hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡在胃癌5-氟尿嘧啶化疗耐药性中的作用研究

目的探究hsa-circ-002179靶向miR-143-3p调控自噬-凋亡平衡对胃癌的5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗耐药性的影响。方法通过5-Fu处理AGS细胞构建5-Fu耐药细胞模型(AGS/5-Fu),采用CCK8法检测5-Fu对AGS和AGS/5-Fu细胞活性的影响,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中hsa-circ-002179和miR-143-3p的表达;通过流式细胞术和Western blot分别检测细胞凋亡水平与自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达。同时,通过软件预测hsa-circ-002179与miR-143-3p的结合位点,并采用RIP和双荧光素酶实验验证其结合作用。结果与对照组比较,耐药组的细胞活性[(172.33±9.53)%比(106.00±6.16)%,P<0.01]和自噬水平升高、凋亡率(20.5%比43.8%,P<0.01)降低,hsa-circ-002179表达升高[(4.46±0.34)比(1.05±0.66),P<0.01];转染si-002179后,耐药细胞活性降低[(80.00±2.45)%比(102.67±7.13)%,P<0.05],而凋亡水平升高(31.3%比21.8%,P<0.05)。RIP和双荧光素酶报告实验证实hsa-circ-002179与miR-143-3p直接结合,且与对照组比较,耐药细胞中miR-143-3p的表达降低[(0.38±0.05)比(1.04±0.07),P<0.01]。并且,hsa-circ-002179能够调控miR-143-3p的水平。同时,miR-143-3p抑制剂处理能够升高转染si-002179后的耐药细胞自噬水平。自噬抑制剂处理降低了耐药细胞的自噬水平和细胞活性,升高凋亡水平;在此基础上转染OE-002179则升高自噬水平和细胞活性,降低凋亡水平,进一步转染miR-143-3p模拟物可以逆转以上变化。结论hsa-circ-002179靶向miR-143-3p可能可以调控自噬-凋亡平衡,进而影响胃癌细胞的5-Fu化疗耐药性。

中药单体川楝素介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制研究

目的 探究中药单体川楝素介导的hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制。方法 选取南通第三人民医院乳腺外科于2020年4月—2022年4月收治的乳腺癌患者40例为研究对象,患者均在医院进行手术,取患者乳腺癌及癌旁组织作为实验材料,采用定量荧光聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)对其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平进行测定;取乳腺癌细胞株T47D细胞,加入不同浓度的川楝素,比较不同浓度川楝素对细胞增殖的抑制率;对所选乳腺癌细胞株系进行预处理,A组不进行特殊处理,B组中加入0.5μmol/L的川楝素,C组对乳腺癌细胞进行转染,敲除hsa-miR-671-5p,并向其中加入0.5μmol/L的川楝素,比较其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平,上述实验重复3次。结果 与正常癌旁组织相比较,乳腺癌组织中提取的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA在乳腺癌组织中均低表达,具有正相关性(r=0.965,P<0.05)。随着川楝素浓度的升高,乳腺癌细胞增殖的抑制率逐渐升高,且与0μmol/L浓度组比较均具有统计学意义(P<0.05)。对数据进行处理,得出乳腺癌细胞在24 h及48 h的半数抑制浓度分别为0.78μmol/L、0.49μmol/L。与A、C组相比较,B组的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与A、C组相比较,B组24 h及48 h侵袭细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间侵袭细胞数量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 川楝素通过介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控hsa-circ-0025583及SYNGR2水平,进而影响乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力,抑制乳腺癌细胞的生长。

环状RNA hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

背景:同型半胱氨酸水平上升会诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡,但机制尚不清楚。目的:探讨hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡中的作用。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,将其分为对照组、同型半胱氨酸组、干扰对照组、干扰对照+同型半胱氨酸组、干扰hsa-circ-0001360组、干扰hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组、过表达对照组、过表达对照+同型半胱氨酸组、过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组,同型半胱氨酸的干预浓度均为100μmol/L。干预细胞72 h后,应用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-circ-0001360的表达水平。结果与结论:①与对照组相比,同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3和Bax的表达明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显增高(P<0.01);②与对照组相比,同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中hsa-circ-0001360的表达明显升高(P<0.01);③hsa-circ-0001360在人脐静脉内皮细胞的细胞质中表达显著高于细胞核(P<0.01);④与干扰对照组或干扰对照+同型半胱氨酸组相比,干扰hsa-circ-0001360组和干扰hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3、Bax的表达明显降低(P<0.01),Bcl-2的表达明显升高(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01);⑤与过表达对照组或过表达对照+同型半胱氨酸组相比,过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3、Bax的表达明显升高(P<0.01),Bcl-2的表达明显降低(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.01);⑥以上结果表明,hsa-circ-0001360可以促进同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡。

BCSG1与Hsa-circ-0026352在浸润性乳腺癌遗传易感性中的交互作用

目的:探讨乳腺癌特异基因1(BCSG1)与Hsa-circ-0026352在浸润性乳腺癌(IBC)遗传易感性中的交互作用。方法:选取2019年6月至2022年5月间武汉市中西医结合医院收治的100例IBC患者作为研究对象,采用免疫组化法检测IBC组织及其相应癌旁组织中BCSG1的表达,将研究对象按照IBC组织中BCSG1蛋白表达的高低分为阴性、弱阳性和强阳性组,统计三组患者的临床病理特征及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、表皮生长因子受体-2(HER2)、Hsa-circ-0026352的表达情况,采用Logistic回归方程和最大似然法分析BCSG1表达与上述参数的趋势性和交互作用。结果:与癌旁组织比较,IBC组织中BCSG1蛋白呈高表达(P<0.05);BCSG1蛋白强阳性表达与淋巴结转移、分化程度、临床分期、HER2表达、 Hsa-circ-0026352表达有关联(P<0.05);BCSG1强阳性表达与IBC存在交互作用(P<0.05);BCSG1表达与IBC的交互作用在Hsa-circ-0026352阳性表达中最为显著(趋势P<0.001);BCSG1表达与IBC的交互作用在临床分期Ⅲ期、低分化程度中最为显著(趋势P<0.001)。结论:BCSG1与IBC患病密切相关,且与Hsa-circ-0026352、临床分期、分化程度存在交互作用,可共同增加IBC患病风险性。

Hsa-circ-0006089在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的在GEO数据库分析的基础上检测胃癌患者肿瘤标本中hsa-circ-0006089的表达量及其临床意义。方法收集2010年—2012年在苏州大学附属第一医院行手术治疗的胃癌患者组织标本,利用qPCR技术检测hsa-circ-0006089表达水平,分析其表达与患者临床病理特征的关系,并评估与患者预后的关系。结果胃癌患者肿瘤组织中hsa-circ-0006089水平高于癌旁正常组织(P<0.001),表达与淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.01),与患者年龄、性别、肿瘤大小、T分期、病理分级、脉管是否侵犯及神经是否侵犯无关(P>0.05)。结论胃癌患者的分期和预后与hsa-circ-0006089表达水平有关,hsacirc-0006089可作为胃癌诊断及评估预后的分子标记物。

hsa-circ-0001862对舌鳞癌细胞表型的影响研究

目的研究环状RNAhsa-circ-0001862对舌鳞癌细胞表型的影响及其对舌鳞癌发生发展的作用机制。方法构建hsa-circ-0001862质粒,采用双荧光素酶报告基因及qRT-PCR的方法来验证hsa-circ-0001862与miR-23a-3p的相互作用关系。靶向抑制hsa-circ-0001862后,利用CCK8实验以及集落形成实验分别检测舌鳞癌细胞的细胞活性及集落形成能力;通过划痕实验以及Transwell实验检测舌鳞癌细胞的迁移及侵袭能力;通过蛋白印迹实验检测凋亡相关蛋白,反映hsa-circ-0001862对舌鳞癌细胞凋亡能力的影响。结果hsa-circ-0001862与miR-23a-3p能够相互作用,在舌鳞癌细胞中两者的表达呈负相关;在Tca-8113细胞中,hsa-circ-0001862能够抑制细胞的增殖、迁移和侵袭的能力(P<0.01),并促进细胞的凋亡(P<0.01)。结论hsa-circ-0001862与miR-23a-3p相互作用,并且hsa-circ-0001862在舌鳞癌的发生发展中发挥着抑制的作用,hsa-circ-0001862或可成为治疗舌鳞癌的一个新的生物标记物和靶点。

环状RNA hsa-circ-0015022作为胰腺癌新型诊断生物标志物研究

目的从胰腺癌患者血液和胰腺癌组织两方面分析,探讨hsa-circ-0015022作为胰腺癌诊断生物标志物的可行性。方法选择胰腺癌组织30例、相应的癌旁组织30例(对照组)作为研究用的组织标本。选择胰腺癌患者血液标本30例,健康志愿者血液标本30例(对照组)作为研究用的血液标本。使用实时荧光定量聚合酶链式反应检验hsa-circ-0015022的表达情况。临床病理数据用于分析该指标与胰腺癌患者年龄、性别、肿瘤直径、血清CEA水平、临床分期、临床病理(TNM)分期、血管受侵以及淋巴受侵等的相关性。结合CA19-9,探讨hsa-circ-0015022能否作为胰腺癌诊断的生物标志物。结果与各自对照组比较,hsa-circ-0015022在胰腺癌组织以及胰腺癌患者血液中均高表达(P <0. 05)。组织样本的临床病理数据分析显示,hsa-circ-0015022的表达情况与临床分期、TNM分期中的N分期及淋巴受侵有关(P <0. 05);血液样本的临床病理数据分析显示,hsa-circ-0015022的表达情况与TNM分期中的N分期及血清CA19-9水平有关(P <0. 05)。单独使用hsa-circ-0015022的诊断效率:受试者工作特征曲线(ROC)下面积0. 70,临界值10. 17,敏感性0. 623 0,特异性0. 709 7。hsa-circ-0015022联合CA19-9的诊断效率:ROC曲线下面积增至0. 85,敏感性增至0. 770 5,特异性增至0. 838 7。结论 hsa-circ-0015022高表达的情况在胰腺癌组织及胰腺癌患者血液中均存在,而且可能与TNM分期中的N分期有关。hsa-circ-0015022与CA19-9联合使用,可能会作为生物标志物,用于协助诊断胰腺癌,尤其是协助诊断胰腺癌的N分期情况。

环状RNA hsa-circ-0006361对卵巢癌SKOV3细胞小鼠移植瘤生长的影响

目的:基于前期RNA-seq测序发现hsa-circ-0006361在卵巢癌中高表达,为研究hsa-circ-0006361在上皮性卵巢癌发生发展中的作用,我们研究了hsa-circ-0006361对人上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤生长、裸鼠生存时间的影响。方法:分离细胞核与细胞质后分别提取RNA进行RT-qPCR及琼脂糖凝胶电泳分析,验证hsa-circ-0006361为环状RNA并确定其亚细胞定位。构建hsa-circ-0006361表达载体,转染SKOV3卵巢癌细胞后通过G418筛选得到hsa-circ-0006361稳定表达及空载体circ-vector298卵巢癌细胞株。通过小鼠皮下注射上述卵巢癌细胞建立卵巢癌裸鼠移植瘤模型,评价hsa-circ-0006361表达对卵巢癌细胞移植瘤生长及裸鼠存活时间的影响。结果:hsa-circ-0006361是主要分布在细胞质的环状RNA。hsa-circ-0006361过表达细胞株组裸鼠皮下移植瘤生长与circ-vector298组相比,从接种后第12天开始生长速度明显加快(P<0.05),而hsa-circ-0006361实验组小鼠体重相比circ-vector298对照组,第9天起体重明显更轻(P<0.05),并且实验组小鼠存活时间明显缩短(P<0.05)。结论:hsa-circ-0006361是主要分布在细胞浆的环状RNA,其在卵巢癌中高表达并促进卵巢癌小鼠移植瘤的生长与腹腔转移,缩短荷瘤小鼠生存时间。

环状RNA hsa-circ-0008997在膀胱癌细胞中的表达及其作用研究

探讨环状RNA hsa-circ-0008997在膀胱癌细胞中的表达及功能。方法 选择我院2021年1月~12年间收治的20例膀胱癌患者作为研究对象。收集癌组织及癌旁组织。荧光定量定量PCR检测癌组织及癌旁组织中环状RNA hsa-circ-0008997的表达水平。根据临床资料分析其表达水平与临床病理特征的相关性。结果hsa-circ-0008997在膀胱癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P<0.05)。在不同性别、年龄和肿瘤直径的患者中,环状RNA hsa-circ-0008997的表达水平没有显著差异(P>0.05)。高形态学分级患者的环状RNA hsa-circ-0008997表达水平显著低于低分化患者(P<0.05),TNM T2期及以上患者的表达水平显著低于低分化患者(P<0.05)淋巴结转移组的表达水平显著低于无淋巴结转移组(P<0.05)。结论 环状RNA hsa-circ-0008997在膀胱癌的表达水平极低,其表达水平与肿瘤形态分级、淋巴结转移和TNM分期呈负相关。可作为一种具有诊断价值的肿瘤标志物用于进一步研究。