中药单体川楝素介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制研究

目的 探究中药单体川楝素介导的hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制。方法 选取南通第三人民医院乳腺外科于2020年4月—2022年4月收治的乳腺癌患者40例为研究对象,患者均在医院进行手术,取患者乳腺癌及癌旁组织作为实验材料,采用定量荧光聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)对其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平进行测定;取乳腺癌细胞株T47D细胞,加入不同浓度的川楝素,比较不同浓度川楝素对细胞增殖的抑制率;对所选乳腺癌细胞株系进行预处理,A组不进行特殊处理,B组中加入0.5μmol/L的川楝素,C组对乳腺癌细胞进行转染,敲除hsa-miR-671-5p,并向其中加入0.5μmol/L的川楝素,比较其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平,上述实验重复3次。结果 与正常癌旁组织相比较,乳腺癌组织中提取的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA在乳腺癌组织中均低表达,具有正相关性(r=0.965,P<0.05)。随着川楝素浓度的升高,乳腺癌细胞增殖的抑制率逐渐升高,且与0μmol/L浓度组比较均具有统计学意义(P<0.05)。对数据进行处理,得出乳腺癌细胞在24 h及48 h的半数抑制浓度分别为0.78μmol/L、0.49μmol/L。与A、C组相比较,B组的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与A、C组相比较,B组24 h及48 h侵袭细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间侵袭细胞数量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 川楝素通过介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控hsa-circ-0025583及SYNGR2水平,进而影响乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力,抑制乳腺癌细胞的生长。

血清微RNA-183-5p和微RNA-144-3p水平与脑出血病人脑出血量及认知功能的相关性

目的检测脑出血病人血清中微RNA(miRNA)-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,分析两者与脑出血量及认知功能的相关性。方法回顾性分析2020年8月至2021年8月荆州市第一人民医院收治的符合纳入、排除标准的89例脑出血病人的临床资料(观察组),另收集体检健康者89例为对照组。根据头颅影像学检查结果,将观察组分为少量出血组(<15 mL)31例,中量出血组(15~30 mL)36例和大量出血组(>30 mL)22例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p表达水平,Pearson相关分析脑出血量与血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p表达水平的相关性,根据是否出现认知功能障碍,将观察组病人分为预后良好组57例和预后不良组32例;受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析血清miRNA-183-5p和miRNA-144-3p水平对脑出血病人预后的评估价值。结果观察组血清miRNA-183-5p表达水平0.67±0.16低于对照组1.01±0.24,血清miRNA-144-3p的表达水平3.53±0.73高于对照组1.05±0.21(P<0.05)。大、中、少出血组血清miRNA-183-5p水平为0.49±0.11、0.69±0.11、0.78±0.21,依次显著降低(P<0.05):大量出血组血清miRNA-144-3p水平3.86±0.75与中量出血组水平3.58±0.68显著高于少量出血组水平3.17±0.65(P<0.05)。脑出血量与血清miRNA-183-5p表达呈负相关(r=−0.51,P<0.05)、与miRNA-144-3p表达呈正相关(r=0.54,P<0.05)。预后不良组血清miRNA-183-5p水平0.50±0.12低于预后良好组0.77±0.18,血清miRNA-144-3p水平3.75±0.62高于预后良好组3.41±0.34(P<0.05)。血清miRNA-183-5p、miRNA-144-3p单独及联合评估病人预后的AUC分别是0.94、0.79和0.96,二者联合检测的AUC、灵敏度高于各自单独检测。结论脑出血病人血清miRNA-183-5p水平降低,miRNA-144-3p水平升高,与脑出血量相关性较强,二者联合可评估病人认知功能障碍的发生。

miR-122-5p和miR-183-5p在脑出血患者中的表达水平及其与神经损伤的相关性

目的 分析脑出血患者神经损伤的影响因素和微小RNA-122-5p(miR-122-5p)、微小RNA-183-5p(miR-183-5p)血清水平对患者神经损伤的诊断价值,探讨二者水平与患者神经损伤的关系。方法 选取2021年6月至2023年7月于绵阳市中心医院住院治疗的146例脑出血患者作为研究对象,依据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)将患者分为轻度损伤组(85例)和中重度损伤组(61例)。实时荧光定量PCR检测两组患者血清miR-122-5p、miR-183-5p水平;比较两组患者的一般临床资料和血清水平;分析患者血清miR-122-5p、miR-183-5p水平与神经损伤之间的相关性;多因素Logistic回归分析脑出血患者神经损伤程度的影响因素,并分析血清miR-122-5p、miR-183-5p水平对患者神经损伤程度的诊断价值。结果 中重度损伤组患者NIHSS评分和血清miR-122-5p水平均高于轻度损伤组,血清miR-183-5p水平则低于轻度损伤组。miR-122-5p与miR-183-5p水平之间、miR-183-5p水平与NIHSS评分之间均呈负相关;miR-122-5p水平与NIHSS评分呈正相关。多因素Logistic回归分析表明,血肿体积、NIHSS评分、血清miR-122-5p水平为脑出血患者中重度神经损伤的危险因素,miR-183-5p血清水平为其保护因素。ROC曲线分析表明,miR-122-5p和miR-183-5p血清水平可作为脑出血患者中重度神经损伤程度的诊断指标,联合诊断的ROC曲线下面积(AUC)和Youden指数更高。结论 脑出血患者的血清miR-122-5p、miR-183-5p水平与神经损伤密切相关,二者联合检测对脑出血患者神经损伤具有较高的临床诊断价值。

血清miR-183-5p和miR-339-3p水平与急性胰腺炎患者严重程度及预后的关系

目的探讨血清微小RNA-183-5p(miR-183-5p)和微小RNA-339-3p(miR-339-3p)水平与急性胰腺炎(AP)患者严重程度及预后的关系。方法收集2021年7月至2023年7月该院收治的175例AP患者作为AP组,根据急性生理学与慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分将AP患者分为轻症组108例和重症组67例,根据预后情况,分为预后良好组114例和预后不良组61例,另选取同期于该院体检的体检健康者160例作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-183-5p、miR-339-3p水平,酶联免疫吸附试验测定肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)水平,Pearson相关分析AP患者血清miR-183-5p、miR-339-3p水平与TNF-α、CRP及APACHEⅡ评分的相关性,多因素Logistic回归分析AP患者预后不良的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-183-5p、miR-339-3p水平对预后不良发生的预测价值。结果与对照组比较,AP组miR-183-5p水平升高,miR-339-3p水平降低,差异有统计学意义(t=17.497、19.113,均P<0.05)。与轻症组比较,重症组血清miR-183-5p、TNF-α、CRP、APACHEⅡ评分升高,miR-339-3p水平降低(t=10.582、5.972、11.991、13.864、2.224,均P<0.05)。AP患者血清miR-183-5p水平与TNF-α,CRP,APACHEⅡ评分呈正相关(r=0.623、0.570、0.679,均P<0.05);miR-339-3p水平与TNF-α、CRP、APACHEⅡ评分呈负相关(r=-0.655、-0.600、-0.756,均P<0.05)。预后不良组血清miR-183-5p水平高于预后良好组,miR-339-3p水平低于预后良好组,差异有统计学意义(t=5.324、5.436,均P<0.05)。TNF-α、CRP、APACHEⅡ评分、miR-183-5p是AP患者发生预后不良的独立危险因素,miR-339-3p是预后不良的保护因素(均P<0.05)。miR-183-5p、miR-339-3p水平和二者联合预测AP患者预后不良的曲线下面积分别为0.760、0.731、0.836,二者联合预测价值高于单独预测(Z=2.952、2.892,均P<0.05)。结论AP患者血清中miR-183-5p水平升高,miR-339-3p水平降低,二者与患者病情程度和预后密切相关,可能作为AP病情和预后评估的标志物。

结肠癌组织中miR-183-5p和THEM4的表达水平及临床意义

目的:研究结肠癌组织中微小RNA-183-5p(miR-183-5p)和硫酯酶超家族成员4(THEM4)的表达水平及其临床意义。方法:收集河北中石油中心医院96例结肠癌患者为研究对象,在进行根治切除术过程中收集患者结肠癌组织及癌旁正常组织。检测结肠癌组织及癌旁正常组织中miR-183-5p和THEM4 m RNA的相对表达水平。分析两者的相关性及其与预后的关系。Cox回归分析影响结肠癌患者预后的危险因素。结果:与癌旁正常组织相比,结肠癌组织中miR-183-5p表达水平升高(P<0.05),THEM4 m RNA表达水平降低(P<0.05)。结肠癌组织中miR-183-5p与THEM4 m RNA表达呈负相关(r=-0.529,P<0.05)。miR-183-5p高表达组生存率低于低表达组(P<0.05),THEM4高表达组生存率显著高于低表达组(P<0.05)。TNM分期(Ⅲ~Ⅳ)、miR-183-5p高表达、THEM4低表达是结肠癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)。结论:结肠癌织中miR-183-5p表达水平升高,THEM4表达水平降低,两者均与患者临床病理特征及预后密切相关。

hsa-miR-204-5p对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响

目的:探究hsa-miR-204-5p对人血管内皮细胞活力、迁移、周期及凋亡等生物学行为的影响。方法:使用人脐静脉内皮细胞株EA.hy926构建过表达hsa-miR-204-5p(hsa-miR-204-5p mimics)模型。通过细胞划痕、Transwell、CCK-8、细胞周期和凋亡率等指标评估hsa-miR-204-5p对内皮细胞功能状态的影响。接着,使用RNA测序和RT-qPCR寻找并验证hsa-miR-204-5p的下游靶基因,将RNA测序中log2FC≤−0.5、P<0.05的基因和miRWalk数据库预测的hsa-miR-204-5p的下游靶基因取交集,并进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果:过表达hsa-miR-204-5p可以抑制EA.hy926细胞的活力和迁移能力,降低EA.hy926细胞的凋亡率,并使聚集在S期的细胞减少。富集分析结果发现hsa-miR-204-5p下游靶基因富集在MAPK信号通路,富集在此通路的基因为MAPT、PPP3R1、PRKACB、PTPRR、MAP2K4、CACNA2D2和RPS6KA6。RT-qPCR结果显示,过表达hsa-miR-204-5p后,MAPT和MAP2K4扩增结果较好且表达为下调。其中,MAPT下降趋势最明显。结论:hsamiR-204-5p可能通过抑制MAPT/MAPK信号通路而影响内皮细胞的活力、迁移和凋亡等生物学行为。

miR-183-5p通过线粒体凋亡途径影响肺炎支原体诱导的RAW246.7细胞凋亡的机制研究

目的:探讨miR-183-5p对肺炎支原体(MP)诱导的RAW246.7细胞凋亡的影响及机制。方法:将巨噬细胞RAW246.7随机分为Control组、Model组、Anti-miR-NC+model组和Anti-miR-183-5p+model组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-183-5p表达水平;CCK-8检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测TNF-α、IL-6水平;Western blot法检测蛋白表达。结果:与Control组比较,Model组RAW246.7细胞中miR-183-5p表达水平升高,细胞活性降低,细胞凋亡率升高,炎症因子TNF-α和IL-6的水平升高,Bax、caspase-9、caspase-3表达水平升高,Bcl-2、p-PI3K、p-Akt表达水平降低(P<0.05)。与AntimiR-NC+model组比较,Anti-miR-183-5p+model组RAW246.7细胞中miR-183-5p表达水平降低,细胞活性升高,细胞凋亡率降低,炎症因子TNF-α和IL-6的水平降低,Bax、caspase-9、caspase-3表达水平降低,Bcl-2、p-PI3K、p-Akt表达水平升高(P<0.05)。结论:抑制miR-183-5p可抑制MP诱导的RAW246.7细胞凋亡和炎症因子表达,其可能与PI3K/Akt信号通路有关。

miR-183-5p靶向FOXN2促进前列腺癌细胞PC3增殖及侵袭的机制研究

目的:探究miR-183-5p对PC3细胞生物学功能的影响和作用机制。方法:从GEO数据库中筛选在前列腺癌中显著高表达的miR-183-5p,在PC3细胞中过表达miR-183-5p作为miR-183-5p mimics组;将转染空白质粒的PC3细胞作为miR-NC组,通过细胞克隆、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)实验、噻唑蓝(MTT)、细胞划痕、Transwell小室迁移及侵袭实验检测miR-183-5p mimics组与miR-NC组前列腺癌细胞PC3生物学功能的影响。在PC3细胞中稳定过表达miR-183-5p进行皮下成瘤实验观察miR-183-5p在体内对细胞增殖能力的影响。通过预测软件筛选出叉头框蛋白(FOXN2)作为miR-183-5p的下游靶基因并检测miR-183-5p对其蛋白表达的影响。在PC3细胞中转染FOXN2过表达质粒,共转染miR-183-5p后进行回复实验验证miR-183-5p通过靶向FOXN2促进PC3细胞增殖及侵袭。结果:与miR-NC组比较,miR-183-5p mimics组细胞增殖、迁移及侵袭能力均更高(P<0.05),且其在体内亦可促进瘤体生长(P<0.05)。miR-183-5p组与靶基因FOXN2表达量高于miR-NC组(P<0.05),转染FOXN2质粒后可逆转miR-183-5p mimics对细胞增殖及侵袭的促进作用。结论:miR-183-5p可通过靶向FOXN2促进前列腺癌细胞PC3的增殖和侵袭能力。

hsa-miR-340-5p靶基因预测及生物信息学分析

目的 通过对hsa-miR-340-5p的靶基因进行预测和生物信息学分析,探讨其靶基因所发挥的生物学功能及参与的信号传导通路。方法 应用RNAcentral和miRBase数据库在线对比分析miR-340-5p序列在不同物种之间的保守性。运用在线数据库DIANA-microT、Target Scan、miRWalk和miRDB分别预测hsa-miR-340-5p的靶基因,随后使用Venny2.1绘制韦恩图得到交集靶基因的集合,并对其交集靶基因的集合进行基因本体论(GO)功能注释分析、京都基因与基因组百科全书信号通路(KEGG Pathway)富集分析、蛋白互作(PPI)网络构建及关键(hub)基因筛选。结果 通过对比序列分析发现,miR-340-5p的成熟碱基序列在8个不同的物种中高度保守。采用4个miRNA靶基因在线数据库预测后,发现与hsa-miR-340-5p存在结合位点的交集靶基因集合共有92个,占其预测靶基因总和的1.9%。GO功能注释分析发现,hsa-miR-340-5p交集靶基因集合主要富集在核质、黏着斑、细胞间连接等细胞组分,同时,还参与了RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录和蛋白质结合等多种生物学过程和分子功能。KEGG Pathway富集分析发现,hsa-miR-340-5p所结合的交集靶基因集合主要富集在癌症中的蛋白多糖、癌症通路、人类嗜T细胞病毒Ⅰ型(HTLV-I)感染等7个信号通路中。基于hsa-miR-340-5p交集靶基因集合的PPI网络构建,筛选出了度(degree)值前10位的hub基因,分别是:母体抗生物皮肤生长因子同源物(SMAD)2、无翅型MMTV整合位点家族成员(WNT)3、激活素A的1C型受体(ACVR1C)、F-框蛋白(FBXO)30、重组人缺陷于清选蛋白neddylation蛋白1域含1(DCUN1D1)、PH结构域相互作用蛋白(PHIP)、CUB和Sushi多结构域(CSMD)3、分拣连接蛋白(SNX)9、人免疫缺陷病毒Ⅰ增强子结合蛋白(HIVEP)2、RWD结构域蛋白(RWDD)2A。结论 hsa-miR-340-5p调控的靶基因参与了癌症、炎症等疾病的多种生物学过程。

非酒精性脂肪性肝病患者血清miR-183-5p和miR-96-5p水平变化及其临床意义探讨

目的 探讨非酒精性脂肪肝病(NAFLD)患者血清miR-183-5p和miR-96-5p水平变化及其临床意义。方法 2019年11月~2022年1月我院诊治的NAFLD患者62例和同期性别和年龄相匹配且无过量饮酒史的健康体检者80例,采用实时荧光定量RT-PCR法检测血清miR-183-5p和miR-96-5p水平,应用多因素Logistic回归分析NAFLD发生的危险因素,应用受试者工作特征曲线(ROC)下面积(AUC)评估指标诊断严重脂肪性肝病的效能。结果 NAFLD患者BMI、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、空腹血糖(FPG)和血脂水平显著高于健康人(P<0.05),血清miR-183-5p和miR-96-5p水平分别为(0.8±0.2)和(1.2±0.3),显著低于健康人【分别为(1.4±0.4)和(2.3±0.6),P<0.05】;17例重度NAFLD患者血清miR-183-5p和miR-96-5p水平分别为(0.4±0.1)和(0.8±0.2),显著低于21例中度患者【分别为(0.8±0.2)和(1.2±0.3),P<0.05】或24例轻度患者【分别为(1.1±0.3)和(1.5±0.4),P<0.05】;经Logistic回归分析结果显示,BMI、HOMA-IR、FPG、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇以及血清miR-183-5p和miR-96-5p低水平是NAFLD发生的独立危险因素(P<0.05);应用血清miR-183-5p和miR-96-5p联合检测评估重度NAFLD发生的AUC为0.821,显著高于两项指标单独评估的0.713或0.718(P<0.05),其准确度、灵敏度和特异度分别达到77.4%、76.5%和77.8%。结论NAFLD患者血清miR-183-5p和miR-96-5p呈低水平,其水平越低,可能预示着肝内脂肪变程度越重,即它们的血清水平可在一定程度上反映疾病的严重程度,可作为诊断和评估病情的分子标志物,值得进一步研究。

SOCS3受miR-183-5p调控影响乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

目的探究细胞因子信号传送阻抑物3(SOCS3)调节乳腺癌进展的分子机制。方法生物信息学方法分析TCGA数据库中乳腺癌患者的数据;体外培养乳腺癌细胞系,定量反转录聚合酶链式反应检测SOCS3和miR-183-5p的mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测SOCS3的蛋白表达水平;对MDA-MB-231、T47D细胞进行过表达或敲低SOCS3和miR-183-5p处理,双萤光素酶报告实验检测SOCS3和miR-183-5p的靶向结合关系;CCK-8和克隆形成实验检测MDA-MB-231和T47D细胞的增殖能力;Transwell实验检测MDA-MB-231和T47D细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞术检测MDA-MB-231和T47D细胞的凋亡率。结果SOCS3在乳腺癌组织和细胞系中低表达,而miR-183-5p在乳腺癌组织和细胞系中高表达。细胞功能实验证明了SOCS3抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭以及促进细胞凋亡。starBase和Targetscan数据库生物信息分析发现miR-183-5p与SOCS3有结合位点,双萤光素酶报告实验证明miR-183-5p与SOCS3具有靶向结合关系,且miR-183-5p靶向下调SOCS3的表达。细胞功能检测实验表明沉默miR-183-5p的同时沉默SOCS3,相比于单独沉默miR-183-5p,细胞的增殖、迁移和侵袭能力升高,凋亡率降低;而过表达miR-183-5p并沉默SOCS3的细胞相比于同时沉默miR-183-5p和SOCS3的增殖、迁移和侵袭能力进一步升高,凋亡率降低。结论SOCS3能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,促进其凋亡,并受miR-183-5p靶向调控。

基于mTOR信号探究miR-183-5p对肝癌细胞血管生成及VEGF表达的影响

目的肝癌是一种高发病率和高死亡率的常见肿瘤。miR-183-5p在多种肿瘤中被证明可促进血管形成。然而,miR-183-5p在肝癌血管形成中的作用机制仍有待进一步探索。因此本文将探究miR-183-5p影响肝癌血管形成的分子调控机制。方法生信分析miR-183-5p在肝癌组织中的表达水平。qRT-PCR检测miR-183-5p在肝癌细胞系中的表达。细胞功能实验探究miR-183-5p异常表达对肝癌细胞活力、增殖、迁移、侵袭和HUVECs细胞血管形成的影响。Western blot检测VEGFA、mTOR的表达。ELISA检测肝癌细胞分泌的VEGFA表达。mTOR通路激活剂MHY1485处理进一步探究miR-183-5p介导mTOR信号通路对肝癌细胞血管形成的影响。结果本研究发现miR-183-5p在肝癌组织和细胞中高表达,沉默miR-183-5p可明显抑制进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭以及HUVECs细胞血管形成。同时,沉默miR-183-5p可以抑制mTOR信号通路的活性。mTOR通路激活剂MHY1485处理可以逆转沉默miR-29c-3p对HUVECs血管形成的抑制作用。结论本研究证实了miR-183-5p通过激活mTOR信号通路促进了肝癌细胞血管形成的分子机制,本研究进一步完善了我们对肝癌细胞血管形成的认识,以及为开发新型肝癌治疗策略提供了新思路。

hsa-miR-423-5p激活IL1R1基因在冠心病中的作用机制

目的:通过人群表达水平及转录组测序分析hsa-miR-423-5p靶向目标基因在冠心病(CHD)中的作用机制。方法:选取广西医科大学第一附属医院收治的151例CHD患者(CHD组),同期选择健康体检者作为健康对照组。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测外周血白细胞中hsa-miR-423-5p表达水平,通过Spearman相关分析对hsa-miR-423-5p与各临床指标的相关关系进行分析。在EA.hy 926细胞中过表达hsa-miR-423-5p后进行hsa-miR-423-5p的亚细胞定位实验及转录组测序。针对测序结果预测hsa-miR-423-5p的潜在靶基因,对其进行RT-qPCR实验验证并分析目标基因与hsa-miR-423-5p表达水平及各临床指标之间的相关关系。结果:CHD组外周血白细胞中hsa-miR-423-5p的表达水平显著低于健康对照组(P<0.05)。hsamiR-423-5p的表达量与总胆固醇(TC)呈负相关关系,与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)呈正相关关系(P<0.05)。在EA.hy926细胞中过表达hsa-miR-423-5p,亚细胞定位实验显示hsa-miR-423-5p主要存在于细胞核内。转录组测序结果经过分析验证后,发现过表达hsa-miR-423-5p后可上调IL1R1表达。CHD组中IL1R1的表达水平低于健康对照组(P<0.01),IL1R1表达水平与hsa-miR-423-5p表达水平、HDL-C均呈正相关关系(P<0.01)。结论:hsa-miR-423-5p及IL1R1在CHD患者中呈低表达且与TC和HDL-C相关;hsa-miR-423-5p在内皮细胞上调IL1R1的表达进而影响血脂水平,提示hsa-miR-423-5p可能通过调控IL1R1基因影响脂质代谢及内皮细胞功能从而参与CHD的进展。

miR-183-5p和NDUFA4L2在肾透明细胞癌中的表达及相关性

目的检测miR-183-5p和NDUFA4L2在肾透明细胞癌中的表达特征,分析二者相关性及其与术后生存时间的关系。方法收集确诊为肾透明细胞癌并行手术治疗的患者共57例,术后留取肿瘤组织和癌旁正常肾组织。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中miR-183-5p的表达,应用免疫组织化学法检测NDUFA4L2的表达。应用qRT-PCR检测人肾透明细胞癌786-0细胞株和人肾皮质近曲小管上皮HK-2细胞株中miR-183-5p和NDUFA4L2 mRNA的表达。结果肾透明细胞癌中miR-183-5p表达量明显低于正常肾组织,NDUFA4L2阳性率明显高于正常肾组织(均P<0.05)。miR-183-5p表达量和NDUFA4L2阳性率在不同WHO/ISUP分级、有无肾窦累犯和不同肿瘤最大径间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-183-5p表达量和NDUFA4L2评分均与术后生存时间相关,miR-183-5p表达量和NDUFA4L2评分呈负相关。786-0细胞株中,miR-183-5p表达量明显低于HK-2细胞株,NDUFA4L2 mRNA表达量明显高于HK-2细胞株(均P<0.05)。结论肾透明细胞癌中miR-183-5p和NDUFA4L2异常表达且二者呈负相关,对病变的形成和进展具有促进作用,检测二者的表达可能对预后有预测价值。

hsa-miR-375和hsa-miR-183-5p在子宫内膜癌中的表达及意义

为探究hsa-miR-375和hsa-miR-183-5p在子宫内膜癌中的表达及意义,本院收集了子宫内膜癌患者手术治疗后切下的组织样本,应用实时荧光定量PCR法检测hsa-miR-375和hsa-miR-183-5p的表达;构建hsa-miR-375和hsa-miR-183-5p过表达质粒,转染细胞后,应用细胞锚定非依赖生长分析法检测细胞的增殖能力,Annexin V-FITC/PI流式检测细胞的凋亡比例,实时荧光定量PCR法检测凋亡相关基因m RNA的表达。结果显示,人子宫内膜癌组织和细胞系HEC-1B中,hsa-miR-375和hsa-miR-183-5p表达显著降低(p<0.05);hsa-miR-375和hsa-miR-183-5p过表达质粒转染HEC-1B后,细胞增殖能力明显降低,细胞凋亡百分比提高,TP53、Bax的mRNA表达水平显著提高,Bcl-2的mRNA表达水平显著降低(p<0.05)。研究结果表明,hsa-miR-375和hsa-miR-183-5p可通过调控凋亡相关基因的表达促进HEC-1B细胞的凋亡,抑制HEC-1B细胞的增殖,表现出抗肿瘤活性,在子宫内膜癌中具有潜在的应用价值。

胃癌耐药相关hsa-miR-194-5p的靶基因预测及生物信息学分析

目的:研究胃癌耐药相关hsa-miR-194-5p的靶基因,并分析其参与的生物学过程和信号转导通路,为胃癌耐药机制的表观遗传学研究提供前期基础.方法:通过NCBI数据库检索hsa-miR-194-5p的基本信息;使用预测数据库预测hsa-miR-194-5p的靶基因;使用DAVID数据库对靶基因集合进行功能富集分析(GO)和信号转导通路富集分析(KEGG).结果:成熟的miR-194-5p序列多个物种之间具有高度保守性.预测靶基因共325个,参与的生物学过程主要有Golgi组织和细胞对DNA损伤刺激的反应(P<0.01),分子功能包括泛素蛋白连接酶结合和泛素介导的蛋白水解(P<0.01),细胞组分富集在细胞核和细胞表面,调控包括TGF-β和WNT等多条信号转导通路(P<0.01).结论:miR-194-5p的靶基因SMURF1、RAC1、MAPK1与胃癌细胞的增殖密切相关.

miR-183-5p/mTOR信号轴介导有氧糖酵解促进胃癌细胞增殖

目的探讨miR-183-5p/mTOR信号轴是否通过影响胃癌细胞有氧糖酵解过程而促进胃癌细胞增殖,为胃癌的治疗提供新靶点。方法使用转染试剂盒对MGC-803胃癌细胞进行inhibitor NC、miR-183-5p inhibitor、mimics NC、miR-183-5p mimics转染;葡萄糖、乳酸、腺嘌呤核苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)检测试剂盒检测低葡萄糖、乳酸、ATP水平变化;通过蛋白质印迹和聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测雷帕霉素机械靶蛋白(mechanistic target of rapamycin,mTOR)mRNA、葡萄糖转运蛋白(glucose transporter 1,GLUT1)和乳酸脱氢酶(recombinant lactate dehydrogenase A,LDHA)蛋白;二苯基四氮唑溴盐法(multiple table tournament,MTT)检测MGC-803胃癌细胞活性。结果与inhibitor NC组相比,miR-183-5p inhibitor在胃癌细胞中低表达(P<0.001),与mimics NC组相比,miR-183-5p inhibitor组在胃癌细胞中高表达miR-183-5p(P<0.0001);过表达miR-183-5p可促进MGC-803胃癌细胞对葡萄糖的消耗(P<0.01),生成更多的乳酸和ATP(P<0.01)、上调LDHA和GLUT1蛋白(P<0.01)、促进mTOR mRNA表达、促进胃癌细胞增殖。结论miR-183-5p/mTOR信号轴通过调控有氧糖酵解相关蛋白表达促进MGC-803胃癌细胞增殖。

MS相关的hsa-miR-17-5p靶基因预测和关键基因筛选

目的对人类miR-17-5p(hsa-miR-17-5p)靶基因预测和富集分析,并结合基因的差异表达寻找多发性硬化症的生物学标志物。方法利用生物信息学方法,预测hsa-miR-17-5p靶基因,对预测结果进行基因本体数据库(Gene Ontology,GO)、京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genome,KEGG)富集分析,并构建蛋白质互作网络图(Protein-Protein Interaction Networks,PPI)。再结合多发性硬化症患者和健康对照组的差异表达基因,进一步筛选出hsa-miR-17-5p对多发性硬化症影响的关键基因。最后,利用RNA22 v2验证关键基因是否存在结合位点。结果不同网站预测后,取交集获取376个公共靶基因,这些靶基因有复杂的相互作用,主要存在于胞浆与核质,参与多种转录调控和蛋白质磷酸化等生物学过程,同时也与癌症、病毒感染和免疫系统等信号通路相关;靶基因和多发性硬化症患者的相对下调基因有三个共同基因PDLIM5、KCNB1、BTBD7。进一步验证上述关键基因结合位点,发现仅有PDLIM5存在P值小于0.05的结合位点。结论hsa-miR-17-5p靶基因参与多种生物学过程,而且PDLIM5、KCNB1、BTBD7基因很可能是hsa-miR-17-5p对多发性硬化症产生影响的重要桥梁,其中PDLIM5尤为重要。

MicroRNA-183-5p在动脉粥样硬化患者中的表达及其临床意义

目的分析microRNA-183-5p(miR-183-5p)在动脉粥样硬化患者中的表达及其临床意义。方法选取2021年1月—2022年8月四川省人民医院收治的经血管造影确诊的103例动脉粥样硬化患者为研究组,选取同期该院年龄相当的90例健康体检者为健康组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组患者血清miR-183-5p的表达,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析miR-183-5p在动脉粥样硬化中的诊断价值。结果研究组血清miR-183-5p mRNA相对表达量高于健康组(P<0.05);研究组中高Gensini积分组患者血清miR-183-5p mRNA相对表达量高于低Gensini积分组(P<0.05);Pearson相关性分析结果显示,miR-183-5p与C反应蛋白、颈动脉内中膜厚度及Gensini积分呈正相关(r=0.664、0.571和0.712,均P<0.05);ROC曲线分析结果显示,miR-183-5p诊断动脉粥样硬化的截断值为2.08,敏感性和特异性分别为87.8%(95%CI:0.832,0.924)和91.6%(95%CI:0.877,0.955)。结论动脉粥样硬化患者血清miR-183-5p高表达,能够辅助区分冠状动脉狭窄程度,可作为动脉粥样硬化临床诊断的重要生物标志物。

RIF患者血浆外泌体源miRNA-183-5p通过靶向FOXO1影响蜕膜化

目的 探讨反复种植失败(RIF)患者血浆外泌体源性miR-183-5p通过靶向FOXO1影响子宫内膜基质细胞蜕膜化。方法 选取2021年8月1日至2021年12月31日在空军军医大学唐都医院生殖中心就诊的不孕患者,其中接受IVF治疗的20名RIF患者作为RIF组,20名同期无特殊病史的不孕患者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测两组不孕患者的血浆外泌体miR-183-5p的表达。从血浆中提取外泌体并与人子宫内膜间质细胞系(HESC)共培养48h后进行蜕膜化诱导,检测人胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)和催乳素(PRL)的表达。将miR-183-5p的agomir和antagomir转染HESC细胞并诱导蜕膜化后检测蜕膜化水平。通过qRT-PCR和免疫蛋白印迹(WB)实验检测miR-183-5p对于FOXO1 mRNA和蛋白表达水平的影响。结果 与对照组比较,RIF患者血浆外泌体能够抑制蜕膜化的子宫内膜基质细胞IGFBP-1和PRL的表达(t值分别为5.324、9.056,P<0.05)。与对照组比较,RIF患者血浆外泌体和子宫内膜组织高表达miR-183-5p((t值为-2.486、-4.821,P<0.05)。miR-183-5p能够抑制蜕膜化HESC细胞FOXO1的mRNA(agomir-NC vs agomir,t=3.120,P<0.05)和蛋白质的表达(对照组vs agomir,t=2.793,P<0.05)。结论 RIF患者血浆外泌体源性miR-183-5p能够抑制FOXO1表达,从而影响子宫内膜基质细胞蜕膜化。