胶质瘤组织中hsa-miR-106b的表达与功能的初步研究

目的:探讨hsa-miR-106b在胶质瘤组织中的表达情况及可能起的作用。方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Real-time RT-PCR)方法检测12例脑外伤内减压切除正常脑组织患者和47例不同级别脑胶质瘤患者组织中hsa-miR-106b的表达。结果:胶质瘤组织和正常脑组织中hsa-miR-106b基因扩增的△Ct值分别为2.96±1.08和7.21±1.96,正常脑组织中hsa-miR-106b表达明显高于胶质瘤组织(P=0.013);胶质瘤组织的恶性程度越高,hsa-miR-106b表达越高(P=0.003)。结论:hsa-miR-106b高表达在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用。

Hsa-miR-106b-25簇的靶基因预测及生物信息学分析

目的 Hsa-miR-106b-25簇涉及肿瘤的多种生物学过程,文中对hsa-miR-106b-25簇:miR-106b、miR-93、miR-25进行靶基因的预测及功能分析,为进一步研究这3个miRNAs的功能及他们之间的相互作用调节机制提供线索。方法应用miRBase数据库获取miR-106b、miR-93及miR-25的序列信息,选择Target Scan、Pic Tar、miRanda 3种在线靶基因预测软件分别预测它们的靶基因,取交集并结合miRTarbase数据库中3种及3种以上实验验证过的靶基因作为进一步生物信息学分析的基因集合;分别对基因集合进行生物过程的功能富集分析,pathway分析及蛋白互作分析。结果 hsa-miR-106b-25簇的预测靶基因富集于多个生物学过程及功能,其生物过程主要集中于:大分子新陈代谢调节、代谢过程的调节、细胞周期;KEGG通路主要富集于:胶质瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胆囊癌等肿瘤相关通路,蛋白互作显示基因簇中3个成员miRNA的预测靶基因编码蛋白质间存在复杂的相互作用,靶基因KAT2B、PTEN、TP53、CDH1、MDM2、E2F1、RB1、SMAD7编码蛋白在互作网络中具有核心地位。结论 miR-106b-25簇中的3个成员通过调控细胞周期的转换作用于肿瘤通路过程进而调节下游靶蛋白参与肿瘤的发生过程。

血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平对早期肝细胞癌的诊断价值

目的探讨微小RNA(micro RNA,miRNA)-574-5p、miRNA-106b、高敏甲胎蛋白异质体(highly sensutive-alpha fetoprotein heterogeneity L3,hs-AFP-L3)水平检测对早期肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的诊断价值。方法选择吉林省肿瘤医院2020年3月至2022年3月收治的HCC患者186例(HCC组)、肝硬化患者120例(肝硬化组)、接受体检的健康人员120例(对照组)为研究对象。比较各组血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平,并比较HCC组不同病理特征患者血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平,绘制受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线分析miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3对早期HCC的诊断价值。结果HCC组、肝硬化组和对照组患者血清miRNA-574-5p(1.09±0.33比0.84±0.27比0.61±0.18)、miRNA-106b(1.22±0.39比0.71±0.22比0.56±0.19)、hs-AFP-L3[(23.08±4.36)μg/L比(2.61±0.79)μg/L比(0.47±0.14)μg/L]水平差异有统计学意义,HCC组患者各项指标均显著高于肝硬化组和对照组,肝硬化组患者各项指标均显著高于对照组(P均<0.05)。HCC肿瘤个数为多发、肿瘤最大径≥5 cm、中晚期、有远处转移、有静脉瘤栓患者血清miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3水平分别高于单发[miRNA-574-5p:1.24±0.43比0.83±0.27;miRNA-106b:1.46±0.45比0.97±0.31;hs-AFP-L3:(25.73±5.21)μg/L比(19.15±4.25)μg/L]、肿瘤最大径<5 cm[miRNA-574-5p:1.29±0.46比0.82±0.24;miRNA-106b:1.51±0.44比0.95±0.29;hs-AFP-L3:(26.82±5.03)μg/L比(19.12±3.99)μg/L]、早期[miRNA-574-5p:1.31±0.44比0.90±0.28;miRNA-106b:1.49±0.51比0.99±0.32;(26.60±4.98)μg/L比(18.94±4.02)μg/L]、无远处转移[miRNA-574-5p:1.36±0.46比0.88±0.25;1.45±0.41比0.96±0.32;hs-AFP-L3:(26.79±5.44)μg/L比(19.04±3.83)μg/L]、无静脉瘤栓患者[miRNA-574-5p:1.39±0.43比0.92±0.31;miRNA-106b:1.43±0.39比1.0±0.34;hs-AFP-L3:(26.41±4.54)μg/L比(20.11±4.01)μg/L](P<0.05);肝功能Child-Pugh分级A级、B级、C级患者血清miRNA-574-5p(0.85±0.26比1.08±0.37比1.27±0.40)、miRNA-106b(0.92±0.29比1.15±0.35比1.41±0.38)、hs-AFP-L3[(18.69±3.72)μg/L比(23.17±4.88)μg/L比(26.45±5.32)μg/L]含量逐渐增加(P均<0.05)。miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3联合检测诊断早期HCC的曲线下面积为0.919(95%CI为0.873~0.980),敏感度和特异度分别为0.882、0.901。结论miRNA-574-5p、miRNA-106b、hs-AFP-L3联合检测对早期HCC的诊断具有较高的临床价值。

彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值

目的 探讨彩色多普勒超声检查联合血清微小RNA(miRNA)-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的早期诊断价值以及与卵巢癌周围血管侵袭的相关性。方法 回顾性选取2019年5月至2021年12月沧州市中心医院收治的102例卵巢肿瘤患者为研究对象,所有患者均行彩色多普勒超声检查,采用实时定量聚合酶链反应测定血清中miR-122-5p和miR-106b的表达水平。以病理诊断结果作为金标准,将研究对象分为卵巢癌组(n=51)和良性卵巢肿瘤组(n=51);卵巢癌组又分为侵袭组(n=32)和非侵袭组(n=19)。比较卵巢癌组与良性卵巢肿瘤组的临床资料(年龄、体重指数、生育和绝经)、彩色多普勒超声图像特征(实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4、肿瘤最大直径>10 cm)、彩色多普勒超声血流参数[搏动指数(PI)和血流阻力指数(RI)]、血清miR-122-5p、miR-106b水平。应用多因素Logistic回归模型探究相关变量对卵巢癌的独立预测作用。应用受试者工作特征(ROC)曲线评估彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平对卵巢癌的诊断价值。并比较侵袭组与非侵袭组彩色多普勒超声血流参数及血清miR-122-5p、miR-106b水平,采用Pearson相关性分析对彩色多普勒超声血流参数、miR-122-5p、miR-106b与卵巢癌周围血管侵袭的相关性进行分析。结果 卵巢癌组实性包块、伴腹水、乳头状结构≥4以及肿瘤最大直径>10 cm所占比例分别为80.39%、76.47%、74.51%、78.43%,均高于良性卵巢肿瘤组(9.80%、11.76%、29.41%、45.10%),PI、RI、血清miR-122-5p表达水平分别为0.94±0.27、0.48±0.11、1.01±0.27,均低于良性卵巢肿瘤组(1.47±0.32、0.71±0.19、1.42±0.30),miR-106b表达水平为4.57±1.13,高于良性卵巢肿瘤组(2.86±0.65),差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归模型分析显示,PI、RI、miR-122-5p、miR-106b是卵巢癌的独立预测因子,OR值分别为1.080、1.116、1.689、1.301(P<0.05)。ROC曲线分析显示,PI、RI、miR-122-5p和miR-106b以及联合诊断卵巢癌的曲线下面积(AUC)分别为0.869、0.874、0.859、0.898、0.969,其联合诊断的价值高于单独应用。侵袭组PI、RI和血清miR-122-5p表达水平均低于非侵袭组,血清miR-106b表达水平高于非侵袭组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,彩色多普勒超声血流参数PI、RI及血清miR-122-5p水平与卵巢癌周围血管侵袭呈负相关(r=-0.743、-0.696、-0.822,P<0.05),血清miR-106b水平与卵巢癌周围血管侵袭呈正相关(r=0.863,P<0.05)。结论 彩色多普勒超声检查联合血清miR-122-5p、miR-106b水平可以提高卵巢癌的早期诊断价值,并且可根据这些指标评估卵巢癌周围血管侵袭程度,值得应用推广。

miR-106b对缺氧诱导的大鼠视网膜血管化的影响及其机制

目的探讨miR-106b对缺氧诱导的大鼠视网膜血管化的影响及其机制。方法本研究实验动物为无特定病原菌级SD怀孕大鼠所产的12只新生大鼠。将新生大鼠与母鼠(用于哺乳)随机分配至对照组与氧诱导视网膜病变(OIR)组,每组6只,对照组正常饲养,OIR组新生大鼠建立OIR模型。采用免疫荧光染色观察大鼠视网膜的组织学变化,采用实时荧光定量PCR检测大鼠视网膜组织中miR-106b的表达情况。分离大鼠视网膜微血管内皮细胞(MRMVEC),采用双荧光素酶报告基因系统实验与Western blot验证miR-106b与缺氧诱导因子-1A(HIF1A)、血管内皮生长因子A(VEGFA)的靶向关系。将MRMVEC分为5组:Nor组(常氧培养)、Hyp组(缺氧处理)、Hyp-miR组(转染miR-106b mimic后接受缺氧处理)、Hyp-miR-pcHIF组(转染pcDNA-HIF1A与miR-106b mimic后接受缺氧处理)与Hyp-miR-pcVEG组(转染pcDNA-VEGFA与miR-106b mimic后接受缺氧处理);分别采用CCK-8法、划痕实验与成管实验检测细胞增殖、迁移及体外血管形成能力。结果免疫荧光染色结果显示:与对照组相比,OIR组大鼠视网膜血管内皮细胞增殖与迁移明显增强。实时荧光定量PCR检测结果显示:OIR组大鼠视网膜组织中miR-106b相对表达量(0.26±0.06)显著低于对照组(1.02±0.08),差异有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶报告基因系统实验与Western blot结果表明,miR-106可与HIF1A和VEGFA靶向结合并抑制其表达。与Nor组相比,Hyp组MRMVEC的相对细胞活力、相对迁移能力、相对血管形成能力均提高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与Hyp组相比,Hyp-miR组MRMVEC的相对细胞活力、相对迁移能力、相对血管形成能力均降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与Hyp-miR组相比,Hyp-miR-pcHIF组与Hyp-miR-pcVEG组MRMVEC的相对细胞活力、相对迁移能力、相对血管形成能力均有所提高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论上调miR-106b可靶向抑制HIF1A和VEGFA表达,从而减少缺氧诱导的视网膜微血管内皮细胞增殖、迁移与新生血管生成。

miR-106a通过调控PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调节胃癌细胞生物学行为的研究

目的探讨miR-106a对胃癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法选取AGS人胃癌细胞系,经培养后分为27个样本。所有样本随机分为miR-106a inhibitor、miR-mimic、miR-NC共计3组,分别给予miR-106a抑制剂、miR-106a模拟物及安慰剂干预。观察各组细胞存活率、细胞周期、细胞侵袭、迁移及caspase活性、Bax、Bcl-2、Casepase-3蛋白相对表达量、p85β、p-PDK1、p-AKT蛋白相对表达量。结果与miR-NC组比较,miR-106a inhibitor组AGS细胞活性降低[(分别为15.01±0.97)、(69.82±2.31)%](P<0.01);miR-106a mimics组AGS细胞G0/G1期细胞比例降低(P<0.05)(分别为17.33±1.04、58.24±0.82),G2/M和S期细胞比例升高(分别为50.11±1.12、35.64±1.07和31.56±0.92、9.24±0.25);miR-106a inhibitor组AGS细胞G0/G1期细胞比例升高(分别为78.43±1.12、58.24±0.82)(P<0.05),G2/M和S期细胞比例降低(分别为33.65±0.99、35.64±1.07和19.78±0.84、9.24±0.25)(P<0.01)。与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞的迁移、侵袭能力增强,miR-106a inhibitor组AGS细胞的迁移、侵袭能力减弱(P<0.01);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性降低,miR-106a inhibitor组AGS细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性升高(P<0.05);miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞Bax(分别为0.69±0.07、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为0.37±0.04、0.91±0.09)相对表达量降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高(分别为1.53±0.12、0.94±0.09),miR-106a inhibitor组AGS细胞Bax(分别为2.07±0.21、1.48±0.15)、Casepase-3蛋白(分别为1.23±0.12、0.91±0.09)相对表达量升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低(P<0.05)(分别为0.65±0.07、0.94±0.09);与miR-NC相比,miR-106a mimics组AGS细胞p85β(分别为1.24±0.12、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为2.13±0.23、1.01±0.10)、p-AKT蛋白(分别为1.14±0.11、0.72±0.06)相对表达量升高,miR-106a inhibitor组AGS细胞p85β(分别为0.69±0.07、0.94±0.09)、p-PDK1(分别为0.75±0.07、1.01±0.10)、p-AKT(分别为0.53±0.05、0.72±0.06)相对表达量降低(P<0.05)。结论miRNA-106a表达能通过调控宫颈癌细胞PI3K/PDK1/AKT蛋白通路调控其细胞生物学行为,包括降低癌细胞活力、迁移和侵袭,诱导癌细胞细胞周期停滞,抑制miRNA-106a表达可能是胃癌患者治疗的新靶点之一。

miR-106b对鼻咽癌细胞凋亡的促进和对增殖的抑制作用

目的探讨miR-106b对鼻咽癌细胞凋亡和增殖的影响。方法应用miRNA芯片分析获得鼻咽癌组织和癌旁正常组织表达差异的miRNA,TaqMan miRNA检测试剂盒和实时荧光定量PCR分别检测miR-106和RhoC mRNA在鼻咽癌和癌旁组织中的表达,用miRnada预测miR-106b和靶基因的结合位点,采用双荧光素酶验证靶基因,Western blot检测miR-106b调控靶基因RhoC的表达水平。用Annexin V-PI和TUNEL检测miR-106b对鼻咽癌细胞凋亡的影响,用MTT检测miR-106b对鼻咽癌细胞增殖的影响。结果 miRNA芯片分析发现鼻咽癌组织中miR-106b的表达较癌旁正常组织低。RT-PCR结果显示miR-106b在鼻咽癌组织中表达减少(P<0.05),RhoC在鼻咽癌组织中表达增加(P<0.05),miR-106b和RhoC在鼻咽癌组织中表达呈负相关(r=―0.586 6,P<0.001)。荧光素酶报告基因实验结果显示miR-106b组荧光素酶活性低于空质粒组(P<0.05),Western blot结果显示miR-106b组鼻咽癌细胞中RhoC的表达较空质粒组降低(P<0.05)。Annexin V-PI和TUNEL结果显示,miR-106b组鼻咽癌细胞凋亡较空质粒组增加(P<0.05);MTT结果显示miR-106b组鼻咽癌细胞增殖能力较空质粒组降低(P<0.05)。结论 miR-106b可能通过下调RhoC的表达诱导鼻咽癌细胞凋亡并抑制鼻咽癌细胞增殖。

hsa-miR-126和hsa-miR-518b在食管鳞癌中的表达

目的探讨食管鳞癌及正常组织微小RNA(miRNA)分子表达谱的差异,寻找并验证具有差异表达的miRNA。方法随机选3例首次诊治食管鳞癌患者的手术切除标本,取癌组织及正常粘膜。采用荧光探针杂交芯片扫描技术,获得食管鳞癌miRNA表达谱,并对表达谱的可靠性进行荧光实时定量RT-PCR验证。另取15例首次诊治食管鳞癌患者手术切除标本的癌组织及正常粘膜,对其中具有表达差异的hsa-miR-126和hsa-miR-518b进行进一步验证。结果得到了食管鳞癌及正常组织的MicroRNA表达谱,分析得到表达变化且具有统计学意义(单侧t检验,P<0.05)的miRNA11个,其中上调1个,下调10个。在另外15对验证样本中,hsa-miR-126上调10例(配对t检验,P<0.05),hsa-miR-518b下调12例(配对t检验,P<0.05)。结论 hsa-miR-126和hsa-miR-518b在食管鳞癌组织和正常组织中存在差异表达,hsa-miR-126在食管癌组织中上调,hsa-miR-518b下调。

miR-106 b在乳腺癌组织中的表达及其增强乳腺癌细胞顺铂化疗敏感性的机制研究

目的:探讨miR-106b在乳腺癌组织中的表达及其增强乳腺癌细胞顺铂化疗敏感性的机制。方法:随机选取2015年10月至2018年5月在本院进行手术切除的乳腺癌患者58例,取乳腺癌组织和癌旁组织提取细胞DNA,用荧光定量PCR的方法检测miR-106b的表达量。购买乳腺癌MCF-7细胞系,构建促进miR-106b表达的高表达组、抑制miR-106b表达的低表达组细胞系。用不同浓度的顺铂处理,48h后观察在体外和裸鼠皮下肿瘤的受抑制情况。荧光定量PCR法检测PTEN/PI3K/AKT信号通路相关基因的表达。结果:荧光定量PCR显示乳腺癌组织中miR-106b的相对表达量高于癌旁组织(P<0.05)。在20、30和40μmol/L浓度时,对照组和高表达组的相应浓度下的细胞抑制率均显著高于低表达组,对照组相应浓度下的细胞抑制率均显著高于低表达组(P<0.05)。在20、30和40μmol/L浓度时,对照组和高表达组的相应浓度下的荧光强度均低于低表达组,且高表达组均显著低于对照组(P<0.05)。低表达组PTEN的相对表达量显著低于对照组,而高表达组PTEN的相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。低表达组的PI3K和AKT的相对表达量显著高于对照组,高表达组的PI3K和AKT的相对表达量显著低于对照组(P<0.05)。结论:miR-106b在乳腺癌中高表达,且表达量越高,乳腺癌细胞对顺铂的化疗敏感性越强。

Hsa-miR-106a在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的分析hsa-miR-106a在胃癌组织中相对于正常组织的表达及其与病理分级及临床分期的关系。方法从石蜡组织包埋的19例胃癌及19例正常组织中提取总RNA,应用Real-time PCR方法检测miR-106a的表达情况,并分析其与胃癌病理分级及临床分期的关系。结果 miR-106a在胃癌组织中有14例高表达,5例低表达,在胃癌组织中的表达明显高于正常组织(P<0.01),其表达与胃癌的病理分级、临床分期密切相关。结论 miR-106a可能参与了胃癌的发生、发展过程。

Hsa-miR-125b在人胃癌耐药细胞株中的表达及其靶基因的功能分析

研究表明,Hsa-miR-125b在人胃癌耐氟尿嘧啶细胞株BGC823/Fu中表达下降。为进一步探讨hsa-miR-125b在获得性耐药中所起的作用,文章应用miRbase、靶基因预测软件、Gene Ontology数据库及KEGG数据库对hsa-miR-125b的序列特征、进化保守性、靶基因及功能以及靶基因所参与的信号通路等进行了深入的生物信息学分析。结果显示:has-miR-125b在多个物种之间具有高度序列保守性;通过软件预测获得hsa-miR-125b靶基因79个,其分子功能包括转录调节、蛋白质结合和肽酶类活性等(P<0.001),其所参与的生物学过程主要有细胞周期、细胞增殖、细胞凋亡的正性或负性调控以及细胞因子刺激反应性、药物反应性、DNA损伤反应性等(P<0.001),调控包括MAPK、Wnt、p53等多条信号转导通路(P<0.01)。上述结果表明hsa-miR-125b可能参与调控多个生物学过程和信号转导通路,而其中细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期等生物学过程以及MAPK、Wnt、p53等信号通路已被证实与肿瘤耐药的发生有关。因此,hsa-miR-125b可能通过调控上述环节中的靶基因来影响肿瘤细胞对药物的敏感性,从而为hsa-miR-125b在肿瘤耐药中的作用机制提供新的研究线索。

miR-106b在原发性肝癌中的表达及与预后的关系

目的探讨miR-106b在肝癌(HCC)组织中的表达及其临床意义。方法选择10对HCC组织及相应正常肝组织标本及82例有随访资料的HCC组织切片。qRT-PCR法及锁定核酸原位杂交检测miR-106b在HCC组织的表达,分析miR-106b表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果 miR-106b在HCC组织中表达上调(P<0.05)。miR-106b表达与转移、组织分级、肝硬化及血清甲胎蛋白明显相关(P=0.046、0.019、0.004及0.043),而与年龄、性别、乙型肝炎、肿瘤大小及门脉癌栓无明显相关。HCC组织miR-106b高表达的患者5年生存率明显低于低表达患者(P<0.01),miR-106b高表达是影响HCC患者总体生存的独立风险因素(P<0.05)。结论 miR-106b在HCC组织中表达明显上调,可能参与了HCC的发展过程,有望成为一种新的HCC预后参考指标。

生物信息学预测hsa-miR-26b的作用靶标及功能

目的通过生物信息学预测hsa-miR-26b的靶基因,进一步分析其潜在功能,为其后续功能研究提供理论依据。方法用pubmed、谷歌(google)等工具检索hsa-miR-26b相关文献;用miRbase、NCBI、UCSC Browser和Promoter scan等在线工具分析hsa-miR-26b序列及所在基因组特征;用TargetScan、PicTar及miRanda预测hsa-miR-26b的靶基因;通过功能富集分析(GOanalysis)和信号转导通路富集分析(Pathway analysis),预测所得靶基因和已证实的靶标基因。结果研究证实hsa-miR-26b与神经发育、心肌肥大及各种肿瘤发生、发展有关;hsa-miR-26b位于CTDSP1基因内含子内,但可能具有与该基因不同的启动子;3种方法预测结果取交集获得可能靶标基因33个,合并已知靶标基因14个;hsa-miR-26b靶基因主要参与钠离子转运、溶酶体组织和生物形成、抑制细胞增殖、转运等生物学过程,涉及Notch、氨基糖类代谢、ABC转运子、VEGF及TGF-β等信号转导通路。结论 hsa-miR-26b的功能较为广泛,与发育、代谢等密切相关。

低浓度亚硝酸盐对A106B碳钢材料腐蚀的影响

为验证某电站闭式循环冷却水系统中的Fe2+含量显著增加是否由低浓度的污染离子NO2-引起,采用静态挂片失重法、旋转挂片失重法和电化学方法评估了低浓度亚硝酸盐对碳钢材料的腐蚀影响。结果表明,室温条件下,在pH为10.0左右的除氧LiOH溶液中,添加3mg.kg-1 NaNO2使A106B碳钢的平均腐蚀速率从0.66μm.a-1增大至0.99μm.a-1,但当空气漏入时A106B碳钢的平均腐蚀速率为73μm.a-1。对比空气溶解引起水样碳酸化对腐蚀的影响,低浓度NO2-的影响基本可以忽略。

miR-106b在鼻咽癌组织中表达及对鼻咽癌CNE-2细胞生物学特性的影响

目的探讨miR-106b在鼻咽癌组织中的表达及其对鼻咽癌CNE-2细胞生物学特性的影响。方法选取68例份初治鼻咽癌患者的手术切除标本和45例份鼻咽炎患者的鼻咽部活检组织标本,采用实时荧光定量PCR法检测miR-106b表达,分析miR-106b表达与鼻咽癌患者临床病理参数的关系。取体外培养的对数生长期人鼻咽癌细胞株CNE-2分为四组(1×106个/组)。miR-106b模拟物组、miR-106b抑制物组分别转染miR-106b模拟物及miR-106b抑制物序列,阴性对照组转染阴性对照序列,空白对照组不处理;采用实时荧光定量PCR技术检测各组miR-106b表达,MTT法检测各组细胞增殖情况(以吸光度值表示),流式细胞仪检测各组细胞周期,Transwell试验检测各组细胞迁移和侵袭能力。结果鼻咽癌及鼻咽炎组织miR-106b相对表达量分别为1.57±0.15、1.14±0.12,二者比较P<0.05;miR-106b相对表达量与鼻咽癌患者淋巴结转移、侵犯颈动脉鞘和侵犯颅底有关(P均<0.05)。各组miR-106b相对表达量:miR-106b模拟物组高于miR-106b抑制物组、阴性对照组和空白对照组,miR-106b抑制物组低于阴性对照组和空白对照组,P均<0.05;各组细胞增殖情况:miR-106b模拟物组细胞接种后24、48、72和96 h时吸光度值均高于miR-106b抑制物组、阴性对照组和空白对照组,而miR-106b抑制物组低于阴性对照组和空白对照组,P均<0.05;各组细胞周期:miR-106b模拟物组S期细胞比例高于miR-106b抑制物组、阴性对照组和空白对照组,而miR-106b抑制物组细胞S期比例低于阴性对照组和空白对照组,P均<0.05;各组细胞迁移和侵袭情况:miR-106b模拟物组迁移和侵袭细胞数均高于miR-106b抑制物组、阴性对照组和空白对照组,且miR-106b抑制物组均低于阴性对照组和空白对照组,P均<0.05。结论 miR-106b在鼻咽癌组织中呈高表达;miR-106b过表达可促进鼻咽癌CNE-2细胞增殖、迁移和侵袭能力。

miR-106b在肝癌细胞中激活Wnt通路

目的:探讨肝癌细胞中miR-106b对Wnt/β-catenin信号传导通路的影响。方法:改变肝癌细胞中miR-106b表达,TOP/FOP荧光素酶试验检测Wnt/β-catenin信号通路活性的变化;Real-time PCR方法检测Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达的改变;Western blotting方法检测细胞核内β-catenin表达改变。结果:过表达miR-106b,肝癌细胞中TOP/FOP荧光比值显著增加,其下游6个靶基因mRNA表达量也显著上调。而抑制miR-106b,则下调荧光比值和下游靶基因的表达。同时发现,miR-106b表达,促进QGY-7703细胞核内β-catenin表达增加,而抑制miR-106b,则核内β-catenin下调。结论:miR-106b在肝癌细胞中可激活Wnt/β-catenin信号通路。

miR-106b靶向调控TGF-β/Smad通路对结肠癌细胞侵袭和迁移的促进作用

目的:探讨miR-106b靶向转化生长因子β受体1(TGF-βR1)对结肠癌细胞侵袭和迁移的影响,阐明miR-106b与TGF-βR1基因的靶向关系及其可能作用机制。方法:选取30例结肠癌患者癌组织和癌旁正常结肠组织、结肠癌SW-480细胞及正常结肠上皮NCM460细胞为研究对象;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各种组织和细胞中miR-106b表达水平及细胞中TGF-βR1 mRNA表达水平。将结肠癌SW-480细胞分为空质粒组(转染miR-NC空质粒)、miR-106b组(转染miR-106b-mimics)、pGL3-TGF-βR1组(转染pGL3-TGF-βR1)和miR-106b-mimics+pGL3-TGF-βR1组(同时转染miR-106b-mimics和pGL3-TGF-βR1);生物信息分析法预测miR-106b与TGF-βR1的靶向作用关系,荧光素酶报告实验检测各组SW-480细胞中荧光素酶活性。Transwell小室实验检测各组SW-480细胞侵袭能力,细胞划痕实验检测各组SW-480细胞划痕愈合率,Western blotting法检测各组SW-480细胞中TGF-βR1、磷酸化Smad同源物2(p-Smad2)和磷酸化Smad同源物3(p-Smad3)蛋白表达水平。结果:结肠癌组织中miR-106b表达水平高于正常结肠组织,结肠癌SW-480细胞中miR-106b表达水平高于正常结肠上皮NCM460细胞(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果提示TGF-βR1为miR-106b的靶基因。与空质粒组比较,miR-106b组SW-480细胞中TGF-βR1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),侵袭细胞数和细胞划痕愈合率明显升高(P<0.01),细胞中p-Smad2和p-Smad3蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与miR-106b组比较,miR-106b-mimics+pGL3-TGF-βR1组SW-480细胞中TGF-βR1 mRNA和蛋白表达表达水平明显升高(P<0.01),侵袭细胞数和细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01),细胞中p-Smad2和p-Smad3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:miR-106b过表达可能通过抑制TGF-β/Smad通路促进结肠癌细胞的侵袭和迁移。

MiR-106b对食管癌KYSE150细胞的生长及细胞上皮间质转化的影响

目的研究微小RNA106b(miR-106b)对食管癌KYSE150细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的影响,为临床治疗食管癌提供新的理论依据。方法用miR-106b慢病毒转染KYSE150细胞,实验分为3组:control组(未转染miR-106b的KYSE150细胞)、miR-NC组(转染随机序列)和miR-106b组(转染miR-106b的KYSE150的细胞)。采用实时荧光定量聚合酶联反应(qRT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)检测miR-106b和EMT的相关标记物E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-Cadherin)的表达情况,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell方法检测细胞的侵袭能力。结果慢病毒稳定转染miR-106b后,食管癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力均增强(P<0.05);qRT-PCR与Western blot检测显示miR-106b组E-Cadherin表达较miR-NC组、control组明显降低(P<0.05);N-Cadherin表达明显升高(P<0.05)。结论 miR-106b能够促进食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭,同时能促进上皮间质的转化。

MiR-106b在2型糖尿病db/db小鼠骨骼肌中的表达及生物信息学分析

目的微小RNA(microRNA,miRNA)是一类小分子单链非编码RNA,广泛参与各种生物学过程,与肿瘤、糖尿病、心血管疾病关系密切,miR-106b与胰岛素抵抗糖尿病密切相关。文中检测miR-106b在2型糖尿病db/db小鼠骨骼肌中的表达,并对其靶基因进行预测及相关生物信息学分析,为miR-106b靶基因的实验验证提供数据支持,并为深入研究miR-106b的生物学功能和调控机制提供理论指导。方法利用实时PCR技术检测miR-106b在糖尿病db/db小鼠骨骼肌中表达。利用miRBase、NCBI、UCSC Browser等在线工具分析miR-106b序列。把利用TargetScan和StarBase 2种计算方法预测的miR-106b靶基因的交集作为分析的基因集合,分别进行基因本体(gene ontology,GO)注释描述、GO富集分析和生物通路富集分析。结果①miR-106b在2型糖尿病db/db小鼠骨骼肌表达显著升高;②miR-106b在各物种之间具有高度保守性;③预测靶基因集合分别富集在代谢调节、生物合成、细胞增殖与凋亡等基本生物学过程和蛋白结合、转录调控等分子功能上(P<0.001)。经典miR-106b预测靶基因集合显著富集于KEGG通路数据库中的Wnt信号通路、mTOR信号通路、TGF-β信号通路和胰岛素信号通路等12个信号转导通路,以及前列腺癌、慢性髓细胞性白血病、黑素瘤等12个疾病通路中(P<0.05)。结论 MiR-106b在db/db小鼠骨骼肌表达升高。miR-106b与多种肿瘤的发生和细胞周期调节有关。miR-106b参与物质代谢等过程的调控,可能在胰岛素抵抗、2型糖尿病的发病中起重要作用。

男性不育症患者精浆miR-106b水平变化及意义

目的检测男性不育症患者精浆全基因组微小核糖核酸（miRNAs）表达谱，筛选差异表达的miR-106b，探讨其作为男性不育症分子诊断指标的可行性。方法收集163例男性不育症患者及126例正常生育男性精浆，分别混合；用Solexa测序技术分别检测弱精症、非梗阻性无精症和正常生育男性的混合精浆中592种miRNAs的表达，用实时荧光定量PCR（qRT—PCR）对表达异常的miR．106b在单个样本中逐一进行验证。结果Solexa测序结果显示，19种miRNAs在不育症患者精浆中的表达量与健康男性相比变化〉2倍，miR．106b在弱精症和无精症患者中分别上调了6．89倍和2．6l倍。qRT-PCR结果表明，弱精症组miR．106b含量[中位数（四分位数）]为719．35（518．49，1183．39）fmol／L，与正常生育组的291．35（148．83，421．56）fmol／L比较，明显升高（U=91．00，P〈0．01）；无精症患者miR-106b的含量则明显降低，为60．07（18．38，292．52））fmol／L（U=195．00，P〈0．01）。ROC曲线分析显示，miR-106b诊断弱精症和无精症的曲线下面积（AUCROC）分别为0．844（95％CI，0．734～0．954）和0．720（95％CI，0．575～0．864）；鉴别弱精症和无精症的AUCROC为0．902（95％CI，0．822～0．982）。结论男性不育症患者精浆miR．106b表达水平与正常生育男性存在明显差异，有望成为男性不育症诊断和鉴别诊断的辅助指标。