hsa-miR-197在子宫肌瘤中的表达及生物信息学特征分析

应用实时定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测子宫肌瘤组织中的hsa-miR-197表达水平,并与配对正常子宫肌细胞对比。通过miRbase、UCSC、NCBI等在线数据库获取并分析hsa-miR-197序列保守性及其基因组特征。选择miRanda、MirTarget2及TargetScan三个在线数据库预测hsa-miR-197的靶基因并取交集以便后续分析。通过基因本体(GO)功能注释、GO富集分析和信号转导通路富集分析初步阐明,hsamiR-197靶基因参与调控的细胞功能与信号通路。hsa-miR-197的功能较广泛,参与肿瘤发生的多种生物学过程,提示hsa-miR-197可能与子宫肌瘤的发病机制密切相关。

中药单体川楝素介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制研究

目的 探究中药单体川楝素介导的hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制。方法 选取南通第三人民医院乳腺外科于2020年4月—2022年4月收治的乳腺癌患者40例为研究对象,患者均在医院进行手术,取患者乳腺癌及癌旁组织作为实验材料,采用定量荧光聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)对其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平进行测定;取乳腺癌细胞株T47D细胞,加入不同浓度的川楝素,比较不同浓度川楝素对细胞增殖的抑制率;对所选乳腺癌细胞株系进行预处理,A组不进行特殊处理,B组中加入0.5μmol/L的川楝素,C组对乳腺癌细胞进行转染,敲除hsa-miR-671-5p,并向其中加入0.5μmol/L的川楝素,比较其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平,上述实验重复3次。结果 与正常癌旁组织相比较,乳腺癌组织中提取的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA在乳腺癌组织中均低表达,具有正相关性(r=0.965,P<0.05)。随着川楝素浓度的升高,乳腺癌细胞增殖的抑制率逐渐升高,且与0μmol/L浓度组比较均具有统计学意义(P<0.05)。对数据进行处理,得出乳腺癌细胞在24 h及48 h的半数抑制浓度分别为0.78μmol/L、0.49μmol/L。与A、C组相比较,B组的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与A、C组相比较,B组24 h及48 h侵袭细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间侵袭细胞数量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 川楝素通过介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控hsa-circ-0025583及SYNGR2水平,进而影响乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力,抑制乳腺癌细胞的生长。

重组CRM_(197)-4GnRH去势疫苗抗原分子的原核表达及免疫效果评价

通过大肠杆菌表达系统对CRM_(197)-4GnRH重组去势疫苗抗原进行表达,采用不同种类佐剂制备疫苗,研究其对大鼠的免疫去势作用,为获得1种免疫效果好、有效期长、生产成本低的促性腺激素释放激素(GnRH)免疫去势基因工程疫苗提供借鉴。采用白喉毒素无毒突变体(CRM_(197))与4拷贝GnRH串联,将CRM_(197)-4GnRH基因与表达载体连接,并通过优化试验确定大肠杆菌的最优表达条件,用SDS-PAGE和Western blot鉴定目标蛋白的表达情况。将融合蛋白与不同佐剂乳化,制备成9种测试疫苗后分别免疫大鼠,测定血清中GnRH抗体滴度和睾酮浓度。结果显示,重组大肠杆菌的最优表达条件为诱导时间表达5 h,培养基为LB液体培养基,IPTG诱导浓度为0.5 mmol/L;通过SDS-PAGE和Western blot试验,表明目标融合蛋白已成功表达;动物试验结果表明,重组疫苗水包油包水佐剂组、重组疫苗油包水佐剂组、GnRH+Th抗原(辅助型T细胞抗原)表位(G1抗原)油包水佐剂组测试疫苗免疫大鼠较其他组GnRH抗体滴度显著升高、睾酮浓度显著下降(P<0.05),表明这3种疫苗具有良好的免疫去势作用。研究结果为GnRH免疫去势疫苗的研制奠定了基础。

白喉毒素突变体CRM197在大肠杆菌中优化表达及人群血清抗体水平分析

目的 构建白喉毒素突变体CRM197的原核表达载体,在大肠杆菌中表达CRM197蛋白。分析健康人群血清中的CRM197抗体水平。方法 对CRM197基因进行大肠杆菌密码子优化并克隆至pET28a(+)中,经表达条件优化后采用镍柱亲和层析和离子交换层析对重组蛋白CRM197进行纯化,对纯化的CRM197进行Western blot鉴定。最后,经纯化后的CRM197蛋白与健康人群血清进行反应,检测人群血清中针对该蛋白的抗体水平。结果 CRM197蛋白进行了密码子及表达条件优化后,获得了可溶性表达蛋白。经镍柱亲和层析和离子交换层析后其纯度可达95%以上,Western Blot鉴定后能得到单一的特异性条带。经纯化的CRM197蛋白与不同年龄阶段健康人群血清均发生不同程度的抗原抗体反应。结论 利用本研究的策略,CRM197得到高效的可溶性表达,但人群血清中含有高水平的CRM197抗体,这些抗体的存在可能会影响到应用CRM197结合多糖作为抗原进行特异免疫效果的评价以及作为诊断抗原的应用。

Hsa-miR-650通过靶向RAC1抑制NF2阴性脑膜瘤的生长

目的本文旨在确定NF2表达阴性脑膜瘤中潜在的miRNA-mRNA轴,研究它们的靶向关系,并确定它们的生物学功能。方法从基因表达数据库(GEO)下载包含与NF2阴性脑膜瘤相关数据的GSE17792数据集。使用R软件中的limma包确定差异表达的mi RNA(De MiRNAs)。应用miRWalk 2.0数据库获取De MiRNAs的靶基因。利用相互作用基因检索工具(STRING)数据库构建蛋白质相互作用(PPI)网络,并通过Cytoscape软件确定核心基因。对筛选出的miRNA进一步验证其表达和生物学作用。结果在NF2阴性脑膜瘤肿瘤样本与蛛网膜组织对照组比较中发现了86个差异mi RNA,其中包括52个上调的mi RNAs和34个下调的miRNAs。在这些差异miRNA中鉴定出与274个靶基因相关的14个mi RNAs,并基于这些数据构建miRNA-靶基因网络。通过cyto Hubba分析显示,在PPI网络中有两个mi RNAs(hsa-miR-650和hsa-miR-623)位于前20个关键核心基因之中。进一步的定量逆转录PCR(q RT-PCR)实验证实,相对于正常脑组织,hsa-miR-650在NF2阴性脑膜瘤中的表达显著增高。下调hsa-miR-650抑制了NF2阴性脑膜瘤细胞的增殖并诱导细胞凋亡。最后,确定RAC1是hsa-miR-650的靶基因。结论Hsa-miR-650作为肿瘤促进剂,可能作为治疗NF2阴性脑膜瘤患者的治疗靶点。

血清lncRNA HOTAIR、miR-197-3p水平与精神分裂症患者精神症状及认知功能的相关性

目的探讨血清长链非编码RNA-HOX转录本反义基因间RNA(lncRNA HOTAIR)、微小RNA-197-3p(miR-197-3p)水平与精神分裂症(SCZ)患者精神症状及认知功能的相关性。方法选取2021年4月—2023年3月广州医科大学附属脑科医院精神科诊治SCZ患者118例为研究对象(SCZ组),并选取同期健康体检者110例作为健康对照组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清lncRNA HOTAIR、miR-197-3p水平,对参与者进行阳性与阴性症状量表(PANSS)评分和认知功能评价;Pearson、Spearman相关系数分析血清lncRNA HOTAIR与miR-197-3p水平及二者与精神症状、认知功能的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA HOTAIR、miR-197-3p水平对SCZ的评估价值。结果与健康对照组比较,SCZ组血清lncRNA HOTAIR表达水平升高,miR-197-3p水平降低(t/P=9.859/<0.001、19.191/<0.001)。生物信息学预测,lncRNA HOTAIR与miR-197-3p存在结合位点。Pearson相关性分析结果显示,SCZ患者血清中lncRNA HOTAIR表达与miR-197-3p表达呈负相关(r=-0.543,P<0.001)。与健康对照组比较,SCZ组阳性症状、阴性症状、一般病理症状及总分均显著升高(t/P=31.623/<0.001、28.219/<0.001、48.918/<0.001、39.574/<0.001),TMT、BACS、WMS-III-SS、BVMT、HVLT、CPT以及SCWT中单次测验、颜色测验评分显著降低(t/P=6.520/<0.001、7.666/<0.001、4.114/<0.001、8.191/<0.001、5.902/<0.001、4.985/<0.001、13.060/<0.001、8.938/<0.001)。SCZ患者lncRNA HOTAIR水平与阴性症状、总分呈正相关(r/P=0.498/<0.001、0.507/<0.001),与TMT、CPT呈负相关(r/P=-0.476/<0.001、-0.485/<0.001);miR-197-3p与阴性症状、总分呈负相关(r/P=-0.408/<0.001、-0.453/0.009),与TMT、CPT呈正相关(r/P=0.449/0.001、0.517/<0.001)。血清lncRNA HOTAIR、miR-197-3p及二者联合预测SCZ发生的AUC分别为0.819、0.885、0.927,二者联合预测AUC显著高于各自单独预测(Z/P=4.580/<0.001、2.953/0.003)。结论SCZ患者体内血清lncRNA HOTAIR上调,miR-197-3p下调,与精神症状及认知功能相关。

hsa-miR-197靶基因预测及生物信息学特征分析

目的通过对hsa-miR-197进行系统的生物信息学分析,预测其靶基因、相关功能及其可能参与的生物学过程。方法通过PubMed检索hsa-miR-197相关文献;通过miRBase、NCBI等在线数据库获取并分析hsa-miR-197序列保守性及其基因组特征。通过GO功能注释、GO富集分析和信号转导通路富集分析,选择miRanda、TargetScan及PicTar预测hsa-miR-197的靶基因的交集作为分析的基因集合。结果 (1)hsa-miR-197在人类同源的物种间具有高度保守性。(2)三种方法预测结果取交集获得hsa-miR-197可能的靶基因共有32个。(3)hsa-miR-197靶基因主要参与DNA修复、蛋白磷酸化、离子转运、蛋白修饰、DNA依赖的转录调控等生物学过程,涉及Wnt、氨基糖类代谢等信号转导通路。结论 hsa-miR-197的功能较广泛,与发育、代谢等密切相关。

不同病理类型及分期甲状腺癌组织中miR-197、miR-221和miR-222的表达及其临床意义

目的:观察不同病理类型及分期甲状腺癌组织中miR-197、miR-221和miR-222的表达,并分析其在甲状腺癌诊断中的意义。方法:回顾性分析2020年01月至2022年12月我院92例甲状腺癌患者临床资料,患者均进行甲状腺癌组织、癌旁组织病理检查,采用定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)测定miR-197、miR-221和miR-222表达水平,对比不同病理类型、分期等病理特征的甲状腺癌患者miR-197、miR-221和miR-222表达状况,并分析其在甲状腺癌诊断中的意义。结果:甲状腺癌组织中miR-197、miR-221、miR-222表达高于癌旁组织(t=14.696、14.004、15.351,P<0.05);淋巴结转移、未分化癌、Ⅲ-Ⅳ期的甲状腺癌患者miR-197、miR-221、miR-222表达分别高于未发生淋巴结转移、乳头状癌/髓样癌/滤泡癌、Ⅰ-Ⅱ期甲状腺癌患者(P<0.05)。经Logistic回归分析,结果显示,miR-197、miR-221、miR-222高表达是甲状腺癌患者发生淋巴结转移、发生未分化癌及是Ⅲ-Ⅳ期甲状腺癌的危险因素(OR>1,P<0.05)。结论:不同病理类型及分期甲状腺癌组织中miR-197、miR-221和miR-222的表达存在差异,三者将有助于判断甲状腺癌是否淋巴结转移、不同病理类型及临床分期。

hsa-miR-22-3p靶基因预测及功能分析

本研究旨在通过生物信息学分析,预测和验证hsa-miR-22-3p的靶基因,并探讨其在不同物种、组织和信号通路中的功能。方法 本研究利用了多种在线数据库和软件,如miRBase、ClustalOmega、Cytoscape3.6.1等,进行了对不同物种间的miR-22-3p保守性分析。预测hsa-miR-22-3p的靶基因,绘制Venn图,得到交集靶基因集合。对交集靶基因进行GO功能注释和KEGG Pathway富集分析,探索其在生物过程和信号通路中的作用。预测交集靶基因编码蛋白质之间的相互作用关系,构建蛋白蛋白互作网络图谱,筛选出核心基因。结果 miR-22-3p是一种在多种生物中高度保守的miRNA,与心肌细胞分化和心血管疾病密切相关。hsa-miR-22-3p的36个交集靶基因在肿瘤、淋巴和腹腔等组织中表达较高,参与了组蛋白修饰、染色质重构、低氧应答等276个生物学过程,在乳腺癌、雌激素、FoxO、破骨细胞分化、肿瘤、PI3KAkt等8个信号通路中显著富集。hsa-miR-22-3p的10个核心基因ESR1、SIRT1、PTEN、CREB1、SP1、HDAC4、MECP2、YWHAZ、MAPK14、SNAI1在多种疾病中发挥重要作用,如肿瘤、糖尿病、神经退行性疾病、炎症、衰老、心肌肥厚、心肌缺血再灌注、心房纤维化、动脉粥样硬化等。结论 本研究为hsa-miR-22-3p在肿瘤、心血管等多种疾病中的关键调控机制提供了新的理解,也为肿瘤、心血管等疾病的早期诊疗提供了新的思路。

hsa-miR-204-5p对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响

目的:探究hsa-miR-204-5p对人血管内皮细胞活力、迁移、周期及凋亡等生物学行为的影响。方法:使用人脐静脉内皮细胞株EA.hy926构建过表达hsa-miR-204-5p(hsa-miR-204-5p mimics)模型。通过细胞划痕、Transwell、CCK-8、细胞周期和凋亡率等指标评估hsa-miR-204-5p对内皮细胞功能状态的影响。接着,使用RNA测序和RT-qPCR寻找并验证hsa-miR-204-5p的下游靶基因,将RNA测序中log2FC≤−0.5、P<0.05的基因和miRWalk数据库预测的hsa-miR-204-5p的下游靶基因取交集,并进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果:过表达hsa-miR-204-5p可以抑制EA.hy926细胞的活力和迁移能力,降低EA.hy926细胞的凋亡率,并使聚集在S期的细胞减少。富集分析结果发现hsa-miR-204-5p下游靶基因富集在MAPK信号通路,富集在此通路的基因为MAPT、PPP3R1、PRKACB、PTPRR、MAP2K4、CACNA2D2和RPS6KA6。RT-qPCR结果显示,过表达hsa-miR-204-5p后,MAPT和MAP2K4扩增结果较好且表达为下调。其中,MAPT下降趋势最明显。结论:hsamiR-204-5p可能通过抑制MAPT/MAPK信号通路而影响内皮细胞的活力、迁移和凋亡等生物学行为。

肿瘤相关成纤维细胞上调hsa-miR-18b-5p靶向FBXL3促进前列腺癌的增殖及转移

目的探讨受肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)调控的hsa-miR-18b-5p在前列腺癌(PCa)中的表达水平及作用,并研究对其在PCa发生发展过程中的分子机制。方法利用生物信息学技术分析在PCa中高表达的miRNA,构建肿瘤相关成纤维细胞并与PCa细胞系共培养,验证CAFs对PCa细胞增殖和迁移的影响及对hsa-miR-18b-5p的调控作用;RT-qPCR验证20例患者癌组织及癌旁正常组织、前列腺正常上皮增生细胞及PCa各细胞系中hsa-miR-18b-5p的表达水平;通过脂质体法将阴性对照及hsamiR-18b-5p抑制物分别转染入PCa细胞C4-2、LNCAP中,分为NC inhibitor组和hsa-miR-18b-5p inhibitor组;采用细胞集落形成、CCK-8实验、划痕愈合、Transwell、IC_(50)实验、流式细胞术分别检测C4-2、LNCAP细胞增殖、迁移、侵袭、耐药能力、凋亡和周期;建立PCa裸鼠移植瘤模型,定期测量移植瘤的质量和体积,Kaplan-Meier生存曲线分析裸鼠生存情况;利用靶基因预测分析网站(Targetscan、Mirtarbase、miRDB、miRDIP)预测has-miR-18b-5p的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因分析验证hsa-miR-18b-5p与靶基因的靶向关系,RT-qPCR、Western blotting检测各组细胞靶基因的表达水平。结果生物信息学分析结果显示,在PCa中高表达的miRNA有17个,结合差异表达程度以及相关文献筛选出拟研究的基因:miR-148a、miR-17、miR-18b-5p、miR-770、miR-297-3p。CAFs与PCa细胞系共培养后hsa-miR-18b-5p的表达水平升高(P<0.01),且促进PCa细胞的增殖与迁移(P<0.01),敲除has-miR-18b-5p可抵消CAFs对PCa细胞增殖及迁移的影响,确定has-miR-18b-5p为研究基因。与正常前列腺上皮细胞或肿瘤旁组织相比,PCa细胞或肿瘤组织中hsa-miR-18b-5p的表达升高(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制C4-2、LNCAP细胞的增殖、迁移、侵袭以及耐药(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制裸鼠移植瘤质量和体积的增长,增加裸鼠的生存时间(P<0.05)。靶基因预测分析网站显示,FBXL3是hsa-miR-18b-5p的一个潜在作用靶点,双荧光素酶报告基因证实has-miR-18b-5p与FBXL3基因间存在结合位点,且敲除hsa-miR-18b-5p可增加C4-2、LNCAP细胞中FBXL3的蛋白表达(P<0.05)。结论CAFs上调前列腺癌细胞hsa-miR-18b-5p的表达水平,后者可能通过靶向调控FBXL3基因的表达促进PCa细胞的增殖和转移。

hsa-miR-181a-5p靶基因预测及生物信息学分析

目的对hsa-miR-181a-5p进行系统的生物信息学分析,预测hsa-miR-181a-5p的靶基因、基因功能及信号通路,并对其进行生物学功能注释。方法利用数据库对hsa-miR-181a-5p基因定位,分析其序列保守性和在人类组织器官中的表达情况;利用数据库进行靶基因预测分析;并将预测交集靶基因进行GO功能分析及KEGG通路富集分析和蛋白间相互作用(PPI)网络分析;最后利用A549细胞进行hsa-miR-181a-5p转染实验,进行转录组测序同步验证生物信息学预测结果。结果发现基因定位于人类基因组chr1、chr9染色体,成熟序列在物种间具有高度保守性。3个数据库交集靶基因有483个,包含PTEN、MAPK8、AKT3等基因,其分布在胞浆等细胞组分,执行蛋白质结合等生物功能,并参与信号转导等生物学过程。靶基因富集于MAPK、PI3K-Akt、胰岛素抵抗、癌症中的miRNA等信号通路,其编码的蛋白间形成复杂网络图。实验后转录组测序结果验证了生信分析的准确性,对预测及富集结果提供了有力支撑。结论hsa-miR-181a-5p在多种生物学过程发挥重要作用,尤其是在神经系统疾病、血液免疫系统疾病以及癌症的发生发展中其将成为相关疾病发生机制和防治研究的新靶点。

hsa-miR-340-5p靶基因预测及生物信息学分析

目的 通过对hsa-miR-340-5p的靶基因进行预测和生物信息学分析,探讨其靶基因所发挥的生物学功能及参与的信号传导通路。方法 应用RNAcentral和miRBase数据库在线对比分析miR-340-5p序列在不同物种之间的保守性。运用在线数据库DIANA-microT、Target Scan、miRWalk和miRDB分别预测hsa-miR-340-5p的靶基因,随后使用Venny2.1绘制韦恩图得到交集靶基因的集合,并对其交集靶基因的集合进行基因本体论(GO)功能注释分析、京都基因与基因组百科全书信号通路(KEGG Pathway)富集分析、蛋白互作(PPI)网络构建及关键(hub)基因筛选。结果 通过对比序列分析发现,miR-340-5p的成熟碱基序列在8个不同的物种中高度保守。采用4个miRNA靶基因在线数据库预测后,发现与hsa-miR-340-5p存在结合位点的交集靶基因集合共有92个,占其预测靶基因总和的1.9%。GO功能注释分析发现,hsa-miR-340-5p交集靶基因集合主要富集在核质、黏着斑、细胞间连接等细胞组分,同时,还参与了RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录和蛋白质结合等多种生物学过程和分子功能。KEGG Pathway富集分析发现,hsa-miR-340-5p所结合的交集靶基因集合主要富集在癌症中的蛋白多糖、癌症通路、人类嗜T细胞病毒Ⅰ型(HTLV-I)感染等7个信号通路中。基于hsa-miR-340-5p交集靶基因集合的PPI网络构建,筛选出了度(degree)值前10位的hub基因,分别是:母体抗生物皮肤生长因子同源物(SMAD)2、无翅型MMTV整合位点家族成员(WNT)3、激活素A的1C型受体(ACVR1C)、F-框蛋白(FBXO)30、重组人缺陷于清选蛋白neddylation蛋白1域含1(DCUN1D1)、PH结构域相互作用蛋白(PHIP)、CUB和Sushi多结构域(CSMD)3、分拣连接蛋白(SNX)9、人免疫缺陷病毒Ⅰ增强子结合蛋白(HIVEP)2、RWD结构域蛋白(RWDD)2A。结论 hsa-miR-340-5p调控的靶基因参与了癌症、炎症等疾病的多种生物学过程。

miR-197在人口腔鳞状细胞癌中的表达及对细胞增殖的作用机制

目的探讨miR-197在人口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及对细胞增殖的作用机制。方法选取2015年3月—2019年3月在海南医学院第一附属医院选择手术切除病灶的100例OSCC患者的肿瘤组织及癌旁组织(距离病灶边缘超过2.5 cm),qRT-PCR检测miR-197在OSCC组织及细胞系CAL27中的表达,Western blotting检测JAK2在OSCC组织及细胞系中的表达。构建沉默miR-197表达的病毒载体(miR-197-siRNA)及miR-197-siRNA阴性对照(miR-197-siRNA-NC),转染CAL27细胞,以未处理的CAL27细胞作为空白对照;倒置显微镜观察转染miRNA-197后的细胞形态;流式细胞术、EdU标记实验、Transwell小室实验分别检测miR-197对CAL27细胞凋亡率、DNA合成能力、侵袭能力的影响;荧光素酶实验基因报告分析miR-197与JAK2的作用关系,Western blotting检测各组细胞中JAK2的表达。结果qRT-PCR结果显示,与癌旁组织相比,miR-197在OSCC组织中的表达明显升高,JAK2在OSCC组织中的表达明显降低(P<0.05)。与人正常口腔黏膜角化细胞株HOKs相比,miR-197在人OSCC细胞株CAL27中的表达明显上升,JAK2在CAL27中的表达明显下降(P<0.05);与miR-197-siRNA-NC组相比,miR-197-siRNA组贴壁细胞数量明显减少,胞质空泡样,细胞堆积明显增多,染色质固缩,核膜破损严重,线粒体空泡。流式细胞术、EdU标记实验、平板集落克隆实验、软琼脂集落形成实验结果表明,与miR-197-siRNA-NC组相比,miR-197-siRNA组细胞凋亡率明显增加,细胞内DNA合成明显受阻,细胞增殖和侵袭明显受到抑制,差异均具有统计学意义(P<0.05);荧光素酶实验基因报告分析结果证明,miR-197与JAK2具有靶向调控关系;Western blotting结果表明,与miR-197-siRNA-NC组相比,miR-197-siRNA组细胞中JAK2的表达明显升高(P<0.05)。结论miR-197在OSCC中呈高表达,下调miR-197可抑制OSCC细胞增殖,这可能与JAK信号通路有关。

Hsa-miR-148a-3p通过下调DUSP1基因促进乳腺癌细胞的恶性行为

目的通过生信分析结合体内外实验验证Hsa-miR-148a-3p调控双特异性磷酸酶1(DUSP1)对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法TCGA数据库下载数据并鉴定差异微小RNA(miRNA)和信使RNA(mRNA);数据库筛选差异miRNA靶基因;String和Cytoscape构建蛋白质互作网络及筛选TOP10 hub基因;TCGA数据库验证TOP10hub基因的表达;Cytoscape构建miRNA-TOP10hub基因网络。定量逆转录PCR(RT-qPCR)实验检测Hsa-miR-148a-3p和DUSP1在人乳腺癌组织和细胞中的表达。采用Hsa-miR-148a-3p mimic、Hsa-miR-148a-3p inhibitor及对照NC转染MCF-7细胞。分为NC组,NC mimics组,HsamiR-148a-3p mimics组,NC inhibitor组,Hsa-miR-148a-3p inhibitor组;荧光素酶报告基因实验验证Hsa-miR-148a-3p和DUSP1的结合;CCK-8,划痕实验,Transwell和细胞凋亡实验验证Hsa-miR-148a-3p对乳腺癌细胞增殖,迁移,侵袭和凋亡的影响。建立裸鼠成瘤模型,测量小鼠肿瘤质量和体积;Kaplan-Meier生存曲线分析小鼠生存情况;免疫组化检测DUSP1的表达水平。结果获得乳腺癌差异miRNA 54个(8个下调,46个上调),差异mRNA799个(509个下调,290个上调);54个差异miRNA预测靶基因3716个,与差异mRNA取交集,得到150个交集基因;蛋白-蛋白互作网络图中的TOP10hub基因为MET,LPAR1,LAMC1,FOS,EGFR,PIK3R1,DUSP1,GNAI1,LAMA4,NR3C1,这些基因在乳腺癌组织中均显著下调;双荧光素酶报告基因实验证实Hsa-miR-148a-3p能与DUSP1结合;RT-qPCR结果表明,Hsa-miR-148a-3p在乳腺癌组织和细胞中显著上调(P<0.01),而DUSP1则显著下调(P<0.01)。细胞实验结果表明,Hsa-miR-148a-3p促进乳腺癌细胞增殖,迁移和侵袭,抑制细胞的凋亡(P<0.01)。动物实验结果表明,Hsa-miR-148a-3p促进小鼠体内肿瘤质量和体积的增长(P<0.01),缩短小鼠的存活时间(P<0.01),免疫组化结果显示,Hsa-miR-148a-3p抑制DUSP1的表达水平(P<0.01)。结论Hsa-miR-148a-3p通过抑制DUSP1的表达而作为癌基因发挥作用,这有助于开发针对乳腺癌的新型治疗靶点。

微小RNA hsa-miR-93靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗敏感性的机制研究

目的研究hsa-miR-93在鼻咽癌放疗抗拒过程中的作用及分子机制。方法以人鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、CNE-2R、HONE1、C666.1以及鼻咽上皮永生细胞NP460为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞经放疗后hsa-miR-93的表达;采用Western blot法检测各组细胞经放疗后STAT3蛋白的表达;通过miRWalk软件和RNAHybrid软件预测hsa-miR-93和STAT3的结合作用及结合位点;通过双荧光素酶报告基因法检测hsa-miR-93对STAT3靶向结合情况;瞬时转染小分子模拟物或抑制剂调控hsa-miR-93的表达后,采用qRT-PCR和Western blot法检测STAT3的表达;转染siSTAT3沉默STAT3的表达后,通过细胞集落形成实验检测鼻咽癌细胞经放疗后的集落形成能力。结果与CNE-1、CNE-2细胞(相对放疗敏感)相比,hsa-miR-93在HONE1、CNE-2R细胞(相对放疗抗拒)中表达降低(P<0.001),且各组鼻咽癌细胞经放疗后hsa-miR-93的表达呈剂量及时间依赖性降低(P<0.05);与CNE-1、CNE-2细胞相比,STAT3在HONE1、CNE-2R细胞中表达升高,且各组鼻咽癌细胞经放疗后表达呈剂量及时间依赖性升高;经预测,hsa-miR-93可直接靶向结合STAT3。过表达hsa-miR-93可以在mRNA以及蛋白水平上显著抑制STAT3的表达(P<0.05),而抑制hsa-miR-93的表达可以显著上调STAT3的表达(P<0.05);过表达hsa-miR-93或沉默STAT3均使鼻咽癌细胞的集落形成显著减少(P<0.001);抑制hsa-miR-93减弱了鼻咽癌对放疗的敏感性,而同时抑制hsa-miR-93和STAT3后,可提高鼻咽癌对放疗的敏感性。结论hsa-miR-93可能通过靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗的敏感性。

血清hsa-miR-34a-3p及hsa-miR-206表达对妊娠合并甲减患者子代心肌损害的预测研究

目的探讨血清hsa-miR-34a-3p及hsa-miR-206表达对妊娠合并甲状腺功能减退(简称甲减)患者子代心肌损害的预测价值。方法选取2019年8月至2021年8月宜宾市第二人民医院收治的妊娠合并甲减患者248例作为观察组,另选取同期健康体检孕妇236例为对照组,均采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测血清hsa-miR-34a-3p及hsa-miR-206表达情况并进行比较;随访至妊娠结束,观察并比较两组子代心肌损害发生情况;观察组根据子代是否发生心肌损害将妊娠合并甲减患者进一步分为发生组和未发生组,比较此两组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平;采用多因素Logistic回归分析法分析妊娠合并甲减患者子代心肌损害的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析各血清指标单项及联合对妊娠合并甲减患者子代心肌损害的预测价值。结果观察组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于对照组(P<0.05);随访至妊娠结束,观察组子代心肌损害的发生率为20.97%(52/248),对照组子代心肌损害的发生率为1.69%(4/236);发生组血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平高于未发生组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206、促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、总三碘甲状腺原氨酸(TT3)、总甲状腺素(TT4)均是影响妊娠合并甲减患者子代心肌损害的影响因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206联合预测妊娠合并甲减患者子代心肌损害的灵敏度均高于单独预测(P<0.05),曲线下面积(AUC)也高于单独预测(P<0.05),特异度与单独预测比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论妊娠合并甲减患者血清hsa-miR-34a-3p、hsa-miR-206水平异常升高,此可能会增加子代心肌损害发生风险,且二者对妊娠合并甲减患者子代心肌损害具有一定的预测价值。

hsa-miR-423-5p激活IL1R1基因在冠心病中的作用机制

目的:通过人群表达水平及转录组测序分析hsa-miR-423-5p靶向目标基因在冠心病(CHD)中的作用机制。方法:选取广西医科大学第一附属医院收治的151例CHD患者(CHD组),同期选择健康体检者作为健康对照组。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测外周血白细胞中hsa-miR-423-5p表达水平,通过Spearman相关分析对hsa-miR-423-5p与各临床指标的相关关系进行分析。在EA.hy 926细胞中过表达hsa-miR-423-5p后进行hsa-miR-423-5p的亚细胞定位实验及转录组测序。针对测序结果预测hsa-miR-423-5p的潜在靶基因,对其进行RT-qPCR实验验证并分析目标基因与hsa-miR-423-5p表达水平及各临床指标之间的相关关系。结果:CHD组外周血白细胞中hsa-miR-423-5p的表达水平显著低于健康对照组(P<0.05)。hsamiR-423-5p的表达量与总胆固醇(TC)呈负相关关系,与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)呈正相关关系(P<0.05)。在EA.hy926细胞中过表达hsa-miR-423-5p,亚细胞定位实验显示hsa-miR-423-5p主要存在于细胞核内。转录组测序结果经过分析验证后,发现过表达hsa-miR-423-5p后可上调IL1R1表达。CHD组中IL1R1的表达水平低于健康对照组(P<0.01),IL1R1表达水平与hsa-miR-423-5p表达水平、HDL-C均呈正相关关系(P<0.01)。结论:hsa-miR-423-5p及IL1R1在CHD患者中呈低表达且与TC和HDL-C相关;hsa-miR-423-5p在内皮细胞上调IL1R1的表达进而影响血脂水平,提示hsa-miR-423-5p可能通过调控IL1R1基因影响脂质代谢及内皮细胞功能从而参与CHD的进展。

过表达Hsa-miR-133a-2对宫颈癌细胞增殖与侵袭的影响

目的 探究hsa-mir-133a-2对宫颈癌细胞表型的影响及其在宫颈癌细胞增殖与侵袭中的潜在分子机制。方法 通过癌症基因组图谱-宫颈鳞癌和腺癌(The Cancer Genome Atlas-Cervical squamous cell carcinoma and endocervical adenocarcinoma, TCGA-CESC)验证宫颈癌组织和癌旁组织中hsa-mir-133a-2的表达情况;对TCGA-CESC中提取的307例高表达和低表达hsa-mir-133a-2的宫颈癌患者的临床信息进行K-M生存分析以评估其预后价值;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术对正常宫颈细胞和宫颈癌细胞中hsa-mir-133a-2的表达进一步检测;采用细胞计数试剂盒-8(CKK8)和transwell法检测hsa-mir-133a-2对宫颈癌细胞增殖和侵袭的影响。结果 与宫颈癌癌旁组织细胞和正常宫颈细胞相比,hsa-mir-133a-2在宫颈癌细胞中表达水平均显著下调(P<0.05);K-M生存分析结果表明,高表达hsa-mir-133a-2的宫颈癌患者具有相对较长的总生存期(P<0.05);hsa-mir-133a-2模拟处理导致宫颈癌细胞的活力和侵袭能力降低,而hsa-mir-133a-2抑制剂处理的宫颈癌细胞的活力和侵袭能力均显著提高。结论 hsa-mir-133a-2可以抑制宫颈癌细胞的增殖与侵袭,为宫颈癌的临床治疗提供新的策略。

hsa-miR-767通过调控IGF1基因对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨hsa-miR-767调控IGF1对人乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:利用生信数据分析乳腺癌的差异基因,并构建miRNA-mRNA网络,筛选hsa-miR-767/IGF1信号轴进行验证。建立hsa-miR-767过表达和敲除MCF7细胞株,RT-qPCR验证hsa-miR-767的表达,双荧光素酶报告基因实验检测hsa-miR-767和IGF1的结合,CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验和流式细胞术检测乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力。结果:识别出26个差异miRNA(DEMs)和1108个差异基因(DEGs)。预测获得靶基因254个,靶基因与测序DEGs取交集得到73个mRNA。鉴定出10个hub基因(IGF1、NTRK2、CEBPA、FOS、KLF4、GABRA1、NRG1、LPL、GABBR2、ANGPT1),其中IGF1所连接的基因较多,说明其在乳腺癌中较为重要。miRNA-mRNA网络图中发现hsa-miR-767/IGF1轴可能在乳腺癌中起关键作用。细胞实验证实hsa-miR-767表达水平在乳腺癌中上调(P<0.05),其能靶向结合IGF1;hsa-miR-767还可促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制细胞的凋亡(P<0.05)。结论:hsa-miR-767可促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡,且可与IGF1结合。