血清LncRNA HCG11及miR-26b-5p与急性缺血性脑卒中患者脑梗死面积及功能预后的相关性

目的研究急性缺血性脑卒中患者血清长链非编码RNA人类白细胞抗原复合物组11(long non coding RNA human leukocyte antigen complex group 11,LncRNA HCG11)及微小核糖核酸-26b-5p(microRNA-26b-5p,miR-26b-5p)水平与脑梗死面积及功能预后的相关性。方法选取2021年1月至2022年12月本院收治的急性缺血性脑卒中患者106例,根据梗死面积将其分为小面积组、中面积组和大面积组,随访1年后根据改良Rankin量表(modified Rankin Scale,mRS)分为预后良好组和预后不良组。采用qRT-PCR检测LncRNA HCG11,miR-26b-5p相对表达量;采用Logistic回归分析影响患者预后的因素;绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析LncRNA HCG11和miR-26b-5p对患者梗死面积的诊断及对预后的预测价值。采用Spearman相关分析LncRNA HCG11、miR-26b-5p与梗死面积及美国国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NHISS)的相关性。结果急性缺血性脑卒中大面积梗死患者的LncRNA HCG11水平升高,miR-26b-5p水平降低(P<0.05);与预后良好患者相比,预后不良患者的LncRNA HCG11水平升高,miR-26b-5p水平降低(P<0.05);不同梗死面积患者高血压史、高血脂史以及NHISS评分、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)之间比较,差异具有统计学意义(P<0.05);LncRNA HCG11与梗死面积及NHISS均呈正相关(r_(梗死面积)=0.553,P_(梗死面积)<0.001;r_(NHISS)=0.462,P_(NHISS)<0.001),miR-26b-5p与梗死面积及NHISS均呈负相关(r'_(梗死面积)=-0.534,P'_(梗死面积)<0.001;r'_(NHISS)=-0.447,P'_(NHISS)<0.001);miR-26b-5p为影响患者预后不良的保护因素,高血压史、NHISS评分、CRP和LncRNA HCG11为患者预后不良的影响因素(P<0.05);LncRNA HCG11和miR-26b-5p及联合诊断患者梗死面积优于单独指标诊断(Z_(LncRNA HCG11)=3.049,P_(LncRNA HCG11)=0.002;Z_(miR-26b-5p)=2.657,P_(miR-26b-5p)=0.008,AUC=0.937);且LncRNA HCG11+miR-26b-5p对患者预后的预测能力显著优于LncRNA HCG11、miR-26b-5p、CRP、NHISS单独指标(Z_(LncRNA HCG11)=2.207,P_(LncRNA HCG11)=0.027;Z_(miR-26b-5p)=2.080,P_(miR-26b-5p)=0.038;Z_(CRP)=2.341,P_(CRP)=0.019;Z_(NHISS)=2.093,P_(NHISS)=0.036,AUC=0.892);LncRNA HCG11与miR-26b-5p呈负相关(r=-0.425,P<0.05)。结论急性缺血性脑卒中患者血清LncRNA HCG11水平升高,miR-26b-5p水平降低,均为患者脑梗死面积及功能预后的影响因素,对患者脑梗死面积及功能预后具有一定的诊断及预测价值。

miR-26b-5p靶向VEGF抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-26b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549,通过qPCR检测BEAS-2B和A549细胞中miR-26b-5p和VEGF mRNA的表达水平。通过Western Blot检测BEAS-2B和A549细胞中E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白的表达水平。生物信息学预测VEGF与miR-26b-5p的靶向关系。使用脂质体法将NC-mimic和miR-26b-5p-mimic转染A549细胞,通过CCK8法、EDU实验检测miR-26b-5p对细胞生长的影响;通过划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-26b-5p对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot检测对E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达的影响。结果与BEAS-2B细胞相比,在A549细胞中,miR-26b-5p表达水平显著下降(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达水平显著下降(P<0.05),而Vimentin的蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与NC-mimic组相比,miR-26b-5p-mimic组在24h、48h以及72h时细胞吸光值显著减少(P<0.05),24h划痕距离显著增加(P<0.05),24h侵袭细胞数显著减少(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.05)、Vimentin和VEGF蛋白表达显著下调(均P<0.05)。结论过表达miR-26b-5p可以通过靶向抑制VEGF的表达,从而抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。

肿瘤相关成纤维细胞上调hsa-miR-18b-5p靶向FBXL3促进前列腺癌的增殖及转移

目的探讨受肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)调控的hsa-miR-18b-5p在前列腺癌(PCa)中的表达水平及作用,并研究对其在PCa发生发展过程中的分子机制。方法利用生物信息学技术分析在PCa中高表达的miRNA,构建肿瘤相关成纤维细胞并与PCa细胞系共培养,验证CAFs对PCa细胞增殖和迁移的影响及对hsa-miR-18b-5p的调控作用;RT-qPCR验证20例患者癌组织及癌旁正常组织、前列腺正常上皮增生细胞及PCa各细胞系中hsa-miR-18b-5p的表达水平;通过脂质体法将阴性对照及hsamiR-18b-5p抑制物分别转染入PCa细胞C4-2、LNCAP中,分为NC inhibitor组和hsa-miR-18b-5p inhibitor组;采用细胞集落形成、CCK-8实验、划痕愈合、Transwell、IC_(50)实验、流式细胞术分别检测C4-2、LNCAP细胞增殖、迁移、侵袭、耐药能力、凋亡和周期;建立PCa裸鼠移植瘤模型,定期测量移植瘤的质量和体积,Kaplan-Meier生存曲线分析裸鼠生存情况;利用靶基因预测分析网站(Targetscan、Mirtarbase、miRDB、miRDIP)预测has-miR-18b-5p的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因分析验证hsa-miR-18b-5p与靶基因的靶向关系,RT-qPCR、Western blotting检测各组细胞靶基因的表达水平。结果生物信息学分析结果显示,在PCa中高表达的miRNA有17个,结合差异表达程度以及相关文献筛选出拟研究的基因:miR-148a、miR-17、miR-18b-5p、miR-770、miR-297-3p。CAFs与PCa细胞系共培养后hsa-miR-18b-5p的表达水平升高(P<0.01),且促进PCa细胞的增殖与迁移(P<0.01),敲除has-miR-18b-5p可抵消CAFs对PCa细胞增殖及迁移的影响,确定has-miR-18b-5p为研究基因。与正常前列腺上皮细胞或肿瘤旁组织相比,PCa细胞或肿瘤组织中hsa-miR-18b-5p的表达升高(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制C4-2、LNCAP细胞的增殖、迁移、侵袭以及耐药(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制裸鼠移植瘤质量和体积的增长,增加裸鼠的生存时间(P<0.05)。靶基因预测分析网站显示,FBXL3是hsa-miR-18b-5p的一个潜在作用靶点,双荧光素酶报告基因证实has-miR-18b-5p与FBXL3基因间存在结合位点,且敲除hsa-miR-18b-5p可增加C4-2、LNCAP细胞中FBXL3的蛋白表达(P<0.05)。结论CAFs上调前列腺癌细胞hsa-miR-18b-5p的表达水平,后者可能通过靶向调控FBXL3基因的表达促进PCa细胞的增殖和转移。

超声弹性成像联合血清miR-26b-5p及环氧化酶-2检测对早期子宫肌瘤的临床诊断价值

目的:探讨超声弹性成像联合血清微小RNA-26b-5p(miR-26b-5p)、环氧化酶-2(COX-2)检测对早期子宫肌瘤的诊断价值。方法:选取2020年10月至2022年9月在无锡联勤保障中心第九〇〇医院诊断的228例疑似子宫肌瘤患者,以病理切片检查结果为“金标准”,将其分为阳性组(124例)和阴性组(104例),两组均行超声弹性成像检查,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测患者血清miR-26b-5p表达水平,酶联免疫吸附法检测血清COX-2水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC),分析血清miR-26b-5p、COX-2对子宫肌瘤的诊断价值,采用四表格法分析超声弹性成像以及超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2对子宫肌瘤的诊断价值。结果:经病理切片检查,228例患者中子宫肌瘤阳性124例,阴性104例;超声弹性成像结果显示阳性117例,阴性111例,超声弹性成像检查诊断的灵敏度为74.19%,特异度为75.96%,准确率为75.00%。阳性组患者血清miR-26b-5p水平明显低于阴性组,COX-2水平明显高于阴性组,两组比较差异有统计学意义(t=4.519、5.601,P<0.05)。血清miR-26b-5p诊断子宫肌瘤的AUC为0.749,灵敏度为95.97%,特异度为46.15%,最佳截断值为1.10;血清COX-2诊断子宫肌瘤的AUC为0.835,灵敏度为66.13%,特异度为84.62%,最佳截断值为40.58 mg/L;超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2诊断的灵敏度为93.55%,特异度为86.54%,准确率为90.35%,与单独诊断比较差异有统计学意义(χ^(2)=23.158、17.169,P<0.05)。结论:超声弹性成像联合血清miR-26b-5p、COX-2诊断早期子宫肌瘤具有较高的效能。

颅内动脉瘤患者血清hsa-miR-513b-5p水平及作用机制研究

目的探讨血清hsa-miR-513b-5p在颅内动脉瘤患者中的表达水平及其可能的作用机制。方法收集颅内动脉瘤患者(颅内动脉瘤组)和无颅内动脉瘤的志愿者(对照组)各100例,采用定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)技术测定血清hsa-miR-513b-5p、肿瘤坏死因子(TNF-α)、MMP2、MMP3、MMP9(基质金属蛋白酶,MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂4(TIMP4)水平。采用hsa-miR-513b-5p模拟物和抑制剂转染人血管平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HASMC),检测细胞增殖、凋亡和坏死变化。通过双荧光素酶报告基因分析hsa-miR-513b-5p的作用靶点COL1A1,并分析影响颅内动脉瘤形成的信号通路。结果颅内动脉瘤组患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、TNF-α、MMP2、MMP3、MMP9水平高于对照组(P<0.05),而低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)、血浆总同型半胱氨酸(Hcy)和TIMP4水平降低(P<0.05)。与对照组相比,颅内动脉瘤组患者血清hsa-miR-513b-5p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。经has-miR-513b-5p模拟物转染的HASMC,与模拟物对照组比较,其细胞增殖能力降低,而凋亡和坏死水平增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。经has-miR-513b-5p抑制剂转染的HASMC,与抑制剂对照组比较,其细胞增殖能力增强,而凋亡和坏死水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。双荧光素酶检测结果显示has-miR-513b-5p可靶向抑制COL1A1表达,并上调RIP1-RIP3-MLKL和MMPs信号通路,抑制HASMC增殖和细胞外基质合成。结论血清hsa-miR-513b-5p在颅内动脉瘤患者中表达水平下降,并参与调节血管平滑肌细胞增殖和细胞外基质合成影响动脉瘤形成。

microRNA 26b-5p靶向下调p300对人脐带间充质干细胞的增殖作用

目的探讨潜在microRNA靶向下调p300表达水平对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)增殖的影响。方法通过双荧光素酶报告基因(Firefly/Renilla Luciferase)系统筛选出作用于p300 3'UTR的目标microRNA,mimic转染UC-MSCs后RT-q PCR检测miRNA表达水平的变化,Western blot检测p300蛋白水平变化,RT-q PCR和Western blot检测多潜能转录因子表达水平的变化,MTT法检测UC-MSCs增殖能力的变化,并比较克隆形成能力的差异。结果证实mir 26b-5p通过不完全互补配对结合p300的3'UTR区,显著降低了荧光素酶的相对活性(P<0.05);mir 26b-5p mimic转染后抑制p300蛋白表达水平(P<0.05),并下调Nanog基因和蛋白表达水平(P<0.05);mir 26b-5p mimic转染后UC-MSCs的增殖受到抑制(P<0.05),克隆形成能力下降(P<0.05)。结论 UC-MSCs高表达mir 26b-5p能够显著抑制p300蛋白表达和干性相关基因Nanog的表达,并且抑制UC-MSCs的增殖能力和克隆形成能力。

急诊冠状动脉介入治疗术后循环microRNA-26b-5p水平与血糖水平变化的观察性研究

目的:评估急诊冠状动脉介入治疗术(PCI)后循环microRNA-26b-5p水平和血糖水平变化的趋势及相关性。方法:根据入选标准和排除标准,共入选接受急诊PCI术的急性前壁心肌梗死患者38例。详细记录临床相关资料,分别于术前、术后24h、术后72h行循环血microRNA-26b-5p和血糖水平检测。Real Time PCR法检测血液样本中microRNA-26b-5p表达量的变化。结果:对于成功行急诊PCI的急性心肌梗死患者,术后microRNA-26b-5p表达水平较术前明显升高(P<0.01),术后血糖水平逐渐下降(P<0.01),两者之间存在负相关(r=-0.332,P<0.01)。结论:急性心肌梗死患者往往存在应激性高血糖,microRNA-26b-5p可能参与血糖水平的相关。

血清血管紧张素转化酶2及微小RNA-26b-5p对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗术后心肌损伤的预测价值

目的探讨血清血管紧张素转化酶2(ACE2)、微小RNA-26b-5p(miR-26b-5p)对急性冠状动脉综合征患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心肌损伤的预测价值。方法选取2019年11月至2021年1月在华北石油管理局总医院行PCI手术的急性冠状动脉综合征患者122例,根据PCI术后6个月是否发生心肌损伤,分为心肌损伤组39例和心肌未损伤组83例。收集所有患者临床资料,采用酶联免疫吸附法检测血清ACE2水平、实时荧光定量PCR法检测血清miR-26b-5p水平,Pearson法分析血清ACE2与miR-26b-5p水平的相关性,受试者工作特征曲线评价血清ACE2、miR-26b-5p水平对急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的预测价值。结果与心肌未损伤组相比,心肌损伤组术后6个月肌钙蛋白I(cTnI)、术后6个月肌酸激酶同工酶(CK-MB)较高,差异有统计学意义(t=40.656、27.486,P<0.05)。与心肌未损伤组相比,心肌损伤组血清ACE2水平较高,血清miR-26b-5p水平较低,差异均有统计学意义(t=11.159、14.842,P<0.05);血清miR-26b-5p与ACE2水平呈负相关(r=-0.567,P<0.05);血清ACE2、miR-26b-5p水平预测急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的曲线下面积(AUC)分别为0.796、0.878,敏感度分别为87.20%、85.50%,特异度分别为60.20%、82.10%;两者联合预测急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤的AUC为0.916,敏感度、特异度分别为89.70%、79.50%。结论急性冠状动脉综合征PCI术后心肌损伤患者血清ACE2呈高表达,血清miR-26b-5p呈低表达,ACE2、miR-26b-5p可预估急性冠状动脉综合征患者PCI术后心肌损伤,两者联合预测价值较好。

微小RNA-26b-5p对缺血性心律失常大鼠心房肌细胞L型钙通道的影响

目的探讨微小RNA(miR)-26b-5p对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸(PIP3)信号通路的调控作用以及对缺血性心律失常大鼠心房肌细胞L型钙通道的影响。方法选择SD大鼠72只,按照随机数表法分为假手术组、模型组、LY294002组、阴性对照组、过表达组、联合组,每组12只。各组给予相应干预24h,除假手术组外的其余各组大鼠建立缺血性心律失常模型,假手术组大鼠仅开胸不结扎。建模过程中检测各组大鼠心律失常指标,采用Curtis-Walker评分法进行心律失常评分;荧光定量PCR法检测心房肌细胞中miR-26b-5p表达;全细胞膜片钳技术记录心房肌细胞L型钙通道电流(ICa-L);蛋白印迹法检测L型钙通道α1C亚基(CACNA1C)、钙调蛋白及PI3K/PIP3通路相关蛋白表达。结果与模型组比较,LY294002组大鼠左心室室性期前收缩次数、室性心动过速持续时间、心室颤动持续时间、心律失常评分、心房肌细胞ICa-L峰值密度绝对值、CACNA1C、钙调蛋白表达显著升高,磷酸化PI3K、PIP3、磷酸化蛋白激酶B(Akt)表达显著降低,过表达组大鼠左心室室性期前收缩次数、室性心动过速持续时间、心室颤动持续时间、心律失常评分、心房肌细胞ICa-L峰值密度绝对值、CACNA1C、钙调蛋白表达显著降低,miR-26b-5p、磷酸化PI3K、PIP3、磷酸化Akt表达显著升高(P<0.05)。与过表达组比较,联合组大鼠左心室室性期前收缩次数、室性心动过速持续时间、心室颤动持续时间、心律失常评分、心房肌细胞ICa-L峰值密度绝对值、CACNA1C、钙调蛋白表达显著升高,磷酸化PI3K、PIP3、磷酸化Akt表达显著降低(0.82±0.08vs1.09±0.11,0.91±0.09vs1.17±0.11,0.94±0.09vs1.20±0.12,P<0.05)。结论miR-26b-5p过表达可能通过激活PI3K/PIP3相关信号通路,阻滞缺血性心律失常大鼠心房肌细胞L型钙通道,改善心律失常表现。

hsa-miR-199b-5p与足细胞损伤的生物信息学分析

目的：初步论述miR-199b-5p的生物学功能。方法：首先我们应用miRbase、UCSC等数据库，对miR-199b-5p的序列进行了保守性分析；然后选择miranda、miRDB及TargetScan三个数据库预测hsa-miR-199b-5p的靶基因，取其交集；最后运用基因GO功能注释以及KEGG信号转导通路富集分析，探究miR-199b-5p靶基因可能相关的细胞功能和信号通路。结果：生物信息学分析发现，miR-199b-5p具有多种功能，其多个潜在靶基因涉及足细胞损伤发生、发展过程。结论：miR-199b-5p可能与慢性肾脏病（Chronic Kidney Disease，CKD）的发病机制相关，并为临床治疗提供了可能的潜在的新靶点。

子宫肌瘤患者血清和组织中hsa-miR-15b-5p,hsa-miR-21-5p的水平与组织中ER,PR蛋白表达的相关性研究

目的检测子宫肌瘤患者血清和组织中hsa-miR-15b-5p和hsa-miR-21-5p水平,并分析其与组织中雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)蛋白之间的相关性,进而探讨子宫肌瘤发生发展的作用机制。方法选取2019年8月~2020年12月于陆军军医大学士官学校附属医院妇科就诊的60例子宫肌瘤患者作为研究对象,另取同期因子宫脱垂行切除术的60例患者作为对照,通过免疫组化SP法和Westerblot法检测所有患者肌瘤组织和正常肌层组织中ER和PR蛋白的相对表达;术前采所有患者的空腹外周静脉血,通过qRT-PCR法分别检测患者血清和组织中hsa-miR-15b-5p和hsa-miR-21-5p mRNA的相对表达水平,并分析组织中hsa-miR-15b-5p和hsa-miR-21-5p水平与ER,PR蛋白表达的相关性。结果免疫组化结果显示,ER蛋白在子宫肌瘤组和正常子宫肌层组的阳性表达率分别为73.3%(44/60)和38.3%(23/60)(χ^(2)=14.903,P=0.002),PR蛋白在子宫肌瘤组和正常子宫肌层组阳性表达率分别为65.0%(39/60)和31.7%(19/60)(χ^(2)=13.348,P=0.005),差异均有统计学意义。Westernblot结果显示,子宫肌瘤组ER水平(0.98±0.21)较正常子宫肌层组(0.62±0.15)显著升高(t=22.147,P<0.001),子宫肌瘤组PR水平(0.80±0.14)较正常子宫肌层组(0.38±0.08)亦显著升高(t=38.265,P<0.001),差异均有统计学意义。qRT-PCR结果表明,与正常子宫肌层组相比,hsa-miR-15b-5p(1.98±0.12 vs 1.02±0.11)和hsa-miR-21-5p(2.21±0.15 vs 0.93±0.18)mRNA在子宫肌瘤患者血清中表达水平均显著增加(t=46.080,63.944,均P<0.001),在肌瘤组织中两者表达水平较正常肌层组织亦显著升高(t=39.852,52.046,均P<0.001),差异均有统计学意义。Pearson法分析发现,组织中hsa-miR-15b-5p和hsa-miR-21-5p表达水平与ER和PR蛋白表达水平呈明显正相关(r=0.744~0.902,均P<0.001)。结论hsa-miR-15b-5p和hsa-miR-21-5p在子宫肌瘤患者血清和组织中表达水平均显著升高,子宫肌瘤组织中ER和PR蛋白亦呈高表达,并且hsa-miR-15b-5p和hsa-miR-21-5p水平与ER和PR表达水平呈明显正相关,可能协同诱导子宫肌瘤发生发展。

超声心动图联合血清miR-26b-5p在诊断急性心肌梗死中的应用

探讨超声心动图联合血清微小核糖核酸-26b-5p(miR-26b-5p)在急性心肌梗死(AMI)诊断中的价值。选取115例AMI患者(观察组)和80例陈旧性心肌梗死患者(对照组),分析两组超声心动图参数及血清miR-26b-5p差异。观察组左室舒张末期内径(LVEDd)、左室收缩末期内径(LVEDs)、左室舒张末期容积(LVEDV)、室收缩末期容积(LVESV)、心肌做功指数(Tei)明显高于对照组(P<0.05),而左室射血分数(LVEF)、E/A、miR-26b-5p明显低于对照组(P<0.05)。冠脉不同狭窄程度患者的LVEF、血清miR-26b-5p水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。血清miR-26b-5p与Gensini评分呈负相关(r=-0.503,P<0.05)。超声心动图联合血清miR-26b-5p诊断AMI的灵敏性和阴性预测值明显高于超声心动图单独诊断(P<0.05)。随访结果显示,发生主要不良心血管事件(MACE)患者LVEDs、LVESV明显高于未发生MACE患者(P<0.05),LVEF、miR-26b-5p明显低于未发生MACE患者(P<0.05)。LVEDs、LVEF、miR-26b-5p及联合预测MACE发生的ROC曲线下面积分别为0.753、0.732、0.701和0.915,P<0.05。急性心肌梗死患者的血清miR-26b-5p水平降低,miR-26b-5p联合超声心动图参数在鉴别诊断AMI及预测MACE方面有较好的应用价值。

miR-26b-5p通过靶向NFE2L3调控结直肠癌细胞生长、迁移和侵袭

目的探究miRNA-26b-5p(miR-26b-5p)靶向调控NFE2L3表达水平影响结直肠癌细胞生长、迁移和侵袭能力的分子机制。方法通过qPCR的方法检测了人正常肠上皮细胞(NCM460)及结直肠癌细胞系(HT29、SW620及HCT116)中miR-26b-5p的表达水平。通过qPCR及western blot检测了上述细胞系中NFE2L3的表达水平。生物信息学方法分析了miRNA-26b-5p与NFE2L3结合的靶向序列。双荧光素酶基因报告实验检测miR-26b-5p对NFE2L3的靶向调控机制。用脂质体法将miR-26b-5p mimic或同时将NFE2L3转染HT29及SW620结直肠癌细胞系中,通过CCK-8及克隆形成实验观察对细胞生长的影响,通过流式细胞术观察凋亡能力的影响,通过Transwell观察细胞迁移和侵袭能力的影响。结果与人正常上皮细胞系相比,在结直肠癌细胞系中miR-26b-5p的表达水平显著下调(P <0.05),而NEF2L3的m RNA水平及蛋白水平则显著上调(P <0.05)。双荧光素酶报道基因实验显示miR-26b-5p能显著影响NEF2L3 3′UTR表达载体的荧光素酶活性(P <0.05)。过表达miR-26b-5p可显著抑制结直肠癌细胞系细胞的生长、克隆形成及迁移和侵袭能力,引起细胞凋亡(均P <0.05),而同时过表达NEF2L3则可抵消miR-26b-5p的对细胞功能的作用(均P <0.05)。结论在结直肠癌中miR-26b-5p低表达,而NEF2L3高表达;miR-26b-5p可靶向调控癌基因EF2L3的表达水平,从而调控结直肠癌细胞的生长、凋亡、迁移和侵袭,参与结直肠癌的发生发展。

QPRT、miR-26b-5p在乳腺癌中表达及其与患者预后的关系

目的分析喹啉酸磷酸核糖基转移酶(QPRT)、微小RNA-26b-5p(miR-26b-5p)在乳腺癌中表达及其与患者预后的关系。方法选取2015年3月—2017年10月于广州市中西医结合医院行乳腺癌(经病理组织检查均为乳腺浸润性导管癌)改良根治术女性患者89例为研究对象,获取乳腺癌组织(观察组)和癌旁正常乳腺组织(对照组),免疫组化法检测QPRT表达,原位杂交技术检测miR-26b-5p表达水平,分析QPRT、miR-26b-5p水平与患者术后复发转移的关系,COX多因素分析乳腺癌患者发生复发转移的影响因素。结果观察组QPRT的阳性表达率明显高于对照组,miR-26b-5p的阳性表达率明显低于对照组(χ^(2)/P=54.395/0.000、23.448/0.000);QPRT与miR-26b-5p在乳腺癌组织中表达呈负相关(r/P=-0.343/0.000);QPRT、miR-26b-5p表达水平与患者TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(QPRT:χ^(2)/P=5.326/0.021、4.991/0.025、6.740/0.009,miR-26b-5p:χ^(2)/P=5.902/0.015、4.946/0.026、7.949/0.005);QPRT高表达患者术后复发转移率明显高于QPRT低表达患者(65.38%vs.29.73%,χ^(2)/P=13.260/0.000),miR-26b-5p低表达患者术后复发转移率明显高于miR-26b-5p高表达患者(63.79%vs.25.81%,χ^(2)/P=12.550/0.000);分化程度低、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结发生转移、QPRT高表达、miR-26b-5p低表达是影响乳腺癌患者术后复发转移的危险因素[OR(95%CI)=2.381(1.394~4.066)、2.317(1.272~4.221)、2.449(1.243~4.825)、2.604(1.501~4.517)、3.007(1.625~5.564)]。结论乳腺癌组织中QPRT表达上调,miR-26b-5p表达下调,是影响乳腺癌患者术后发生复发转移的危险因素,可能为临床治疗乳腺癌提供潜在靶点。

过表达miR-26b-5p抑制HMGA1参与卵巢癌细胞上皮间质转化的机制

目的探究microRNA-26b-5p(miR-26b-5p)介导高迁移率族蛋白组A1(high-mobility group A1,HMGA1)基因参与卵巢癌上皮间质转化的机制。方法对miR-26b-5p靶基因进行预测。qRT-PCR检测组织中miR-26b-5p和HMGA1的表达量。卵巢癌细胞分组转染后,qRT-PCR和Western Blot检测细胞中相关因子的mRNA和蛋白的表达量;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭,细胞划痕实验检测迁移能力。结果卵巢癌组织中miR-26b-5p表达降低,HMGA1的表达升高(均P <0. 05)。miR-26b-5p mimic及sh-HMGA1组HMGA1和Vimentin表达降低而E-cadherin表达上调,且细胞侵袭和迁移降低(均P <0. 05);共转染miR-26b-5p inhibitor和sh-HMGA1,sh-HMGA1处理对上皮间质转化及细胞侵袭和迁移的抑制作用被逆转(均P <0. 05)。结论过表达miR-26b-5p可抑制卵巢癌细胞中HMGA1和Vimentin表达并促进E-cadherin表达,降低细胞侵袭和迁移能力,从而抑制卵巢癌细胞上皮间质转化。

lncRNA SNHG6通过microRNA-26b-5p对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制研究

目的 探究lncRNA SNHG6通过microRNA-26b-5p(miR-26b-5p)对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞增殖、迁移、侵袭的作用机制。方法 体外培养人TNBC细胞系MDA-MB-231细胞,培养后分组转染。设置对照组(空载质粒转染),SNHG6敲减组(si-SNHG6慢病毒载体转染)、miR-26b-5p抑制组(空载质粒+miR-26b-5p-inhibitor转染)及共转染组(si-SNHG6慢病毒载体+miR-26b-5p-inhibitor转染)。实时荧光定量聚合酶链反应检测SNHG6及miR-26b-5p的表达,分别进行CCK-8实验、划痕实验及Transwell实验检测MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭能力,采用双荧光素酶报告实验检测SNHG6与miR-26b-5p的靶向作用。结果 与对照组比较,SNHG6敲减组SNHG6 mRNA表达下调(P <0.05),miR-26b-5p mRNA表达上调(P <0.05);与对照组比较,miR-26b-5p抑制组SNHG6 mRNA表达上调(P <0.05),miR-26b-5p mRNA表达下调(P <0.05);与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组SNHG6 mRNA表达上调(P <0.05),miR-26b-5p mRNA表达下调(P <0.05);与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组SNHG6 mRNA表达下调(P <0.05),miR-26b-5p mRNA表达上调(P <0.05)。对照组、SNHG6敲减组、miR-26b-5p抑制组、共转染组24 h、48 h、72 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点OD值有差异(F=52.481,P=0.000)。(2)4组OD值有差异(F=50.336,P=0.000),与对照组比较,SNHG6敲减组及共转染组24 h、48 h及72 h的OD值降低(P <0.05),miR-26b-5p抑制组24 h、48 h及72 h的OD值升高(P <0.05);与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组24 h、48 h及72 h的OD值升高(P <0.05);与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组OD值降低(P <0.05)。(3)4组OD值变化趋势有差异(F=20.109,P=0.000)。与对照组比较,SNHG6敲减组和共转染组划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少(P <0.05),miR-26b-5p抑制组划痕愈合率升高,侵袭细胞数增加(P <0.05);与SNHG6敲减组比较,miR-26b-5p抑制组和共转染组划痕愈合率升高,侵袭细胞数增加(P <0.05);与miR-26b-5p抑制组比较,共转染组划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少(P <0.05)。且SNHG6与miR-26b-5p基因序列上存在结合位点。结论 敲减SNHG6通过靶向上调MDA-MB-231细胞中miR-26b-5p的表达,抑制TNBC增殖、迁移及侵袭。

miR-26b-5p通过下调MKNK2/eIF4E信号通路抑制胰腺癌细胞的增殖及侵袭

目的:筛选胰腺癌(PC)侵袭相关微小RNA(miRNA,miR),验证其生物学功能和调控的信号通路,为胰腺癌的诊治提供新的分子标志物和靶点。方法:通过基因表达综合数据库(GEO)的miRNA表达谱数据集GSE71533和GSE85589,分析miR-26b-5p的差异表达;利用癌症基因组图谱数据库(TCGA),分析miR-26b-5p对PC患者总生存率的影响。采用TargetScan数据库识别miR-26b-5p的靶基因集。通过细胞功能实验,验证miR-26b-5p对PANC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响。利用基因本体(GO)和KEGG通路富集分析,揭示miR-26b-5p靶基因的功能,并通过蛋白印迹(Western blotting)实验验证miR-26b-5p靶向的信号通路。结果:在GSE71533和GSE85589数据集,相对于正常组织和对照组血浆,miR-26b-5p在PC组织和PC患者血浆明显低表达(9.65±0.10 vs 10.18±0.07,P<0.001;0.67±0.18 vs 0.79±0.24,P=0.017)。TCGA-胰腺癌生存分析结果显示,miR-26b-5p高表达组的总体生存率明显优于低表达组(P=0.023)。KEGG分析显示,预测的251个miR-26b-5p的靶基因与MAPK信号通路有关。CCK-8实验、Transwell迁移、侵袭实验和划痕实验结果显示:miR-26b-5p抑制PANC-1细胞的增殖、迁移和侵袭。KEGG通路富集分析结果提示miR-26b-5p的靶基因参与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路。Western blotting实验证实miR-26b-5p下调MKNK2/eIF4E信号通路。结论:miR-26b-5p下调MKNK2/eIF4E信号通路,抑制PANC-1细胞增殖、侵袭,有可能作为胰腺癌诊断和治疗的新靶点。

hsa-miR-125b-5p在泡型包虫病患者血清中的表达及其信号传导途径和靶基因的筛选

目的检测hsa-miR-125b-5p在泡型包虫病患者血清中的表达并筛选与肝脏病变相关的信号传导途径及靶基因。方法利用q-PCR检测22份泡型包虫病患者血清及22份健康对照组血清中hsa-miR-125b-5p的相对表达量。用多个网络数据库资源预测hsa-miR-125b-5p的可能靶基因,然后利用Enrichr、KEGG数据库行GO、pathway分析,并筛选与肝脏病变相关的信号传导途径。通过STRING数据库预测蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并筛选与肝脏病变相关的靶基因。结果 1) hsa-miR-125b-5p在泡型包虫病患者血清中的表达明显上调(P<0.0001)。2)通过KEGG通路分析预测出与肝脏纤维病变密切相关的信号通路:肝细胞癌通路、MAPK通路;通过蛋白相互作用网确定了6个与肝脏肿瘤及纤维病变关系密切的靶基因:MAPK14、SMAD4、TP53、AKT1、EGFR、STAT3。结论 1) hsa-miR-125b-5p在泡型包虫病患者血清中的表达具有差异性;2) hsa-miR-125b-5p在泡型包虫病患者病情进展中可能是调控肝脏病变的主要基因,或许可以作为泡型包虫病生物标志物之一。

miR-26b-5p靶向RAB31对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miRNA-26b-5p对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并分析其可能作用机制。方法 膀胱癌T24细胞随机分为对照组(不转染)、miRNA-26b-5p NC组(转染miRNA-26b-5p NC)、miRNA-26b-5p mimics组(转染miRNA-26b-5p mimics)、miRNA-26b-5p inhibitor组(转染miRNA-26b-5p inhibitor)。CCK-8法、划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,RT-qPCR检测细胞中miRNA-26b-5p和Ras相关蛋白31(RAB31)mRNA表达水平,双荧光素酶实验检测miRNA-26b-5p对RAB31的靶向性,Western blot检测细胞中RAB31蛋白表达水平。结果 与对照组和miRNA-26b-5p NC组比较,miRNA-26b-5p mimics组细胞24 h、48 h、72 h吸光度值减小,24 h、48 h划痕距离增加,穿膜细胞数减少,miRNA-26b-5p表达水平升高,RAB31 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),miRNA-26b-5p inhibitor组上述指标趋势与miRNA-26b-5p mimics组相反。双荧光素酶实验结果显示,miRNA-26b-5p靶向调控RAB31表达。结论过表达miRNA-26b-5p可通过靶向抑制RAB31表达,抑制膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭。

垂体腺瘤组织miR-26b-5p表达与术后复发的关系

目的探讨微小核糖核酸-26b-5p(miR-26b-5p)与垂体腺瘤术后复发的关系。方法收集2018年1月~2020年1月手术切除的124例垂体腺瘤组织,采用qRT-PCR检测miR-26b-5p相对表达水平。术后随访2年,利用多因素logistic回归模型分析垂体腺瘤术后复发的危险因素,绘制ROC曲线分析miR-26b-5p评估垂体腺瘤术后复发的效果。结果124例中,术后复发34例,复发率为27.42%(34/124)。复发垂体腺瘤miR-26b-5p相对表达量(1.25±0.43)明显低于非复发垂体腺瘤[(1.87±0.49);P<0.001]。多因素logistic回归分析显示,miR-26b-5p低表达是术后复发的独立危险因素(OR=1.232;95%CI 1.058~3.524;P<0.001)。ROC曲线分析显示,miR-26b-5p表达水平评估垂体腺瘤术后复发的曲线下面积为0.841(95%CI 0.767~0.915;P<0.001),最佳截断值为1.518,敏感度为84.80%,特异度为81.00%。结论复发垂体腺瘤的miR-26b-5p表达水平明显下降,miR-26b-5p表达变化与术后复发密切相关,对评估垂体腺瘤术后复发有一定的价值。