRNA,并通过qRT-PCR验证候选miRNA在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达水平。通过CCK-8法、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验验证miRNA对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭能力的影响。利用MiRDB、TarBase和ENCORI数据库预测靶基因,并利用FunRich工具进行基因富集分析。结果与癌旁组织及正常支气管上皮细胞系(Human bronchial epithelial cell,HBE)相比,hsa-let-7b-5p在非小细胞肺癌组织及非小细胞肺癌细胞系(A549、H1299、H358和H460)中低表达(P<0.05)。hsa-let-7b-5p的高表达可以抑制非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭能力(P<0.01)。靶基因预测及富集分析结果显示hsa-let-7b-5p的378个靶基因及其相关基因中,147个基因与hsa-let-7b-5p的表达呈负相关(P<0.05)。结论Hsa-let-7b-5p对非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭有抑制作用。

地西泮通过let-7a-5p/MYD88轴抑制LPS诱导的细胞焦亡和炎症从而缓解小鼠肺纤维化

目的探讨地西泮(Dia)如何通过介导let-7a-5p与MYD88之间的靶向调控作用,来减轻由脂多糖(LPS)诱导的细胞焦亡和炎症反应,从而缓解肺纤维化的进程。方法MRC-5细胞分为正常对照组(NC)、LPS组、LPS+Dia组,LPS+Dia+let-7a-5p mimic组、LPS+Dia+let-7a-5p mimic+pc-DNA-MYD88组。RT-qPCR检测let-7a-5p和MYD88的表达。ELISA检测炎症因子的表达,Western blotting检测纤维化和焦亡相关蛋白的表达。C57BL/6小鼠随机分为NC组、LPS组、LPS+Dia、LPS+Dia+let-7a-5p mimic组、LPS+Dia+ST2825(MYD88抑制剂)组、LPS+Dia+let-7a-5p mimic+pc-DNA-MYD88组。Masson染色观察小鼠肺纤维化,免疫荧光检测α-SMA的表达。结果与NC组比较,LPS组let-7a-5p的表达下调(P<0.01),MYD88的表达上调(P<0.01)。炎症相关因子IL-4、IL-6、TGF-β和TNF-α的浓度均升高(P<0.001),此外,纤维化相关蛋白Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA和细胞焦亡相关蛋白NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD-N的表达量也升高(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+Dia组有效抑制了炎症相关因子、纤维化相关蛋白、细胞焦亡相关蛋白的表达。动物实验中,与LPS组相比,LPS+Dia组小鼠肺组织纤维化程度降低,α-SMA相对荧光密度降低(P<0.05)。此外,与LPS+Dia组相比,LPS+Dia+let-7a-5p mimic组或LPS+Dia+ST2825的处理进一步促进了Dia的作用(P<0.05)。而过表达MYD88又削弱了let-7a-5p mimic对Dia的作用(P<0.05)。结论Dia可以通过上调let-7a-5p的表达负调控MYD88抑制LPS诱导的细胞焦亡和炎症反应从而缓解肺纤维化。

血清miR-33a-5p、SMAD7水平与视网膜静脉阻塞患者视力预后的关系

目的观察视网膜静脉阻塞患者血清微小核糖核酸-33a-5p(miR-33a-5p)、SMAD同源物7(SMAD7)水平变化,并探讨二者与视力预后的关系。方法选择视网膜静脉阻塞患者108例(观察组),同期体检健康的志愿者108例(对照组),采集所有研究对象清晨空腹外周静脉血,离心留取血清,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测血清miR-33a-5p,采用ELISA法检测血清SMAD7。比较两组血清miR-33a-5p、SMAD7水平,分析视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p、SMAD7水平的关系。所有视网膜静脉阻塞患者予雷珠单抗玻璃体腔内注射治疗。治疗3个月,评估视力,其中预后不良57例、预后良好51例。采用多因素Logistic回归模型分析视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-33a-5p、SMAD7水平对视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的预测价值。结果观察组血清miR-33a-5p水平低于对照组,血清SMAD7水平高于对照组(t分别为13.362、38.657,P均<0.01)。Pearson相关分析显示,视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p水平与血清SMAD7水平呈负相关(r=-0.649,P<0.05)。单因素分析显示,视网膜静脉阻塞患者视力预后不良者合并高血压、高血脂比例和有并发症比例以及血清SMAD7水平均高于其预后良好者(χ^(2)/t分别为13.412、7.342、10.095、6.394,P均<0.05),血清miR-33a-5p水平低于其预后良好者(t=7.373,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高和合并高血压、高血脂以及有并发症是视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的独立危险因素(OR分别为0.683、3.843、2.146、1.463、2.773,P均<0.05)。血清miR-33a-5p、SMAD7水平预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.870、0.869,二者联合预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的AUC为0.938。血清miR-33a-5p、SMAD7水平联合预测视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的AUC高于二者单独(Z分别为2.419、2.422,P均<0.05)。结论视网膜静脉阻塞患者血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高;血清miR-33a-5p水平降低、血清SMAD7水平升高是视网膜静脉阻塞患者视力预后不良的独立危险因素;血清miR-33a-5p、SMAD7水平对视网膜静脉阻塞患者视力预后不良均有一定预测价值,二者联合预测价值更高。

miR-30a-5p靶向E2F7阻滞A549细胞周期并抑制其增殖

目的探究miR-30a-5p靶向E2F7调控非小细胞肺癌细胞周期和增殖的机制。方法通过荧光定量(qRT-PCR)验证miR-30a-5p在非小细胞肺癌A549细胞与人正常肺上皮细胞BEAS-2B中的相对表达水平。在线软件预测了miR-30a-5p的靶基因及其靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-30a-5p和E2F7 mRNA 3’UTR区域的靶向关系。其次在A549细胞中分别转染miR-30a-5p模拟物(miR-30a-5p mimics)和miR-30a-5p抑制剂(miR-30a-5p inhibitor),应用CCK-8细胞计数试剂盒检测A549细胞增殖情况,流式细胞术检测A549细胞凋亡和细胞周期。qRT-PCR和免疫印迹检测细胞周期相关基因和肺腺癌相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果miR-30a-5p在A549细胞中表达水平低于BEAS-2B,且miR-30a-5p靶向结合与E2F7 mRNA 3’UTR 514-520位点,抑制E2F7表达。转染miR-30a-5p mimics抑制A549细胞增殖,并促进A549凋亡。将A549细胞周期阻滞在G 1期。调控肺腺癌相关基因TFDP3、CDK1、E2F8、CCNA2和CDC6的mRNA和蛋白表达水平。结论非小细胞肺癌A549细胞中miR-30a-5p通过靶向负调控E2F7的表达,调控TFDP3、CDK1、E2F8、CCNA2和CDC6的mRNA和蛋白表达,抑制A549细胞增殖和细胞周期。

血清微小RNA-7a-5p及前蛋白转化酶枯草溶菌素9水平与急性胰腺炎患者病情严重程度及预后的关系

目的分析血清微小RNA-7a-5p(miR-7a-5p)、前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)水平与急性胰腺炎(AP)患者病情严重程度及预后的关系。方法选取2020年1月至2022年1月重庆医科大学附属巴南医院收治的185例AP患者为AP组,另选取同期本院体检健康者53例为对照组。AP患者根据病情严重程度分为轻症组(81例)、中度重症组(53例)、重症组(51例)。收集AP患者的临床资料,检测所有受试者血清miR-7a-5p、PCSK9水平。分析AP患者预后不良的危险因素以及血清miR-7a-5p、PCSK9水平单独与联合预测AP患者预后不良的价值。结果AP组血清miR-7a-5p、PCSK9水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.001)。轻症组、中度重症组、重症组血清miR-7a-5p、PCSK9水平逐渐升高[miR-7a-5p:(2.12±0.43)、(2.51±0.33)、(3.00±0.43);PCSK9:(36.1±2.6)、(38.6±2.2)、(41.3±2.2)μg/L],差异均有统计学意义(均P<0.001)。多因素Logistic回归分析显示,重症AP、重症监护病房停留时间延长和红细胞体积分布宽度、血肌酐、C反应蛋白、miR-7a-5p、PCSK9水平升高为AP患者预后不良的独立危险因素(均P<0.05)。受试者工作特征曲线分析显示,血清miR-7a-5p、PCSK9水平单独与联合预测AP患者预后不良的曲线下面积分别为0.780、0.773、0.877,二者联合预测AP患者预后不良的曲线下面积大于单独预测(均P<0.05)。结论AP患者血清miR-7a-5p、PCSK9水平升高与病情严重程度和预后不良有关,二者联合对AP患者预后不良的辅助预测价值较高。

外泌体lncRNA-HEIH和let-7a-5p水平在丙型肝炎病毒相关性肝癌患者中的检测及在预后评估中的价值

目的探讨外泌体长链非编码RNA-HEIH(lncRNA-HEIH)和let-7a-5p在丙型肝炎病毒相关性肝癌(C-HCC)患者中的表达及预后评估中的价值。方法将2015年1月至2017年1月该院收治的76例C-HCC患者纳入研究作为C-HCC组,另选取43例由丙型肝炎病毒(HCV)感染导致的肝硬化(HC)患者作为HC组,52例HCV感染者作为HCV组,55例体检健康者作为对照组。外泌体lncRNA-HEIH和let-7a-5p水平检测采用实时荧光定量PCR(qPCR)。采用Pearson相关分析lncRNA-HEIH与let-7a-5p水平的关系。利用Kaplan-Meier法分析外泌体lncRNA-HEIH、let-7a-5p水平高低与C-HCC患者预后的关系。采用COX回归分析C-HCC患者预后的影响因素。结果外泌体lncRNA-HEIH水平在对照组、HCV组、HC组、C-HCC组中依次升高,let-7a-5p水平依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析发现,lncRNA-HEIH、let-7a-5p呈负相关关系(r=-0.628,P<0.05)。外泌体lncRNA-HEIH、let-7a-5p水平与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤最大径、甲胎蛋白(AFP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平有关(P<0.05)。Kaplan-Meier法分析表明,lncRNA-HEIH高表达组5年生存预后差于低表达组,let-7a-5p高表达组5年生存预后好于低表达组(P<0.05)。多因素COX回归分析显示,TNM分期、AFP、lncRNA-HEIH、let-7a-5p是C-HCC患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论C-HCC患者外泌体lncRNA-HEIH和let-7a-5p表达异常,其水平与患者临床病理特征存在密切关系,对患者预后评估有一定价值。

circPVT1通过miR-24-3p/let-7a-5p/FSCN1轴促进鼻咽癌细胞侵袭迁移

目的鼻咽癌是一种来源于鼻咽上皮的恶性肿瘤,其临床特征之一是易发生淋巴转移,但是目前鼻咽癌转移的分子机制尚未阐明。circPVT1是由PVT1基因2号外显子反向拼接形成的环状RNA(circRNA),在多种肿瘤中表达上调,本文探讨了circPVT1在鼻咽癌侵袭迁移中的作用和分子机制。方法通过RT-qPCR检测circPVT1及其下游miRNA和FSCN1在鼻咽癌细胞的表达情况,Transwell和划痕愈合实验检测circPVT1对鼻咽癌细胞侵袭迁移的影响,RNA pull-down实验检测circPVT1结合的miRNA,双荧光素酶报告实验检测miR-24-3p和let-7a-5p靶向抑制FSCN1 mRNA表达。结果在鼻咽癌细胞中过表达circPVT1可以促进鼻咽癌细胞侵袭迁移,而敲低circPVT1则可以抑制鼻咽癌细胞的侵袭迁移。进一步研究发现,circPVT1可以通过竞争性吸附miR-24-3p和let-7a-5p,上调FSCN1的表达,从而促进鼻咽癌细胞的侵袭迁移。结论circPVT1通过miR-24-3p/let-7a-5p/FSCN1轴促进鼻咽癌细胞侵袭迁移,证实circPVT1是鼻咽癌发生发展过程中一个重要驱动因子。

miR-7a-5p负调控Rac1表达参与HepG2细胞胰岛素抵抗

目的:探讨软脂酸诱导胰岛素抵抗的HepG2细胞中微小RNA-7a-5p(microRNA-7a-5p,miR-7a-5p)是否通过调控Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)表达参与细胞胰岛素抵抗。方法:应用生物信息学分析预测其下游靶分子,构建含Rac13'端非翻译区的野生型及突变型hsa-Rac1萤光素酶报告质粒,与miR-7a-5p表达慢病毒或对照空载慢病毒共转染293T细胞,检测萤光素酶活性。HepG2细胞分为软脂酸诱导的胰岛素抵抗组和正常对照组,RT-qPCR分析两组细胞miR-RNA-7a-5p的表达,Western blot分析下游靶分子蛋白的表达。HepG2细胞分为干扰慢病毒转染组和对照慢病毒转染组,转染之后,软脂酸诱导两组细胞胰岛素抵抗,分析两组HepG2细胞中脂质堆积及葡萄糖消耗情况。结果:生物信息学预测Rac1为miR-7a-5p下游分子。野生型hsa-Rac1萤光素酶报告质粒与miR-7a-5p表达慢病毒共转染后,萤光素酶较对照组显著降低(P<0.05)。胰岛素抵抗的HepG2与对照细胞组相比,miR-7a-5p表达显著下调(P<0.05),Rac1蛋白表达显著上调(P<0.05)。较对照相比,Rac1 mRNA的表达抑制增加了胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗(P<0.05),降低了胞质内脂质堆积(P<0.05)。结论:miR-7a-5p的一个潜在靶点是Rac1。miR-7a-5p通过负调节Rac1表达参与软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。

hsa-let-7e-5p对肺腺癌细胞迁移的影响

目的筛选肺腺癌中差异表达的环状非编码RNA(miRNA),并分析其对肺腺癌(LUAD)迁移的影响及潜在机制。方法通过miRNA芯片筛选出LUAD组织和正常肺组织中差异表达的miRNA并预测其潜在的生物学功能和信号通路;通过荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和癌症基因组图谱(TCGA)分析验证hsa-let-7e-5p在LUAD组织和细胞系中的表达水平;通过划痕试验检测hsa-let-7e-5p对LUAD细胞迁移的影响;通过生物信息学分析和qRT-PCR验证hsa-let-7e-5p与基因DTX2、NME6、C8orf58、GATM和DHX57之间的靶向关系。结果miRNA芯片结果显示肺腺癌组织中347个miRNA下调而229个miRNA上调。hsa-let-7e-5p在LUAD组织和细胞系中下调,过表达hsa-let-7e-5p可以抑制肺腺癌细胞迁移。结论hsa-let-7e-5p在肺腺癌中低表达并抑制肺腺癌细胞的迁移,DTX2、NME6、C8orf58、GATM和DHX57是hsa-let-7e-5p的潜在靶基因。

LncRNA SNHG7调控miR-10a-5p影响高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤

目的:探讨长链非编码RNA SNHG7(LncRNA SNHG7)是否通过调控微小RNA-10a-5p(miR-10a-5p)的表达而参与高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤的过程。方法:体外培养人肾小管上皮细胞HK-2,随机分为8组:对照组、高糖组、高糖+pcDNA组、高糖+pcDNA-SNHG7组、高糖+anti-miR-NC组、高糖+anti-miR-10a-5p组、高糖+pcDNA-SNHG7+miR-NC组、高糖+pcDNA-SNHG7+miR-10a-5p组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SNHG7、miR-10a-5p的表达量;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证SNHG7与miR-10a-5p的靶向结合关系;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)的表达量。结果:与对照组比较,高糖组SNHG7的表达水平显著降低(P<0.05),miR-10a-5p的表达水平显著升高(P<0.05);与对照组比较,高糖组IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),Bax蛋白水平显著升高(P<0.05);与高糖+pcDNA组比较,高糖+pcDNA-SNHG7组IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);与高糖+anti-miR-NC组比较,高糖+anti-miR-10a-5p组IL-6、TNF-α水平显著降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05),Bax蛋白水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实SNHG7可靶向调控miR-10a-5p的表达及活性;与高糖+pcDNA-SNHG7+miR-NC组比较,高糖+pcDNA-SNHG7+miR-10a-5p组IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),Bax蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:SNHG7过表达可能通过靶向调控miR-10a-5p的表达从而减轻高糖诱导的肾小管上皮细胞损伤。

miR-33a-5p靶向SMAD7对血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移及细胞外基质降解的影响

目的:探究miR-33a-5p靶向SMAD7对血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移及细胞外基质降解的影响。方法:生物信息学预测靶向关系,荧光素实验进一步验证靶向关系,RT-PCR检测miR-33a-5p和SMAD7的表达,CCK-8法检测VSMC的增殖,流式检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测Ki67、PCNA、Caspase-3、Caspase-9、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。结果:PDGF-bb处理能够增强血管平滑肌细胞增殖,抑制miR-33的表达;miR-33a-5p与SMAD7在3′UTR区存在结合位点,miR-33a-5p直接靶向作用于SMAD7,且miR-33a-5p过表达抑制SMAD7的表达;miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb诱导的血管平滑肌细胞增殖、下调增殖标记蛋白PCNA和Ki67表达,促进细胞凋亡、上调凋亡标记蛋白Caspase-3和Caspase-9的表达,降低伤口愈合率、抑制细胞迁移,下调MMP-2和MMP-9的表达(P<0.01)。结论:miR-33a-5p靶向SMAD7抑制PDGF-bb诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质的降解,并促进凋亡。

胃癌患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达及其临床意义

目的 检测胃癌患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达,并探讨其临床意义。方法 选取180例初诊胃癌患者(癌症组)和153名健康志愿者对照组。取外周血检测血清miR-20a-5p、miR let-7a表达;比较癌症组不同临床病理特征患者血清miR-20a-5p、miR let-7a表达;癌症组随访1年,分析死亡的影响因素,评估血清miR-20a-5p、miR let-7a表达对癌症组1年内死亡的预测价值。结果 癌症组血清miR-20a-5p表达高于对照组(P<0.05),且癌症组Ⅲ~Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移患者血清miR-20a-5p表达均高于Ⅰ~Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者(P<0.05);癌症组血清miR let-7a表达低于对照组(P<0.05),且癌症组Ⅲ~Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移患者血清miR let-7a表达均低于Ⅰ~Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移、无远处转移的患者(P<0.05);癌症组1年内死亡率为17.78%,Ⅲ~Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移、有远处转移、血清miR-20a-5p表达、未遵医嘱治疗均是影响癌症组1年内死亡的危险因素(RR=4.076,4.100,4.845,4.968,5.924,4.768,P<0.05),血清miR let-7a表达是其保护因素(RR=0.587,P<0.05);血清miR-20a-5p、miR let-7a表达联合预测癌症组1年内死亡的灵敏度、AUC均高于单独预测(P<0.01)。结论 胃癌患者血清miR-20a-5p表达高,miR let-7a表达低,与临床分期、分化程度、淋巴结转移、远处转移均有关,上述因素均可影响患者的生存率,且血清miR-20a-5p、miR let-7a表达联合可预测胃癌1年内死亡风险。

miR-891a-5p对结肠癌细胞肿瘤生物学行为和血管生成潜能的作用

目的:探索miR-891a-5p对结肠癌细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡及血管生成的影响及其作用机制。方法:通过PCR技术筛选miR-891a-5p在FHC,SW480,HCT116,HCT8,和SW620各细胞系中表达最高的细胞SW480,将miR-891a-5p模拟物(miR-891a-5p mimic),miR-891a-5p抑制剂(miR-891a-5p inhibitor)及其相应对照转染至SW480细胞;将SW480分为OE-NC组和OE-NLRP7,CCK-8法测定SW480的增殖能力,Transwell试验测定SW480的侵袭能力,划痕试验测定SW480的迁移能力;Western blot分析VEGF和MMP-9的蛋白表达情况;HUVEC血管形成实验检查血管生成能力。荧光素酶报告基因检测验证miR-891a-5p及NLRP7间的靶向关系;RNA免疫沉淀分析miR-891a-5p及NLRP7之间的作用关系。结果:miR-891a-5p在结肠癌细胞中表达显著高于人正常结肠上皮细胞,NLRP7在结肠癌细胞的表达明显低于正常干细胞,抑制miR-891a-5p使得SW480细胞的增殖、侵袭、迁移及血管生成能力明显下降(P<0.01),VEGF和MMP-9蛋白表达水平显著降低(P<0.01),靶向关系结果显示,miR-891a-5p和NLRP7之间存在靶向作用关系;NLRP7过表达可以降低SW480细胞的增殖、迁移及血管生成能力(P<0.01)。结论:miR-891a-5p可以调控NLRP7促进结肠癌细胞的增殖、侵袭、迁移及血管生成能力加速结肠癌的发展。

环状RNA ciRS-7靶向miR-219a-5p影响微小隐孢子虫体外增殖的机制

旨在探究环状RNA ciRS-7靶向miR-219a-5p影响微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)在HCT-8细胞中增殖的作用机制。以C.parvum感染HCT-8细胞为研究模型,利用Western blot检测HCT-8细胞中的自噬蛋白LC3B-II和p62的表达情况;利用qRT-PCR和双荧光素酶报告基因试验检测和验证ciRS-7与miR-219a-5p的靶向关系,利用qRT-PCR检测HCT-8细胞中C.parvum的荷虫量(C.parvum hsp70基因的mRNA水平)。结果显示:C.parvum感染诱导HCT-8细胞中LC3B-II和p62的蛋白质表达水平在感染后8、12、24、36和48 h显著上调;过表达ciRS-7显著抑制了C.parvum感染细胞中LC3B-II的蛋白质表达水平,但升高了p62的蛋白质表达水平,而干扰ciRS-7表达的作用相反;C.parvum感染诱导HCT-8细胞中miR-219a-5p的显著下调表达,且ciRS-7可靶向调节miR-219a-5p的表达;miR-219a-5p mimics显著增加了C.parvum感染细胞中LC3B-II的蛋白质表达水平,但降低了p62的蛋白质表达水平,而miR-219a-5p inhibitor的作用相反;miR-219a-5p mimics可逆转过表达ciRS-7对C.parvum感染细胞中LC3B-II蛋白质表达的抑制和p62蛋白质表达的促进作用;miR-219a-5p mimics显著抑制了感染细胞中C.parvum hsp70基因的mRNA表达水平,而miR-219a-5p inhibitor的作用相反;miR-219a-5p mimics逆转了过表达ciRS-7对感染细胞中C.parvum hsp70基因的mRNA表达水平的上调作用。ciRS-7通过靶向miR-219a-5p抑制C.parvum感染诱发的HCT-8细胞自噬,进而促进C.parvum在HCT-8细胞中的增殖。

miR-193a-5p/HOXA7轴对急性髓细胞白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的探究miR-193a-5p/HOXA7轴在急性髓细胞白血病(AML)细胞增殖与凋亡过程中的作用。方法收集初治AML患者及健康志愿者的骨髓样本,检测骨髓样本中miR-193a-5p与HOXA7表达水平的变化,分析miR-193a-5p与HOXA7的调控作用。体外培养AML细胞系THP-1,分别给予转染空载体、miR-193a-5p过表达慢病毒载体、HOXA7 shRNA慢病毒载体及同时转染miR-193a-5p和HOXA7过表达慢病毒表达载体,检测不同干预方式下THP-1细胞的增殖与凋亡情况、细胞内miR-193a-5p、HOXA7的表达变化。结果AML患者骨髓细胞中miR-193a-5p表达低于健康志愿者,而HOXA7表达高于健康志愿者(P<0.01)。荧光素酶活性分析显示miR-193a-5p具有负调控HOXA7的作用。转染miR-193a-5p过表达慢病毒载体的THP-1细胞内的HOXA7表达低于空载体细胞(P<0.01)。与转染空载体细胞比较,转染miR-193a-5p过表达慢病毒载体或转染HOXA7 shRNA慢病毒载体抑制了THP-1细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.05)。同时转染miR-193a-5p和HOXA7过表达慢病毒表达载体的THP-1细胞增殖强于空载体细胞(P<0.05)。结论miR-193a-5p在AML患者骨髓细胞中表达量显著降低,其可通过抑制HOXA7表达及THP-1细胞增殖来促进THP-1细胞凋亡。

miR-7a-5p对急性胰腺炎腺泡细胞增殖、凋亡的影响及机制

背景胰腺腺泡细胞增殖及凋亡与急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)发生密切相关,miRNA可通过调控靶基因表达从而参与细胞增殖及凋亡过程,因而寻找与胰腺腺泡细胞增殖及凋亡相关的miRNA分子标志物对临床诊断及治疗AP具有重要意义.目的探讨微小RNA-7a-5p(miR-7a-5p)对AP腺泡细胞增殖、凋亡的影响及机制.方法构建雨蛙肽诱导的AP模型并收集胰腺炎腺泡细胞AR42J(雨蛙肽组),采用qRT-PCR与Western blot分别检测未经雨蛙肽诱导的AR42J细胞(对照组)及雨蛙肽组AR42J细胞中miR-7a-5p相对表达量及活化信号转导和转录激活因子的蛋白抑制因子-1(proteininhibitor of activated signal transducer and activator oftranscription 1,PIAS1)表达.分别将anti-miR-7a-5p、pcDNA-PIAS1转染至雨蛙肽组AR42J细胞,采用MTT法检测AR42J细胞增殖能力,流式细胞术检测AR42J细胞凋亡.荧光素酶报告系统检测miR-7a-5p对PIAS1基因的靶向调控作用,并采用Western blot检测miR-7a-5p对PIAS1蛋白表达的调控作用.采用RNA干扰技术沉默PIAS1表达(si-PIAS1组),分别将si-PIAS1及其阴性对照转染至anti-miR-7a-5p组AR42J细胞,观察AR42J细胞增殖及凋亡能力.结果与对照组相比,雨蛙肽组AR42J细胞中miR-7a-5p表达水平显著升高(P<0.05),PIAS1蛋白表达显著降低(P<0.05);抑制miR-7a-5p表达可促进胰腺炎腺泡细胞AR42J增殖并抑制其凋亡;miR-7a-5p可负向调控靶基因PIAS1表达;PIAS1过表达可促进AR42J细胞增殖并抑制其凋亡;与anti-miR-7a-5p+si-NC组相比,anti-miR-7a-5p+si-PIAS1组AR42J细胞活性显著降低(P<0.05),细胞凋亡率显著升高(P<0.05).结论miR-7a-5p可通过抑制PIAS1表达进而促进AP腺泡细胞凋亡并降低细胞增殖能力.

LncRNA SNHG7靶向调节miR-146a-5p对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和细胞凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因7(lncRNA SNHG7)对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制。方法:培养人正常胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞NCI-N87、Hs-746T、NCI-SNU-16;将si-NC、si-SNHG7分别转染至NCI-N87细胞中,记为si-NC组、si-SNHG7组;将si-SNHG7分别与anti-miR-NC、anti-miR-146a-5p分别共转染至NCI-N87细胞中,记为si-SNHG7+anti-miR-NC组、si-SNHG7+anti-miR-146a-5p组。实时荧光定量PCR(qPCR)检测SNHG7和miR-146a-5p的表达水平;MTT检测细胞活力;Transwell检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blotting)法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测SNHG7和miR-146a-5p的靶向关系。结果:与人正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞NCI-N87、Hs-746T、NCI-SNU-16中LncRNA SNHG7表达水平升高,miR-146a-5p表达水平降低(P<0.05);SNHG7高表达的患者生存率低。与si-NC组相比,si-SNHG7组胃癌细胞NCI-N87中SNHG7表达水平降低,细胞活力降低,细胞迁移、侵袭数降低,细胞凋亡率升高,E-cadherin蛋白表达水平升高,N-cadherin蛋白、Vimentin蛋白表达水平降低(P<0.05)。SNHG7靶向调控miR-146a-5p,抑制miR-146a-5p表达逆转了抑制SNHG7表达对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制和对凋亡的促进作用。结论:抑制SNHG7表达可能通过上调miR-146a-5p表达抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡。

长链非编码RNA LINC00319通过LINC00319/let-7a-5p/HMGA2机制调节胶质瘤的增殖

目的目的观察长链非编码RNA LINC00319在胶质瘤中的表达,探讨LINC00319对胶质瘤增殖的影响及其具体的分子机制。方法用real-time PCR法检测6例胶质瘤组织及胶质瘤细胞系U251、U87MG、A172和正常星形胶质细胞(NHA)中LINC00319的表达。随后在胶质瘤细胞系U251和U87MG中分别转染或不转染sh-LINC00319,CCK-8实验检测细胞增殖情况。生物信息学预测及双荧光素酶实验检测LINC00319在胶质瘤中可能的调节机制。结果real-time PCR结果显示,与NHA细胞及脑外伤组织相比,LINC00319在胶质瘤细胞和组织中高表达。CCK8实验显示,转染sh-LINC00319的胶质瘤细胞U251和U87MG存活率显著低于未转染的细胞(P<0.05)。生物信息学分析及双荧光素酶报告基因实验证实,胶质瘤细胞中LINC00319可以直接与let-7a-5p相互作用,并且这种相互作用抑制下游高迁移率族蛋白A2(HMGA2)的表达。结论LINC00319在胶质瘤细胞中高表达,降低LINC00319的表达可明显抑制胶质瘤细胞的增殖。LINC00319/let-7a-5p/HMGA2在胶质瘤的增殖中起关键作用,提示LINC00319有可能成为胶质瘤患者的治疗靶点。