血清hsa-miR-139-3p和hsa-miR-147b在肺腺癌中的表达及诊断价值

目的 比较血清hsa-miR-139-3p和hsa-miR-147b在肺腺癌及健康对照组中的表达水平差异,探索血清hsa-miR-139-3p和hsa-miR-147b对患者的诊断价值。方法 收集齐齐哈尔附属第三医院2020年1月-2021年1月就诊的20例肺腺癌患者和20名健康对照者的血清进行RNA提取。应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法,检测血清中hsa-miR-139-3p和hsa-miR-147b的表达量。利用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清hsa-miR-139-3p和hsa-miR-147b的诊断效能。结果 肺腺癌患者血清hsa-miR-139-3p和hsa-miR-147b的表达水平较健康对照组显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示血清hsa-miR-139-3p和hsa-miR-147b分别检测以及联合检测均能够有效区分非小细胞肺癌患者和健康人群,曲线下面积(AUC)分别为0.79、0.7625和0.8125。结论 血清hsamiR-139-3p和hsa-miR-147b有希望作为肺腺癌非侵入性的分子诊断标志物,但尚需要进一步比较研究和扩大验证。

Hsa-miR-139-3p靶基因预测及生物信息学分析

目的对hsa-miR-139-3p 的靶基因进行预测及相关生物信息学分析,为hsa-miR-139-3p 靶基因的实验验证及其调控机制提供理论基础。方法采用3 种软件预测hsa-miR-139-3p 的靶基因并对结果进行功能注释(GO)和信号通路富集分析(KEGG)。结果 hsa-miR-139-3p 成熟序列在各物种间高度保守。获得的133 个靶基因存在于细胞各个组分,主要有转录调控、基因表达调控和蛋白连接等分子功能,并富集于发育生物学过程,涉及黏着斑信号转导以及基因信息处理等信号通路。结论 hsa-miR-139-3p 通过调控靶基因参与人类生命活动和疾病过程的很多方面,尤其生长发育和癌症过程是值得进一步研究的方向。

hsa-miR-22-3p靶基因预测及功能分析

本研究旨在通过生物信息学分析,预测和验证hsa-miR-22-3p的靶基因,并探讨其在不同物种、组织和信号通路中的功能。方法 本研究利用了多种在线数据库和软件,如miRBase、ClustalOmega、Cytoscape3.6.1等,进行了对不同物种间的miR-22-3p保守性分析。预测hsa-miR-22-3p的靶基因,绘制Venn图,得到交集靶基因集合。对交集靶基因进行GO功能注释和KEGG Pathway富集分析,探索其在生物过程和信号通路中的作用。预测交集靶基因编码蛋白质之间的相互作用关系,构建蛋白蛋白互作网络图谱,筛选出核心基因。结果 miR-22-3p是一种在多种生物中高度保守的miRNA,与心肌细胞分化和心血管疾病密切相关。hsa-miR-22-3p的36个交集靶基因在肿瘤、淋巴和腹腔等组织中表达较高,参与了组蛋白修饰、染色质重构、低氧应答等276个生物学过程,在乳腺癌、雌激素、FoxO、破骨细胞分化、肿瘤、PI3KAkt等8个信号通路中显著富集。hsa-miR-22-3p的10个核心基因ESR1、SIRT1、PTEN、CREB1、SP1、HDAC4、MECP2、YWHAZ、MAPK14、SNAI1在多种疾病中发挥重要作用,如肿瘤、糖尿病、神经退行性疾病、炎症、衰老、心肌肥厚、心肌缺血再灌注、心房纤维化、动脉粥样硬化等。结论 本研究为hsa-miR-22-3p在肿瘤、心血管等多种疾病中的关键调控机制提供了新的理解,也为肿瘤、心血管等疾病的早期诊疗提供了新的思路。

结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平及肠道菌群的变化及其与复发转移的关系

目的分析结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平与临床病理的关系、肠道菌群的变化及其与复发转移的关系。方法选取2019年3月至2021年3月入该院接受根治术治疗的结肠癌患者共126例作为结肠癌组,另选取同期在该院接受体检的体检健康者共83例作为健康对照组。观察两组血清miR-139-3p和miR-377-3p的表达水平及肠道菌群状态情况,对比不同临床特征的结肠癌患者血清指标表达水平,对比不同复发转移情况的结肠癌患者肠道菌群的变化情况,分析结肠癌患者血清miR-139-3p和miR-377-3p表达水平与其临床病理及肠道菌群表达的相关性。结果结肠癌组血清miR-139-3p和miR-377-3p较健康对照组均呈更高表达,差异有统计学意义(均P<0.05);结肠癌组术前、术后的双歧杆菌数量均低于健康对照组,大肠杆菌数量均高于健康对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);结肠癌组中发生复发转移、低分化、临床分期处于Ⅲ期的患者血清miR-139-3p和miR-377-3p呈更高表达,差异有统计学意义(均P<0.05);Spearman相关系数分析显示,血清miR-139-3p、miR-377-3p表达水平与结肠癌患者临床分期、复发转移均呈正相关,与临床分化程度呈负相关(均P<0.05);复发转移组患者双歧杆菌数量较未复发转移组明显更低,大肠杆菌数量较未复发转移组相比明显升高,差异有统计学意义(均P<0.05);Pearson相关系数分析显示,血清miR-139-3p、miR-377-3p与结肠癌患者大肠杆菌数量呈正相关,上述两项指标与双歧杆菌数量呈负相关(均P<0.05)。结论结肠癌根治术后双歧杆菌属高表达和大肠杆菌属低表达意味着结肠癌患者复发转移风险更低,血清miR-139-3p和miR-377-3p与结肠癌患者临床分期、肿瘤分化程度、复发转移及肠道菌群变化均密切相关,后续临床针对结肠癌患者可通过监测上述两项血清指标及肠道菌群来辅助评估患者临床病情严重程度,对优化完善诊疗方案、降低患者复发转移风险具有积极作用。

颈动脉血流动力学、hsa-microRNA-139-5p与2型糖尿病大血管病变的相关性研究

目的 探究剪切应力相关的颈动脉多普勒超声参数在2型糖尿病(T2DM)大血管病变早期诊断中的临床价值,并通过对剪切应力敏感性微小RNAs(miRs) hsa-miR-139-5p的研究在基因水平进行相关机制的进一步探究。方法 选择2022年1—12月在本院内分泌科就诊的T2DM患者200例作为研究对象,将T2DM合并大血管病变患者100例设为T2DM大血管病变组(观察组),将单纯T2DM患者100例设为单纯T2DM组(对照组)。比较两组研究对象颈总动脉(CCA)收缩期最大流速(PSV)、CCA舒张末期容积(EDV)和CCA血管阻力指数(RI)等超声参数,研究对象工作特征(ROC)分析各参数对T2DM大血管病变的诊断价值。预测T2DM大血管病变相关的剪切应力敏感性miRs,选择目标miR。qRT-PCR测定两组研究对象外周血单个核细胞hsa-miR-139-5p表达水平,免疫印迹蛋白试验(WB)测定其下游靶基因VEGF和IGFIR蛋白表达,并进行统计学分析。结果 T2DM大血管病变组CCA-PSV、CCA-EDV明显低于单纯T2DM组(P<0.001),T2DM大血管病变组CCA-RI明显高于单纯T2DM组(P<0.001)。CCA-PSV和CCA-EDV是T2DM大血管病变的独立危险因素,对于T2DM大血管病变的诊断价值较高。T2DM大血管病变组单个核细胞hsa-miR-139-5p表达高于单纯T2DM组(P<0.001)。T2DM大血管病变组VEGF的表达高于单纯T2DM组(P<0.05),单纯T2DM组IGFIR表达高于T2DM大血管病变组(P<0.05)。结论 hsa-miR-139-5p通过调节下游靶基因VEGF和IGFIR的表达参与T2DM大血管病变的发生发展,而CCA-PSV和CCA-EDV作为间接反映血管壁剪切应力的血流动力学参数或可作为T2DM大血管病变早期诊断的临床影像学参考指标。

彩色多普勒超声联合血清miR-139-3p水平检测在凶险性前置胎盘合并胎盘植入诊断中的应用价值

目的探讨彩色多普勒超声(彩超)联合血清miR-139-3p水平检测在凶险性前置胎盘(PPP)合并胎盘植入诊断中的应用价值。方法前瞻性选取2022年1月至12月入同济大学附属第一妇婴保健院产科接受剖宫产手术的PPP患者65例作为研究对象,其中胎盘非植入患者为38例(胎盘非植入组),PPP伴胎盘植入患者为27例(胎盘植入组)。PPP伴胎盘植入者中,中央型为13例,部分型为8例,边缘型为6例。同时收集同院产科行剖宫产手术的无妊娠合并症、无胎盘前置的孕妇60例作为对照组。所有研究对象均行彩超检查及血清miR-139-3p检查,采用四格表法分析彩超诊断PPP合并胎盘植入的价值;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析彩超联合血清miR-139-3p水平对PPP合并胎盘植入的诊断效能。结果与对照组相比,胎盘非植入组和胎盘植入组中miR-139-3p水平明显降低(P<0.05);与胎盘非植入组相比,胎盘植入组中miR-139-3p水平显著降低(P<0.05);中央型患者血清中miR-139-3p水平明显低于部分型和边缘型(P<0.05),部分型患者血清中miR-139-3p水平明显低于边缘型(P<0.05);彩超联合血清miR-139-3p水平检测诊断PPP的曲线下面积、灵敏度、阳性预测值及阴性预测值均高于彩色超声以及miR-139-3p单独诊断,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PPP合并胎盘植入患者血清中miR-139-3p表达水平降低,彩超联合血清中miR-139-3p表达水平检测在PPP合并胎盘植入中具有一定的诊断效能。

IRS-1/PI3K/Akt2信号通路调控miR-139-5p对2型糖尿病大鼠的干预效果

目的分析基于胰岛素受体底物1(IRS-1)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt2)信号通路调控微小核糖核酸139-5p(miR-139-5p)对2型糖尿病大鼠的干预效果。方法选取52只雄性SPF级Wistar大鼠,12只大鼠作为对照组,另外40只建立2型糖尿病模型,将建模成功36只大鼠采用随机数字表法分为模型组、沉默组、过表达组,每组各12只。对照组、模型组大鼠注射同剂量0.9%氯化钠溶液,沉默组大鼠尾静脉注射10μL miR-139-5p沉默慢病毒悬液,过表达组大鼠尾静脉注射10μL miR-139-5p过表达慢病毒悬液,于miR-139-5p转染后,对各组大鼠毛发光泽度、活动、形态等一般情况进行观察。对各组大鼠miR-139-5p、IRS-1、PI3K、Akt2表达量、血糖相关指标[胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、空腹胰岛素、空腹血糖、胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)]、炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平、血脂变化水平、IRS-1/PI3K/Akt2信号通路蛋白表达量进行检测。结果与对照组相比,模型组、沉默组、过表达组miR-139-5p表达量、HOMA-β、IRS-1、PI3K、Akt2 mRNA表达量、IRS-1、磷酸化IRS-1(p-IRS-1)、PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt2、磷酸化Akt2(p-Akt2)表达量均降低,HOMA-IR、空腹胰岛素、空腹血糖、IL-6、TNF-α、总胆固醇、甘油三酯均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,沉默组、过表达组miR-139-5p表达量、HOMA-IR、空腹胰岛素、空腹血糖、IL-6、TNF-α、总胆固醇、甘油三酯均降低,HOMA-β、IRS-1、PI3K、Akt2 mRNA表达量、IRS-1、p-IRS-1、PI3K、p-PI3K、Akt2、p-Akt2表达量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与沉默组相比,过表达组miR-139-5p相对表达量、HOMA-IR、空腹胰岛素、空腹血糖、IL-6、TNF-α、总胆固醇、甘油三酯降低,HOMA-β、IRS-1、PI3K、Akt2 mRNA表达量、IRS-1、p-IRS-1、PI3K、p-PI3K、Akt2、p-Akt2表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论上调miR-139-5p表达,可调节2型糖尿病大鼠体内血糖、血脂水平,其机制可能与IRS-1/PI3K/Akt2信号通路有关。

hsa-miR-877-3p通过靶向MCM10调控卵巢癌细胞迁移和活性氧产生

目的探讨has-miR-877-3p调控卵巢癌细胞迁移和活性氧(ROS)产生的作用机制。方法运用生物信息学分析hsa-miR-877-3p在卵巢癌组织中表达,RT-qPCR检测卵巢癌细胞株中hsa-miR-877-3p表达。构建hsa-miR-877-3p过表达及抑制SKOV3细胞,RNA干扰技术敲低SKOV3细胞中MCM10基因,划痕实验及流式细胞术分别检测细胞迁移、ROS水平。结果hsa-miR-877-3p在卵巢癌中表达低于正常组织(P<0.01),其在卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、A1847和8910中表达也降低(P<0.01)。hsa-miR-877-3p过表达抑制SKOV3细胞迁移、增加ROS水平(P<0.01),而抑制hsa-miR-877-3p表达增加SKOV3细胞迁移(P<0.01)。MCM10基因沉默抑制SKOV3细胞迁移、促进ROS表达(P<0.01)。结论hsa-miR-877-3p可以通过调控MCM10基因抑制SKOV3细胞迁移并提高其活性氧水平。

外泌体hsa-miR-522-3p通过调节CDK6参与卵巢癌进程

目的:探讨外泌体hsa-miR-522-3p在卵巢癌发生发展中的作用及其潜在机制。方法:采用荧光实时定量PCR检测hsa-miR-522-3p在组织和细胞中的表达水平。使用EdU、Transwell和流式细胞术检测外泌体hsa-miR-522-3p对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。通过荧光素酶测定和蛋白质印迹评估hsa-miR-522-3p对CDK6表达的调控作用。进一步构建裸鼠成瘤模型验证外泌体hsa-miR-522-3p对肿瘤生长的影响。结果:本研究发现hsa-miR-522-3p在卵巢癌组织、血浆外泌体及卵巢癌细胞的外泌体中表达显著升高。与NC组比较,hsa-miR-522-3p模拟物组细胞的迁移和侵袭能力显著增高且差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,hsa-miR-522-3p抑制剂组可以促进caspase3和Bax的表达并抑制Bcl2的表达。荧光素酶报告结果显示,hsa-miR-522-3p能够靶向结合CDK6的3′-非翻译区(3′-UTR)来抑制其表达。裸鼠成瘤结果表明,外泌体hsa-miR-522-3p可增加瘤的体积及重量。结论:外泌体hsa-miR-522-3p通过调节CDK6参与卵巢癌的进程。本研究的发现将为外泌体hsa-miR-522-3p在卵巢癌发生中的机制提供新的见解。

MiR-139-5p靶向RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路对慢性脑低灌注大鼠认知障碍的影响

目的探究微小RNA(miR)-139-5p靶向受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1/RIPK3/混合系列蛋白激酶结构域蛋白(MLKL)信号通路对慢性脑低灌注(CCH)大鼠认知障碍的影响。方法将60只SPF级SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、miR-NC组、miR-139-5p mimic组、miR-139-5p mimic+RIPK1抑制剂Nec-1组(miR-139-5p mimic+Nec-1组),每组12只。除Sham组外,其余组均采用永久性结扎双侧颈总动脉构建CCH模型。采用新物体识别实验、Morris水迷宫实验评价大鼠的认知功能;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠海马组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素6(IL-6)水平。实时荧光定量PCR(qPCR)法检测大鼠海马组织miR-139-5p及RIPK1、RIPK3、MLKL m RNA表达。Western blot法检测大鼠海马组织RIPK1、RIPK3、MLKL、突触素(SYP)、突触后密度蛋白95(PSD95)、α-突触核蛋白(α-SYN)蛋白的表达。双萤光素酶报告基因实验验证miR-139-5p和RIPK1的靶向关系。结果与Sham组相比,Model组大鼠分辨系数降低,目标象限停留时间缩短,海马组织miR-139-5p、GSH-Px、SOD水平降低,SYP、PSD95蛋白表达降低(P<0.05),逃避潜伏期延长,海马组织MDA、TNF-α、IL-6水平升高,RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA和蛋白、α-SYN蛋白表达升高(P<0.05)。与Model组、miR-NC组相比,miR-139-5p mimic组相关指标的表达趋势与上述相反(P<0.05)。Nec-1进一步促进了上调miR-139-5p表达对CCH大鼠认知功能的恢复(P<0.05)。miR-139-5p和RIPK1存在结合位点。结论上调miR-139-5p可能通过靶向抑制RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路减轻CCH大鼠的认知障碍。

肝癌病人血清中长链非编码RNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p表达水平及其临床诊断价值分析

目的检测肝癌病人血清中长链非编码RNA BSN-AS2(lncRNA BSN-AS2)、hsa-miR-4782-3p表达水平,并分析两者在肝癌中的临床诊断价值。方法选取2018年3月~2020年3月在我院诊治的肝癌病人100例为研究组,另取同期体检健康者90例为对照组。采用实时定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测病人血清中lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p的表达水平;采用Spearman等级相关分析血清中lncRNA BSN-AS2与hsa-miR-4782-3p表达的相关性,同时分析二者与临床病理特征的关系;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p表达水平对肝癌的诊断效能。结果研究组血清lncRNA BSN-AS2的表达水平为(2.02±0.59),显著高于对照组的(1.05±0.25),研究组血清hsa-miR-4782-3p的表达水平为(0.69±0.15),低于对照组的(1.08±0.29),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。血清lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p表达水平与TNM分期、分化程度、甲胎蛋白(AFP)有关(P<0.05)。Spearman等级相关分析显示,肝癌病人血清lncRNA BSN-AS2与hsa-miR-4782-3p表达呈负相关(r=-0.536,P<0.05)。血清lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3单独及联合诊断肝癌的AUC分别是0.890、0.856和0.937,灵敏度分别为87.00%、93.00%和86.00%,特异度分别为78.89%、70.00%和92.22%;二者联合优于lncRNA BSN-AS2、hsa-miR-4782-3p各自单独预测(Z^(二者联合-lncRNA BSN-AS)=2.481、P=0.013,Z_(二者联合-hsa-miR-4782-3P)=3.503,P=0.001)。结论肝癌病人血清lncRNA BSN-AS2表达水平显著升高,hsa-miR-4782-3p水平显著降低,可作为诊断肝癌的潜在分子标志物。

miR-139-5p通过靶向Notch1抑制上皮性卵巢癌细胞的增殖与侵袭

目的:探讨miR-139-5p靶向Notch1抑制上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)细胞增殖和侵袭的作用机制。方法:选取2018年1月至2018年12月在河南省南阳市中心医院妇科手术切除的24例EOC患者的癌和相应的癌旁组织标本,以及人卵巢癌细胞系SKOV3、ES2、HEY-T30和人卵巢上皮细胞株IOSE80,用qPCR检测EOC组织和细胞系中miR-139-5p和Notch1 mRNA的表达。将过表达miR-139-5p载体、重组质粒pLV-Notch1转染至SKOV3细胞,并设置空白对照组(Ctrl组)和阴性对照组(NC组),用双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与Notch13’-UTR靶向关系,用CCK-8、Transwell、划痕愈合实验分别检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力,用Western blotting检测细胞中增殖和迁移相关蛋白的表达。结果:与癌旁组织和IOSE80细胞比较,EOC组织和细胞系中miR-139-5p表达显著降低、Notch1 m RNA表达显著升高(均P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果证实,Notch1是miR-139-5p的靶基因。与NC组比较,miR-139-5p mimic组3 d时SKOV3细胞的增殖、侵袭、迁移能力和Notch1、NICD、Cyclin D1、Cyclin A1、Snail1、β-catenin及N-cadherin表达水平均明显降低(均P<0.01),E-cadherin表达水平明显升高(P<0.01);同时过表达Notch1可逆转miR-139-5p抑制SKOV3细胞增殖、侵袭与迁移的作用。结论:miR-139-5p可靶向Notch1抑制EOC细胞的增殖、侵袭和迁移能力,可能与其下调NICD、Cyclin D1、Cyclin A1、Snail1、β-catenin、N-cadherin而上调E-cadherin的表达水平有关。

上皮性卵巢癌组织中miR-21-5p、miR-29-3p、miR-139-5p表达变化及意义

目的观察上皮性卵巢癌(EOC)组织中miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p的表达变化,并探讨其临床意义。方法收集卵巢组织标本182例,其中正常卵巢组织56例、良性上皮性肿瘤(BEOT)42例、EOC 84例。采用实时荧光定量PCR技术测定组织标本中的miR-21-5p、miR-29-3p和miR-139-5p,并分析其与EOC患者临床病理特征的关系。结果与正常卵巢组织、BEOT组织相比,EOC组织中miR-21-5p和miR-29-3p相对表达量增加,miR-139-5p相对表达量降低(P均<0.05);正常卵巢组织与BEOT组织比较,差异无统计学意义。与中高度分化、Ⅰ~Ⅱ期和无淋巴结转移的EOC组织相比,低分化、Ⅲ~Ⅳ期和有淋巴结转移的EOC组织miR-21-5p和miR-29-3p高表达者多,miR-139-5p高表达者少(P均<0.05)。结论 EOC组织中miR-21-5p和miR-29-3p表达上调并可能发挥促癌作用,miR-139-5p表达下调并可能具有一定抑癌作用,三者均可作为EOC的预后指标或者治疗靶标。

miR-139-3p在低氧诱导凋亡的心肌细胞中的表达及其作用研究

目的:探讨微小RNA-139-3p(miR-139-3p)在低氧诱导的原代心肌细胞凋亡模型中的表达及其意义。方法:在正常和低氧条件下,采用RT-qPCR检测乳大鼠原代心肌细胞miR-139-3p的表达水平;进一步将miR-139-3p抑制剂和miR-139-3p抑制剂阴性对照转染到心肌细胞后,将细胞置于37℃密闭的缺氧盒中(95%N_2和5%CO_2)培养12 h,采用流式细胞术和Western blot法检测细胞凋亡情况。结果:低氧培养12 h后,与正常培养组(n=3)比较,低氧组(n=3)心肌细胞中的miR-139-3p相对表达量显著上调(P<0.05)。低氧组心肌细胞凋亡率也显著升高(P<0.05)。与miR-139-3p抑制剂阴性对照组(n=3)比较,miR-139-3p抑制剂组(n=3)的心肌细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。结论:miR-139-3p在低氧诱导的原代心肌细胞凋亡模型中表达上调。抑制miR-139-3p的表达能降低低氧诱导的心肌细胞凋亡。

Hsa-miR-98-5p/DKK3信号轴对乳腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的:乳腺癌威胁着全世界女性的健康。虽然已发现大量微小RNA(microRNA,miRNA)在乳腺癌中异常表达,但仍需要构建一个完整的miRNA-信使RNA(messenger RNA,mRNA)网络。方法:利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载乳腺癌相关数据集,分析肿瘤组织与正常组织之间差异表达的miRNA。利用miRDB、miRTarBase和StarBase数据库分析差异miRNA靶向的基因。使用R语言中的ClusterProfiler包对靶基因进行富集分析。使用String数据库联合Cytoscape 3.6.2软件进行蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络分析及Hub基因的筛选;构建miRNA-Hub mRNA调控网络确定研究信号轴,然后通过细胞实验进行验证。结果:采用TCGA数据集识别出两个差异miRNAs。3个数据库取交集预测得到278个靶基因。共鉴定出10个Hub基因,从构建的miRNA-Hub基因网络图中发现,hsa-miR-98-5p/DKK3轴可能在乳腺癌的进展中起关键作用。细胞功能学实验证实hsa-miR-98-5p可抑制细胞凋亡,促进细胞的增殖、迁移和侵袭。双荧光素酶报告基因实验进一步验证了hsa-miR-98-5p与DKK3的结合作用。结论:本研究首先通过生物信息学分析鉴定出一个与乳腺癌进展相关的hsa-miR-98-5p/DKK3轴,初步证实hsa-miR-98-5p可通过靶向DKK3抑制乳腺癌细胞凋亡,促进细胞的增殖、迁移和侵袭。

Linc00261调控miR-139-3p对子宫内膜异位症小鼠异位内膜细胞黏附、侵袭和凋亡的影响

目的:探究长链非编码RNA Linc00261调控miR-139-3p对子宫内膜异位症(EMs)小鼠异位内膜细胞黏附、侵袭和凋亡的影响。方法:构建EMs小鼠模型,假手术组(Sham)作为对照。干预小鼠体内Linc00261和miR-139-3p的表达,并将EMs小鼠分组:pcDNA组(尾静脉注射pcDNA)、pcDNA-Linc00261组(尾静脉注射pcDNA-Linc00261)、miR-NC组(尾静脉注射miR-139-3p mimic阴性对照)、miR-139-3p mimic组(尾静脉注射miR-139-3p mimic)、mimic+pcDNA-Linc00261组(尾静脉注射miR-139-3p mimic和pcDNA-Linc00261)。qPCR检测EMs小鼠异位组织以及Sham组小鼠在位子宫内膜组织中Linc00261和miR-139-3p的表达;验证Linc00261和miR-139-3p之间的靶向关系;Western blotting检测各组侵袭转移相关因子(MMP2、MMP9)、细胞黏附相关因子(VCAM-1、ICAM-1)以及凋亡相关因子(Bax、Bcl-2)的表达;Tunel荧光染色检测各组异位内膜细胞凋亡情况。结果:相对于Sham小鼠,EMs小鼠组织中Linc00261表达明显降低,而miR-139-3p表达明显增高(均P<0.05)。Linc00261和miR-139-3p具有靶向关系。相对于pcDNA组,pcDNA-Linc00261组异位内膜细胞侵袭转移和黏附被抑制,细胞凋亡被诱导(均P<0.05)。相对于miR-NC组,miR-139-3p mimic组细胞侵袭转移和黏附被诱导,凋亡被抑制(均P<0.05)。Linc00261对EMs小鼠异位内膜细胞黏附、侵袭和凋亡的影响能够被miR-139-3p mimic逆转。结论:Linc00261能够通过调控miR-139-3p进而抑制EMs异位内膜细胞黏附和侵袭转移,促进细胞凋亡。

Hsa-miR-21-3p对食管癌细胞运动与侵袭能力的影响

目的:研究hsa-miR-21-3p对人食管癌细胞Eca9706侵袭和迁移能力的影响。方法:采用终浓度为30 nmol/L的寡核苷酸hsa-miR-21-3p mimics和阴性对照转染Eca9706细胞48 h后,用实时荧光定量PCR检测转染后hsa-miR-21-3p的表达水平,通过Transwell体外侵袭试验和划痕愈合试验分别观察hsa-miR-21-3p对Eca9706细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:与阴性对照组相比4较,hsa-miR-21-3p mimics转染组细胞中hsa-miR-21-3p表达明显升高(P<0.01),是阴性对照的1.1×10倍;Transwell体外侵袭试验结果显示镜下每个视野穿膜细胞数试验组(76.67±6.11)较阴性对照组(42.33±2.52)增加了81.1%(P<0.01),表明hsa-miR-21-3p的过表达显著增强食管癌细胞的侵袭能力;划痕愈合试验结果显示,hsa-miR-21-3p试验组的划痕宽度较对照组窄,在相同的时间点,试验组的划痕愈合能力均大于对照组(P<0.01),说明转染了hsa-miR-21-3p mimics的试验组细胞的迁移能力大于对照组。结论:Hsa-miR-21-3p的高表达可以使人食管癌细胞Eca9706的侵袭和迁移能力增强,提示其可能参与了食管癌进程中的浸润和转移。

hsa-miR-342-3p 生物信息学分析

通过生物信息学方法预测hsa-miR-342-3p靶基因及其功能机制。检索Pub Med有关hsa-miR-342-3p的研究报道并进行功能分析;检索miRBase获取hsa-miR-342-3p序列;通过Target Scan,Pictar和PITA数据库预测靶基因并取交集,对其进行组织和疾病特异性表达谱分析、功能富集分析(GO enrichment analysis)、信号转导通路富集分析(Pathway enrichment analysis)和蛋白质相互作用网络分析(PPI analysis)。结果发现:hsa-miR-342-3p序列在多物种间具有高度保守性;hsa-miR-342-3p在肾脏组织和急性淋巴细胞性白血病、乳腺癌疾病中表达水平较高(RPM≥1 000);预测得到14个hsa-miR-342-3p靶基因;靶基因分子功能分别富集于转化生长因子活性、DNA结合和蛋白激酶激活等(P<0.05);hsa-miR-342-3p靶基因GO生物学过程主要集中于大分子代谢抑制,肺部组织发育、呼吸系统发育及管状组织发育建成(P<0.05);细胞信号通路主要富集于TGF-Beta信号通路、细胞因子、受体作用信号通路及前列腺疾病信号通路(P<0.01)。hsa-miR-342-3p在体内分布广泛,预测的靶向TGF-Beta信号通路可能在疾病发生中发挥重要调控作用,是具有潜在研究价值的生物学靶标。

hsa-miR-192-3p的靶基因预测及功能分析

通过生物信息学方法预测hsa-miR-192-3p的靶基因及其靶基因的可能功能。首先通过miRbase在线数据库对hsamiR-192-3p的碱基序列及序列在各物种间的保守性进行分析,再通过miRGator v3. 0在线数据库查看hsa-miR-192-3p在各个组织器官中的表达丰富度情况;其次,应用Target Scan和miRanda在线数据库预测hsa-miR-192-3p的靶基因;最后,将预测得到的两个数据库的靶基因交集用DAVID在线数据库进行功能富集分析和信号转导通路富集分析。结果表明:hsa-miR-192-3p在人、家鼠、猕猴等生物中存在高度保守性; hsa-miR-192-3p在胃肠道、肾脏、肝胆系统、干细胞、鼻、脾、胸腺中表达丰富度较高;通过两个靶基因预测软件预测的靶基因取交集后共有190个;功能富集分析发现hsa-miR-192-3p靶基因富集在细胞质、细胞核、质膜、高尔基体等15个细胞组件(p<0. 05),参与蛋白结合、GTP酶活性、锌离子跨膜转运蛋白活性等7个分子功能(p<0. 05),涉及金属离子运输、RNA聚合酶II启动子的转录阳性调控、基因表达调节、钙离子跨膜运输、胚胎发育等18个生物过程(p<0. 05);预测靶基因集合显著富集于癌症通路与催乳素信号通路中(p<0. 05)。得出结论:hsa-miR-192-3p预测的靶基因集合富集于多个生物过程,与肿瘤密切相关,生物信息预测为今后的研究奠定了一定的理论基础,为后续实验验证提供了研究方向。

Hsa-miR-6841-3p对宫颈癌细胞系Caski增殖及侵袭转移的影响

目的:探讨miRNA-6841-3p对宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法:将miRNA-6841-3p模拟物、miRNA-6841-3p抑制物转染至宫颈癌细胞系Caski。实时荧光定量PCR检测宫颈癌细胞系Caski转染后miRNA-6841-3p mRNA以及其预测靶基因TFF3的转录表达。CCK-8法检测细胞增殖能力。Transwell小室检测细胞体外侵袭转移能力。划痕实验检测细胞迁移能力。结果:实时荧光定量PCR显示,miRNA-6841-3p模拟物转染组与miRNA-6841-3p模拟物对照组相比,miRNA-6841-3p mRNA表达明显上调(P<0.01),miRNA-6841-3p抑制物转染组miRNA-6841-3p mRNA转录表达明显受抑制,差异有统计学意义(P<0.01)。其预测靶基因TFF3 mRNA转录表达在miRNA-6841-3p模拟物转染组明显低于抑制物转染组(P<0.01)。与miRNA-6841-3p抑制物转染组比较,转染miRNA-6841-3p模拟物后,宫颈癌细胞系Caski细胞活性、迁移侵袭能力明显减弱(P<0.05)。结论:上调miRNA-6841-3p表达可明显抑制宫颈癌细胞系Caski增殖,抑制其迁移、侵袭能力,其作用机制可能通过抑制预测靶基因TFF3表达实现。