hsa-let-7e-5p对肺腺癌细胞迁移的影响

目的筛选肺腺癌中差异表达的环状非编码RNA(miRNA),并分析其对肺腺癌(LUAD)迁移的影响及潜在机制。方法通过miRNA芯片筛选出LUAD组织和正常肺组织中差异表达的miRNA并预测其潜在的生物学功能和信号通路;通过荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和癌症基因组图谱(TCGA)分析验证hsa-let-7e-5p在LUAD组织和细胞系中的表达水平;通过划痕试验检测hsa-let-7e-5p对LUAD细胞迁移的影响;通过生物信息学分析和qRT-PCR验证hsa-let-7e-5p与基因DTX2、NME6、C8orf58、GATM和DHX57之间的靶向关系。结果miRNA芯片结果显示肺腺癌组织中347个miRNA下调而229个miRNA上调。hsa-let-7e-5p在LUAD组织和细胞系中下调,过表达hsa-let-7e-5p可以抑制肺腺癌细胞迁移。结论hsa-let-7e-5p在肺腺癌中低表达并抑制肺腺癌细胞的迁移,DTX2、NME6、C8orf58、GATM和DHX57是hsa-let-7e-5p的潜在靶基因。

Hsa-let-7b-5p抑制非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭

目的探讨hsa-let-7b-5p在非小细胞肺癌临床诊断和靶向治疗中的价值。方法收集2020年9月-10月的13对哈尔滨医科大学附属肿瘤医院病理类型相同的非小细胞肺癌癌组织及其癌旁组织,通过RNA-Seq获得差异表达的miRNA,并通过qRT-PCR验证候选miRNA在非小细胞肺癌组织和细胞中的表达水平。通过CCK-8法、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验验证miRNA对非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭能力的影响。利用MiRDB、TarBase和ENCORI数据库预测靶基因,并利用FunRich工具进行基因富集分析。结果与癌旁组织及正常支气管上皮细胞系(Human bronchial epithelial cell,HBE)相比,hsa-let-7b-5p在非小细胞肺癌组织及非小细胞肺癌细胞系(A549、H1299、H358和H460)中低表达(P<0.05)。hsa-let-7b-5p的高表达可以抑制非小细胞肺癌增殖、迁移和侵袭能力(P<0.01)。靶基因预测及富集分析结果显示hsa-let-7b-5p的378个靶基因及其相关基因中,147个基因与hsa-let-7b-5p的表达呈负相关(P<0.05)。结论Hsa-let-7b-5p对非小细胞肺癌的增殖、迁移和侵袭有抑制作用。

Let-7e-5p调控Fas/FasL影响小鼠变应性鼻炎发病的机制研究

目的探讨let-7e-5p对小鼠变应性鼻炎的影响及机制。方法将18只BALB/c小鼠按随机数字表法均分为对照(Control)组、变应性鼻炎(AR)组、let-7e-5p激动剂阴性对照(AR+agomir-NC)组、let-7e-5p激动剂(AR+agomir)组、let-7e-5p抑制剂阴性对照(AR+antagomir-NC)组和let-7e-5p抑制剂(AR+antagomir)组。除Control组外,其余组应用卵白蛋白(OVA)致敏建立AR模型,AR+agomir组和AR+antagomir组同时给予let-7e-5p agomir或let-7e-5p antagomir进行干预,末次激发致敏后对小鼠变应性鼻炎进行评分,HE染色观察鼻黏膜组织,统计嗜酸性粒细胞数量,real-time PCR检测let-7e-5p、Fas、FasL m RNA表达,Western blot检测Fas、FasL蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测血清免疫球蛋白E(IgE)、特异性IgE(sIgE)、干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-12、IL-4、IL-13水平,双荧光素酶实验分析let-7e-5p和Fas、FasL的靶向关系。结果与Control组比较,AR组小鼠变应性鼻炎评分升高,鼻黏膜增生明显,嗜酸性粒细胞数量增加,let-7e-5p mRNA表达及IFN-γ、IL-12水平下降,Fas、FasL表达及IgE、sIgE、IL-4、IL-13水平升高(均P<0.05)。与AR+agomir-NC组比较,AR+agomir组小鼠变应性鼻炎评分降低,鼻黏膜结构清晰,嗜酸性粒细胞数量减少,let-7e-5p mRNA表达及IFN-γ、IL-12水平升高,Fas、FasL表达及IgE、sIgE、IL-4、IL-13水平下降(均P<0.05)。与AR+antagomir-NC组比较,AR+antagomir组小鼠变应性鼻炎评分升高,鼻黏膜增厚,嗜酸性粒细胞数量增加,let-7e-5p mRNA表达减少,Fas、FasL表达及IgE、sIgE、IL-4、IL-13水平升高(均P<0.05),IL-12、IFN-γ水平差异无统计学意义。与NC+3’UTR-WT组比较,let-7e-5p agomir+3’UTR-WT组荧光素酶活性下降(P<0.05)。结论Let-7e-5p通过靶向调节Fas/FasL影响1型辅助性T细胞(Th1)/2型辅助性T细胞(Th2)平衡,从而参与AR小鼠变应性鼻炎发病的进展。

hsa-let-7a-5p调控牙周膜干细胞增殖及凋亡

目的探讨hsa-let-7a-5p对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)增殖及凋亡的影响。方法将let-7a-5p mimics、mimics nc、let-7a-5p inhibitor、inhibitor nc转染进入PDLSCs,通过RT-qPCR测定转染效率,通过CCK-8、细胞周期、EdU实验检测let-7a-5p对PDLSCs增殖的影响,通过细胞凋亡实验检测PDLSCs的凋亡率。结果let-7a-5p成功转染进入PDLSCs。let-7a-5p mimics可抑制PDLSCs增殖能力(P<0.05),促进PDLSCs凋亡(P<0.01)。let-7a-5p inhibitor可促进PDLSCs增殖能力(P<0.05),抑制PDLSCs凋亡(P<0.01)。结论hsa-let-7a-5p可抑制PDLSCs增殖,促进PDLSCs凋亡。

Let-7e-5p对变应性鼻炎小鼠Treg/Th17细胞失衡的影响

目的:探讨let-7e-5p对变应性鼻炎(AR)小鼠调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)失衡的影响。方法:12只BALB/c小鼠,3只为正常组,余9只小鼠采用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝[Al(OH)3]建立AR模型后随机均分为模型组(仅造模)、let-7e-5p激动剂对照组(鼻内滴注let-7e-5p agomir阴性对照)及let-7e-5p激动剂组(鼻内滴注let-7e-5p agomir);采用行为学评分考察各组小鼠的过敏症状,酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清免疫球蛋白E(IgE)、白细胞介素17-A(IL-17A)和白细胞介素-10(IL-10)水平,HE染色观察各组小鼠鼻黏膜组织学变化,采用实时荧光定量PCR检测各组小鼠鼻黏膜组织let-7e-5p的表达、蛋白印迹法检测RORγt和Foxp3蛋白的表达,采用流式细胞术检测各组小鼠外周血CD4^+Foxp3^+Treg和CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群变化。结果:模型组小鼠较正常组的行为学评分、血清IgE及IL-17A水平明显增高、IL-10水平明显降低(P<0.01),let-7e-5p激动剂组较模型组的行为学评分、IgE及IL-17A水平明显下降、IL-10水平明显升高(P<0.01);同模型组比较,let-7e-5p激动剂组小鼠鼻黏膜基底层结构清晰,炎性细胞浸润明显减少;模型组小鼠鼻黏膜组织let-7e-5p基因的表达较正常组减少,let-7e-5p激动剂组则较模型组升高(P<0.05);模型组小鼠鼻黏膜组织RORγt蛋白表达较正常组增加、Foxp3蛋白表达减少,let-7e-5p激动剂组小鼠鼻黏黏膜组织RORγt蛋白表达较模型组减少、Foxp3蛋白表达增加(P<0.05);模型组小鼠较正常组外周血中CD4^+Foxp3^+Treg细胞亚群比例明显降低,CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群比例明显升高(P<0.01);let-7e-5p激动剂组小鼠较模型组的CD4^+Foxp3^+Treg细胞亚群比例显著升高,CD4^+IL-17A+Th17细胞亚群比例明显降低(P<0.01)。结论:Let-7e-5p可能通过调节AR小鼠Foxp3和RORγt蛋白的表达,介导Treg/Th17细胞平衡,减轻炎症反应,从而改善AR小鼠鼻部过敏症状。

血浆miR-let-7e-5p、LncRNA NEAT1表达水平与2型糖尿病视网膜病变的关系

目的检测2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者血浆中微小RNA-let-7e-5p(minute RNA-let-7e-5p,miR-let-7e-5p)和长链非编码核富含丰富的转录本1(lncRNA nuclear-enriched abundant transcript 1,LncRNA NEAT1)的表达水平,并讨论其与糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的关系。方法从我院选取收治的T2DM患者126例纳入研究,根据有无DR情况分为84例DR组和42例非DR组,根据DR分级标准分为31例非增生型DR(non-proliferative DR,NPDR)和53例增生型DR(proliferative DR,PDR)。采用荧光定量聚分酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测T2DM患者血浆中miR-let-7e-5p和LncRNA NEAT1的表达水平,比较各组间miR-let-7e-5p和LncRNA NEAT1表达水平的差异;Pearson相关系数分析DR组患者血浆miR-let-7e-5p和LncRNA NEAT1表达水平的相关性;ROC曲线检测miR-let-7e-5p、LncRNA NEAT1对DR的诊断价值。结果非DR患者相比,PDR和NPDR患者的血浆miR-let-7e-5p表达水平降低,LncRNA NEAT1表达水平增加(P<0.05);并且与NPDR组相比,PDR组的血浆miR-let-7e-5p表达水平降低,LncRNA NEAT1表达水平升高(P<0.05);DR患者血浆miR-let-7e-5p与LncRNA NEAT1呈负相关(r=-0.534,P<0.05);miR-let-7e-5p诊断DR的AUC为0.856(95%CI:0.789~0.924),敏感度为77.38%,特异度为80.95%;LncRNA NEAT1诊断DR的AUC为0.844(95%CI:0.778~0.910),敏感度为69.05%,特异度为95.24%;两者联合诊断DR的AUC为0.935(95%CI:0.891~0.978),敏感度为88.10%,特异度为92.86%,两者联合对DR患者具有较高的诊断能力。结论miR-let-7e-5p和LncRNA NEAT1与T2DM患者DR的发生和进展有关,可能作为诊断DR发生的一种潜在生物标志物,且两者联合的诊断能力更佳。

hsa-Let-7a-5p靶向结合TGF-βR1抑制局限性硬皮病成纤维细胞纤维化

目的探讨hsa-Let-7a-5p对局限性硬皮病成纤维细胞(LSFs)纤维化过程的影响及其与转化生长因子-β受体(TGF-βR)和TGF-β/Smad信号通路的关系。方法将携带hsa-Let-7a-5p和shTGF-βR1的慢病毒载体及空白慢病毒载体感染LSFs。CCK-8法和划痕实验检测各组LSFs的增殖和迁移情况。RT-qPCR、免疫荧光和Western blot检测转染的效率以及各组LSFs的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-βR1、TGF-β、p-Smad2/3的mRNA和蛋白表达水平。结果病毒感染LSFs后,shTGF-βR1组的TGF-βR1表达量明显低于对照组(P<0.05);shTGF-βR1组的细胞增殖率、迁移能力均有所降低;shTGF-βR1组的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-β、p-Smad2/3的mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(P<0.05)。生物信息学分析表明hsa-Let-7a-5p可以与TGF-βR13′-UTR的靶区位置配对,hsa-Let-7a-5p慢病毒转染组的hsa-Let-7a-5p表达量明显高于对照组(P<0.05),TGF-βR1表达量明显降低(P<0.05)。hsa-Let-7a-5p组的细胞增殖率、迁移能力均有所降低;hsa-Let-7a-5p组的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-β、p-Smad2/3的mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(P<0.05)。结论hsa-Let-7a-5p在体外通过靶向结合TGF-βR1调控TGF-β/Smad通路,抑制LSFs增殖与迁移,降低LSFs的纤维化标志物,从而抑制局限性硬皮病的纤维化。

外周血let-7e-5p表达水平与缺血性脑卒中发病风险之间的关联性

目的探讨外周血let-7e-5p表达水平与缺血性脑卒中发病风险的相关性。方法去将2018年4月~2019年4月在公安县人民医院就诊的缺血性脑卒中患者作为研究对象(观察组),对照组为在本院进行常规检查且年龄、性别满足研究标准者,使用实时定量PCR法测定患者外周全血let-7e-5p表达水平,深入剖析缺血性脑卒中患者miRNA表达水平与发病风险间的关联性。结果外周全血let-7e-5p表达水平上升时,患者发病风险也会随之出现快速升高的情况,校正处理传统风险和血脂水平以后,依然与之存在着直接的联系。在模型I里面,ROC曲线下,外周全血let-7e-5p表达水平的面积与传统危险因素的面积基本相同。纳入miRNA后,外周全血let-7e-5p表达水平的面积却出现了大幅度增加,表现出较强的差异性,且有统计学意义。结论缺血性脑卒中发病风险与let-7e-5p表达水平之间存在着明显的关联。

参附注射液调控microRNA-let-7e-5p的表达改善大鼠心肌肥大

目的:研究参附注射液对大鼠心肌肥大模型microRNA-let-7e-5p的调控机制。方法:取健康SD大鼠行腹主动脉缩窄手术建立心肌肥大模型,分成3组:参附注射液组(SFI,6.0m L·kg-1·d-1);模型组(0.9%氯化钠溶液,6.0m L·kg-1·d-1);假手术组(0.9%氯化钠溶液,6.0m L·kg-1·d-1);腹腔注射相应药物,连续12周。采用茎环Realtime RT-PCR方法检测大鼠心肌microRNA-let-7e-5p的表达。利用生物信息学方法分析microRNA-let-7e-5p的候选靶基因,并用RT-PCR与Western Blot方法检测靶基因Caspase-3的m RNA与蛋白表达水平。结果:模型组大鼠心肌mi RNA-let-7e-5p下调,Caspase-3 m RNA及蛋白过表达;参附注射液组大鼠心肌microRNA-let-7e-5p表达量、Caspase-3 m RNA及蛋白表达水平与假手术组接近。结论:mi RNA-let-7e-5p在心肌肥大中可能发挥重要作用,参附注射液可能通过上调或维持mi RNA-let-7e-5p的表达,降低Caspase-3的水平,抑制腹主动脉缩窄大鼠心室重构,从而改善大鼠心功能,对心肌肥大有明显的治疗作用。

特发性癫痫患者外周血差异表达miRNA分析

目的分析特发性癫痫患者外周血差异表达miRNA。方法选取2019年1月至2020年1月在新疆维吾尔自治区人民医院神经内科治疗的特发性癫痫患者12例为病例组,选取同期于新疆维吾尔自治区人民医院门诊进行体检的健康者12例为对照组。采集受试者外周血,采用Illumina HiSeq 2000测序仪进行高通量测序,采用edgeR软件筛选差异表达miRNA,采用qPCR检测差异表达miRNA表达水平。结果共完成24个样本测序。各样本原始序列数据统计分析结果显示,原始序列中碱基的测序质量值>20的碱基占总碱基的百分比为92.56%~97.32%,原始序列中碱基的测序质量值>30的碱基占总碱基的百分比为88.01%~93.50%,碱基G和C的数量总和占总碱基数量的百分比为45.29%~52.09%;各样本样品待分析数据统计分析结果显示,原始序列中碱基的测序质量值>20的碱基占总碱基的百分比为95.87%~98.85%,原始序列中碱基的测序质量值>30的碱基占总碱基的百分比为95.30%~96.85%,碱基G和C的数量总和占总碱基数量的百分比为40.38%~47.58%。共检测出146个差异表达miRNA,与对照组相比,研究组共有98个miRNA表达上调,48个miRNA表达下调;其中差异倍数最大的5个差异表达miRNA分别为hsa-let-7b-3p、hsa-let-7f-1-3p、hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-219a-2-3p、hsa-miR-6810-3p。扩增曲线分析结果显示,样本均经历了良好的扩增过程。熔解曲线分析结果显示,大多数曲线为单峰。病例组hsa-let-7b-3p、hsa-miR-92a-1-5p表达水平低于对照组,hsa-miR-6810-3p表达水平高于对照组(P<0.05)。结论与健康人相比,特发性癫痫患者外周血共有98个miRNA表达上调,48个miRNA表达下调;其中差异倍数最大的5个差异表达miRNA分别为hsa-let-7b-3p、hsa-let-7f-1-3p、hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-219a-2-3p、hsa-miR-6810-3p,且可能只有hsa-let-7b-3p、hsa-miR-92a-1-5p、hsa-miR-6810-3p参与了特发性癫痫的发生发展。

三阴性乳腺癌中受c-Myc调节的微小RNA表达谱分析

目的探讨c-Myc调控的微小RNA(miRNA,miR)表达及其在三阴性乳腺癌(TNBC)转移中的作用机制。方法采用慢病毒构建c-Myc低表达的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,分为c-Myc沉默组、阴性对照组和空白对照组,分别对不同MDA-MB-231细胞进行miRNA测序,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)验证具有显著差异的hsa-let-7a、hsa-let-7c、hsa-let-7d、hsa-miR-34c和hsa-miR-98在细胞中的表达,及20例三阴性乳腺癌组织和癌旁组织中c-Myc和hsa-let-7a的表达水平。采用方差分析、Sidak方法比较多组差异分析。结果与对照组比较,c-Myc沉默组中有126个miRNA存在显著差异,其中84个显著上调,42个显著下调。RT-qPCR验证发现与对照组比较(1.007±0.128,1.003±0.084,1.008±0.138,1.013±0.184,1.009±0.148),在c-Myc沉默组中,hsa-miR-34c(0.693±0.167,F=6.825,P<0.05)、hsa-miR-98下调(0.737±0.145,F=5.260,P<0.05),hsa-let-7a(1.474±0.349,F=7.081,P<0.05)、hsa-let-7c(1.630±0.485,F=7.387,P<0.05)、hsa-let-7d上调(2.104±0.636,F=11.370,P<0.05)。结论c-Myc调控let-7a、let-7c、let-7d、miR-34c和miR-98影响三阴性乳腺癌侵袭转移。