hsa-mir-7702对卵巢癌肿瘤免疫微环境的调控机制

目的:当前关于卵巢癌肿瘤免疫微环境(TIME)形成的机制尚不清楚,本研究旨在探讨调控卵巢癌TIME的潜在机理。方法:本研究纳入癌症基因组图谱(TCGA)数据库294例和高通量基因表达(GEO)数据库393例卵巢癌患者信息资料,利用生物信息学方法进行差异表达基因(DEGs)筛选、相关性分析、加权基因共表达网络分析(WGCNA)、单样本基因富集分析(ssGSEA)、ESTIMATE算法分析、功能富集分析、生存分析。结果:结合疗效和生存时间计算获得细胞程序性死亡配体1(PD-L1)表达最佳阈值(即第90百分位数)。TCGA数据库卵巢癌患者被分为高、低表达组,筛选出840个DEGs和101个重要的DEGs。ssGSEA和ESTIMATE分析表明,高表达组比低表达组具有更强的免疫功能和更显著的免疫浸润。通过WGCNA和Pearson相关性分析筛选出15个关键基因和hsa-mir-7702。hsa-mir-7702表达与免疫功能和免疫浸润呈显著正相关。京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体(GO)分析显示,15个关键基因主要涉及免疫相关信号通路和免疫功能。其中6个关键基因与卵巢癌患者生存预后密切相关。以上结果通过GEO数据库验证。结论:本研究揭示hsa-mir-7702通过调控15个关键基因,影响卵巢癌TIME格局,为卵巢癌microRNA-mRNA互作网络提出新的观点。

中药单体川楝素介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制研究

目的 探究中药单体川楝素介导的hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控乳腺癌生长的分子机制。方法 选取南通第三人民医院乳腺外科于2020年4月—2022年4月收治的乳腺癌患者40例为研究对象,患者均在医院进行手术,取患者乳腺癌及癌旁组织作为实验材料,采用定量荧光聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction, qPCR)对其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平进行测定;取乳腺癌细胞株T47D细胞,加入不同浓度的川楝素,比较不同浓度川楝素对细胞增殖的抑制率;对所选乳腺癌细胞株系进行预处理,A组不进行特殊处理,B组中加入0.5μmol/L的川楝素,C组对乳腺癌细胞进行转染,敲除hsa-miR-671-5p,并向其中加入0.5μmol/L的川楝素,比较其hsa-circ-0025583及SYNGR2的表达水平,上述实验重复3次。结果 与正常癌旁组织相比较,乳腺癌组织中提取的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA在乳腺癌组织中均低表达,具有正相关性(r=0.965,P<0.05)。随着川楝素浓度的升高,乳腺癌细胞增殖的抑制率逐渐升高,且与0μmol/L浓度组比较均具有统计学意义(P<0.05)。对数据进行处理,得出乳腺癌细胞在24 h及48 h的半数抑制浓度分别为0.78μmol/L、0.49μmol/L。与A、C组相比较,B组的hsa-circ-0025583及SYNGR2 mRNA的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与A、C组相比较,B组24 h及48 h侵袭细胞数量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);但A、C组间侵袭细胞数量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 川楝素通过介导hsa-circ-0025583/hsa-miR-671-5p/SYNGR2轴调控hsa-circ-0025583及SYNGR2水平,进而影响乳腺癌细胞的增殖及侵袭能力,抑制乳腺癌细胞的生长。

Hsa-miR-650通过靶向RAC1抑制NF2阴性脑膜瘤的生长

目的本文旨在确定NF2表达阴性脑膜瘤中潜在的miRNA-mRNA轴,研究它们的靶向关系,并确定它们的生物学功能。方法从基因表达数据库(GEO)下载包含与NF2阴性脑膜瘤相关数据的GSE17792数据集。使用R软件中的limma包确定差异表达的mi RNA(De MiRNAs)。应用miRWalk 2.0数据库获取De MiRNAs的靶基因。利用相互作用基因检索工具(STRING)数据库构建蛋白质相互作用(PPI)网络,并通过Cytoscape软件确定核心基因。对筛选出的miRNA进一步验证其表达和生物学作用。结果在NF2阴性脑膜瘤肿瘤样本与蛛网膜组织对照组比较中发现了86个差异mi RNA,其中包括52个上调的mi RNAs和34个下调的miRNAs。在这些差异miRNA中鉴定出与274个靶基因相关的14个mi RNAs,并基于这些数据构建miRNA-靶基因网络。通过cyto Hubba分析显示,在PPI网络中有两个mi RNAs(hsa-miR-650和hsa-miR-623)位于前20个关键核心基因之中。进一步的定量逆转录PCR(q RT-PCR)实验证实,相对于正常脑组织,hsa-miR-650在NF2阴性脑膜瘤中的表达显著增高。下调hsa-miR-650抑制了NF2阴性脑膜瘤细胞的增殖并诱导细胞凋亡。最后,确定RAC1是hsa-miR-650的靶基因。结论Hsa-miR-650作为肿瘤促进剂,可能作为治疗NF2阴性脑膜瘤患者的治疗靶点。

hsa-miR-22-3p靶基因预测及功能分析

本研究旨在通过生物信息学分析,预测和验证hsa-miR-22-3p的靶基因,并探讨其在不同物种、组织和信号通路中的功能。方法 本研究利用了多种在线数据库和软件,如miRBase、ClustalOmega、Cytoscape3.6.1等,进行了对不同物种间的miR-22-3p保守性分析。预测hsa-miR-22-3p的靶基因,绘制Venn图,得到交集靶基因集合。对交集靶基因进行GO功能注释和KEGG Pathway富集分析,探索其在生物过程和信号通路中的作用。预测交集靶基因编码蛋白质之间的相互作用关系,构建蛋白蛋白互作网络图谱,筛选出核心基因。结果 miR-22-3p是一种在多种生物中高度保守的miRNA,与心肌细胞分化和心血管疾病密切相关。hsa-miR-22-3p的36个交集靶基因在肿瘤、淋巴和腹腔等组织中表达较高,参与了组蛋白修饰、染色质重构、低氧应答等276个生物学过程,在乳腺癌、雌激素、FoxO、破骨细胞分化、肿瘤、PI3KAkt等8个信号通路中显著富集。hsa-miR-22-3p的10个核心基因ESR1、SIRT1、PTEN、CREB1、SP1、HDAC4、MECP2、YWHAZ、MAPK14、SNAI1在多种疾病中发挥重要作用,如肿瘤、糖尿病、神经退行性疾病、炎症、衰老、心肌肥厚、心肌缺血再灌注、心房纤维化、动脉粥样硬化等。结论 本研究为hsa-miR-22-3p在肿瘤、心血管等多种疾病中的关键调控机制提供了新的理解,也为肿瘤、心血管等疾病的早期诊疗提供了新的思路。

hsa-miR-204-5p对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响

目的:探究hsa-miR-204-5p对人血管内皮细胞活力、迁移、周期及凋亡等生物学行为的影响。方法:使用人脐静脉内皮细胞株EA.hy926构建过表达hsa-miR-204-5p(hsa-miR-204-5p mimics)模型。通过细胞划痕、Transwell、CCK-8、细胞周期和凋亡率等指标评估hsa-miR-204-5p对内皮细胞功能状态的影响。接着,使用RNA测序和RT-qPCR寻找并验证hsa-miR-204-5p的下游靶基因,将RNA测序中log2FC≤−0.5、P<0.05的基因和miRWalk数据库预测的hsa-miR-204-5p的下游靶基因取交集,并进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。结果:过表达hsa-miR-204-5p可以抑制EA.hy926细胞的活力和迁移能力,降低EA.hy926细胞的凋亡率,并使聚集在S期的细胞减少。富集分析结果发现hsa-miR-204-5p下游靶基因富集在MAPK信号通路,富集在此通路的基因为MAPT、PPP3R1、PRKACB、PTPRR、MAP2K4、CACNA2D2和RPS6KA6。RT-qPCR结果显示,过表达hsa-miR-204-5p后,MAPT和MAP2K4扩增结果较好且表达为下调。其中,MAPT下降趋势最明显。结论:hsamiR-204-5p可能通过抑制MAPT/MAPK信号通路而影响内皮细胞的活力、迁移和凋亡等生物学行为。

肿瘤相关成纤维细胞上调hsa-miR-18b-5p靶向FBXL3促进前列腺癌的增殖及转移

目的探讨受肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)调控的hsa-miR-18b-5p在前列腺癌(PCa)中的表达水平及作用,并研究对其在PCa发生发展过程中的分子机制。方法利用生物信息学技术分析在PCa中高表达的miRNA,构建肿瘤相关成纤维细胞并与PCa细胞系共培养,验证CAFs对PCa细胞增殖和迁移的影响及对hsa-miR-18b-5p的调控作用;RT-qPCR验证20例患者癌组织及癌旁正常组织、前列腺正常上皮增生细胞及PCa各细胞系中hsa-miR-18b-5p的表达水平;通过脂质体法将阴性对照及hsamiR-18b-5p抑制物分别转染入PCa细胞C4-2、LNCAP中,分为NC inhibitor组和hsa-miR-18b-5p inhibitor组;采用细胞集落形成、CCK-8实验、划痕愈合、Transwell、IC_(50)实验、流式细胞术分别检测C4-2、LNCAP细胞增殖、迁移、侵袭、耐药能力、凋亡和周期;建立PCa裸鼠移植瘤模型,定期测量移植瘤的质量和体积,Kaplan-Meier生存曲线分析裸鼠生存情况;利用靶基因预测分析网站(Targetscan、Mirtarbase、miRDB、miRDIP)预测has-miR-18b-5p的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因分析验证hsa-miR-18b-5p与靶基因的靶向关系,RT-qPCR、Western blotting检测各组细胞靶基因的表达水平。结果生物信息学分析结果显示,在PCa中高表达的miRNA有17个,结合差异表达程度以及相关文献筛选出拟研究的基因:miR-148a、miR-17、miR-18b-5p、miR-770、miR-297-3p。CAFs与PCa细胞系共培养后hsa-miR-18b-5p的表达水平升高(P<0.01),且促进PCa细胞的增殖与迁移(P<0.01),敲除has-miR-18b-5p可抵消CAFs对PCa细胞增殖及迁移的影响,确定has-miR-18b-5p为研究基因。与正常前列腺上皮细胞或肿瘤旁组织相比,PCa细胞或肿瘤组织中hsa-miR-18b-5p的表达升高(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制C4-2、LNCAP细胞的增殖、迁移、侵袭以及耐药(P<0.05);敲除hsa-miR-18b-5p可抑制裸鼠移植瘤质量和体积的增长,增加裸鼠的生存时间(P<0.05)。靶基因预测分析网站显示,FBXL3是hsa-miR-18b-5p的一个潜在作用靶点,双荧光素酶报告基因证实has-miR-18b-5p与FBXL3基因间存在结合位点,且敲除hsa-miR-18b-5p可增加C4-2、LNCAP细胞中FBXL3的蛋白表达(P<0.05)。结论CAFs上调前列腺癌细胞hsa-miR-18b-5p的表达水平,后者可能通过靶向调控FBXL3基因的表达促进PCa细胞的增殖和转移。

hsa-miR-449a靶基因预测及生物信息学分析

目的:利用多种生物信息学数据库对hsa-miR-449a的靶基因及其生物学功能进行预测,为将来深入探索hsa-miR-449a的生物学功能及其对相关疾病的作用机制提供理论依据。方法:分析hsa-miR-449a在不同物种间的保守性及其在不同疾病中的表达情况;运用4个常用的在线数据库(mirDIP、TargetScan、miRDB、miRWalk)预测hsa-miR-449a的靶基因并取其交集,随后对其交集靶基因进行PPI网络构建、GO分析和KEGG Pathway分析。结果:hsa-miR-449a序列在10个物种间高度保守,并且在乳腺癌、卵巢癌、肺癌、子宫癌等疾病中表达明显增高;4个miRNA靶基因预测数据库取交集后共得到386个靶基因,它们广泛存在于染色质、突触、核浆、胞质等细胞组分中,主要参与调控RNA聚合酶Ⅱ启动子转录、细胞周期、信号转导等生物学过程,涉及P53、TGF-β、HIF-1、MAPK等信号通路,以及细胞衰老、胰岛素的分泌、甲状旁腺激素和醛固酮合成与分泌及神经系统的发育、肿瘤等疾病相关通路。结论:hsa-miR-449a广泛参与了细胞增殖与衰老等生命活动,以及癌症、心血管及神经系统疾病的发生发展过程。

hsa-miR-181a-5p靶基因预测及生物信息学分析

目的对hsa-miR-181a-5p进行系统的生物信息学分析,预测hsa-miR-181a-5p的靶基因、基因功能及信号通路,并对其进行生物学功能注释。方法利用数据库对hsa-miR-181a-5p基因定位,分析其序列保守性和在人类组织器官中的表达情况;利用数据库进行靶基因预测分析;并将预测交集靶基因进行GO功能分析及KEGG通路富集分析和蛋白间相互作用(PPI)网络分析;最后利用A549细胞进行hsa-miR-181a-5p转染实验,进行转录组测序同步验证生物信息学预测结果。结果发现基因定位于人类基因组chr1、chr9染色体,成熟序列在物种间具有高度保守性。3个数据库交集靶基因有483个,包含PTEN、MAPK8、AKT3等基因,其分布在胞浆等细胞组分,执行蛋白质结合等生物功能,并参与信号转导等生物学过程。靶基因富集于MAPK、PI3K-Akt、胰岛素抵抗、癌症中的miRNA等信号通路,其编码的蛋白间形成复杂网络图。实验后转录组测序结果验证了生信分析的准确性,对预测及富集结果提供了有力支撑。结论hsa-miR-181a-5p在多种生物学过程发挥重要作用,尤其是在神经系统疾病、血液免疫系统疾病以及癌症的发生发展中其将成为相关疾病发生机制和防治研究的新靶点。

萘醌类化合物对HL-7702细胞LDH释放率以及线粒体膜电位的影响

测定了6种萘醌类化合物对正常人肝细胞HL-7702乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)释放率以及线粒体膜电位的影响.研究发现,LDH释放率随着染毒浓度的增大而增大,而线粒体膜电位却减小,呈现剂量-效应关系.其中,2-羟基-1,4-萘醌引起的LDH释放率变化高于其它4种化合物,而阿托伐醌引起的线粒体膜电位下降最严重,这可能是由于阿托伐醌是高脂溶性的化合物,更容易到达细胞靶点从而引起了严重的细胞凋亡所致.脂水分配系数lgP、分子直径D以及分子拓扑学指数TIndex可能是影响该类化合物对HL-7702致毒作用的主要因素.该类化合物还可能通过疏水作用或者π-π相互作用影响生物大分子,从而产生毒性作用.

hsa-miR-126和hsa-miR-518b在食管鳞癌中的表达

目的探讨食管鳞癌及正常组织微小RNA(miRNA)分子表达谱的差异,寻找并验证具有差异表达的miRNA。方法随机选3例首次诊治食管鳞癌患者的手术切除标本,取癌组织及正常粘膜。采用荧光探针杂交芯片扫描技术,获得食管鳞癌miRNA表达谱,并对表达谱的可靠性进行荧光实时定量RT-PCR验证。另取15例首次诊治食管鳞癌患者手术切除标本的癌组织及正常粘膜,对其中具有表达差异的hsa-miR-126和hsa-miR-518b进行进一步验证。结果得到了食管鳞癌及正常组织的MicroRNA表达谱,分析得到表达变化且具有统计学意义(单侧t检验,P<0.05)的miRNA11个,其中上调1个,下调10个。在另外15对验证样本中,hsa-miR-126上调10例(配对t检验,P<0.05),hsa-miR-518b下调12例(配对t检验,P<0.05)。结论 hsa-miR-126和hsa-miR-518b在食管鳞癌组织和正常组织中存在差异表达,hsa-miR-126在食管癌组织中上调,hsa-miR-518b下调。

OA对人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402增殖的影响和对细胞凋亡的诱导作用研究

以人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402为研究对象,通过MTT法、细胞外部形态观察、Annexin V-FITC&PI双染法及TUNEL法等方法,研究了腹泻性贝毒的主要组分大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)对其增殖的影响及对细胞凋亡的诱导作用。结果表明:OA对人两株细胞的增殖均有显著的抑制作用,24 h IC50分别为65ng/mL和60 ng/mL,且这种抑制作用呈剂量依赖性。OA导致两株细胞的形态均发生明显变化:细胞变圆,脱壁,细胞膜形成泡状突起,最终形成膜包裹的凋亡小体。Annexin V-FITC和PI双染法及TUNEL法检测均发现:OA能够诱导两株细胞发生不同程度的凋亡,且凋亡细胞的比例与OA的浓度相关。以上结果表明:OA能够通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而对人肝细胞和肝癌细胞造成影响,且这种影响的程度与OA的浓度和作用时间密切相关。

甘氨鹅脱氧胆酸盐对人正常肝细胞HL-7702的影响

目的观察甘氨鹅脱氧胆酸盐(glycochenodeoxcholate,GCDC)对人正常肝细胞HL-7702凋亡诱导作用,探讨GCDC诱导HL-7702细胞凋亡的机制。方法终浓度分别为50、100、150、200、250μmol/L的GCDC处理HL-7702细胞4、8、12、24h,光学显微镜镜下观察细胞形态学改变、用Am-Blue细胞活性检测和乳酸脱氢酶活性的测定及AnnexinV-FITC/PI双染色法检测GCDC对HL-7702细胞凋亡的影响,用荧光指示剂Fluo-3/AM测定HL-7702细胞内钙离子浓度。结果 (1)终浓度为150μmol/L的GCDC处理HL-7702细胞24h后,细胞出现典型的凋亡细胞形态学改变,包括核固缩、核碎裂和凋亡小体形成等。(2)Am-Blue吸光光度法、GENMED乳酸脱氢酶(LDH)总活性比色法及AnnexinV-FITC/PI双染色法定量检测结果均显示,GCDC均可诱导HL-7702细胞凋亡且呈剂量及时间依赖性。(3)GCDC能使HL-7702细胞内钙离子浓度增加且具有浓度和时间依赖性。结论 GCDC可能通过增加HL-7702细胞内钙离子浓度诱导人正常肝细胞HL-7702凋亡,其作用具有浓度和时间依赖性。

纳米二氧化硅颗粒对HL-7702细胞黏附和迁移能力的影响

目的:探讨纳米二氧化硅颗粒对HL-7702细胞黏附迁移能力的影响,为其安全性评价提供实验依据。方法:体外培养的人正常肝细胞株HL-7702随机分为对照组和纳米二氧化硅颗粒暴露组,暴露浓度分别为12.5、25.0、50.0和100.0mg·L-1。采用透射电子显微镜(TEM)及动态光散射粒度分析仪(DLS)对纳米二氧化硅颗粒进行观察。细胞处理24h后,细胞黏附实验检测细胞黏附能力;划痕修复实验检测细胞迁移能力,TEM观察细胞对纳米二氧化硅颗粒的摄取及颗粒在细胞内的分布。结果:TEM观察,纳米二氧化硅呈圆形,颗粒大小均匀一致,分散性良好,颗粒平均粒径为(67.42±5.69)nm。DLS法检测,纳米二氧化硅颗粒在无血清RPMI-1640培养液中水合粒径为(134.13±2.78)nm,而在含1%、5%和10%血清的RPMI-1640培养液中的水合粒径明显增大。细胞黏附实验及划痕修复实验,与对照组比较,在无毒剂量下,纳米二氧化硅颗粒暴露组细胞的相对黏附率和损伤修复率明显下调(P<0.05),且随着作用浓度的升高下调作用愈加明显。与对照组比较,在无毒剂量作用下,纳米二氧化硅暴露组大量的纳米二氧化硅颗粒已被细胞摄取,颗粒主要以成簇的形式分布于内吞小泡中或散在分布于胞质中,可见细胞膜凹陷、包裹吞噬纳米颗粒的过程。结论:纳米二氧化硅颗粒能够抑制HL-7702细胞的黏附和迁移能力,并呈一定的浓度依赖效应。

草苁蓉多糖对过氧化氢致HL-7702细胞损伤的保护作用

采用草苁蓉多糖(Boschniakia rossica polysaccharides,BRP)对HL-7702细胞进行预保护,再用H 2O 2处理HL-7702细胞构建肝细胞氧化损伤模型。CCK-8法测定HL-7702细胞存活率,微板法测定HL-7702细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,硫代巴比妥酸法检测HL-7702细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)的生成,Hoechst33342染色法及原位末端标记法观察HL-7702细胞的凋亡情况,蛋白印迹技术检测HL-7702细胞Caspase 3活性片段(C-casp3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶活性片段[cleaved poly(ADP-ribose)polymerase,C-PARP]、细胞色素c(cytochrome c,Cyto c)、p53、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、Bcl-2同源拮抗剂/杀伤剂(Bcl-2 homologous antagonist/killer,Bak)蛋白表达以及丝裂原活化蛋白激酶、核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)激活情况。结果表明,300μmol/LH 2O 2处理HL-7702细胞6 h可使细胞存活率降低58%(P<0.05),表明H 2O 2能够诱导HL-7702细胞损伤。而50和100 mg/L BRP能够减缓H 2O 2导致的HL-7702细胞损伤。与模型组比较,BRP高剂量组HL-7702细胞存活率增高30.8%(P<0.05),LDH释放率降低32.8%(P<0.05),细胞MDA生成降低81.0%(P<0.05)。此外,与模型组比较,BRP组HL-7702细胞凋亡明显减少,胞浆Cyto c水平下降(P<0.05),细胞p53、Bak、Bax蛋白表达下调(P<0.05),Bcl-2蛋白表达上调(P<0.05),C-casp3、C-PARP水平降低(P<0.05),磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)以及核NF-κB水平下降(P<0.05)。提示,BRP能够有效保护H 2O 2诱导的HL-7702细胞损伤,并抑制HL-7702细胞凋亡,此作用可能与BRP对ERK、JNK、NF-κB通路的调控有关。

大田软海绵酸对HL-7702肝细胞毒性效应的研究

[目的]探讨大田软海绵酸(okadaic acid,OA)对HL-7702肝细胞的毒性效应。[方法]通过细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)、细胞形态学观察及流式细胞术等方法,从细胞增殖、细胞凋亡等方面探讨OA对HL-7702肝细胞的毒性效应。[结果]与溶剂对照组相比,OA对HL-7702肝细胞增殖有明显的抑制作用,细胞增殖抑制率随着OA浓度的增加而增加,同时随着染毒时间的延长,细胞增殖抑制率也明显增加;与对照组相比,作用HL-7702肝细胞24h后,5nmol/LOA可明显诱导细胞发生凋亡。[结论]OA可以通过抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡的方式对HL-7702肝细胞产生毒性效应,且呈现剂量-效应关系。

苦参碱和氧化苦参碱致HL7702细胞毒性研究

目的：探讨苦参碱和氧化苦参碱在体外对人正常肝细胞（HL7702）的影响。方法：①采用MTT法检测苦参碱和氧化苦参碱对肝细胞活力的影响;②采用光镜对给药后的细胞形态进行观察;③检测给予苦参碱和氧化苦参碱后,肝细胞培养上清液中的肝功能指标（ALT、AST、ALP、LDH）。结果：①MTT法显示,2.5~5mg/mL的苦参碱对HL7702细胞有明显的抑制作用（P〈0.01）,5mg/mL的氧化苦参碱能够显著性降低肝细胞活力（P〈0.05）;②光镜结果显示,给予苦参碱和氧化苦参碱后,细胞出现皱缩,变圆,体积变小,亮度增加,且药物浓度越大,呈现此状态的数目越多,苦参碱对HL7702细胞形态的影响大于氧化苦参碱;③5mg/mL的苦参碱和氧化苦参碱均能明显升高细胞上清液中的AST、ALP、LDH水平（P〈0.01或P〈0.05）,相同剂量苦参碱的上清液中AST、ALP、LDH水平的升高程度大于氧化苦参碱。结论：苦参碱和氧化苦参碱对肝脏可能具有毒性作用,且苦参碱的肝毒性作用大于氧化苦参碱。

hsa-miR-125a-5p促进非小细胞肺癌细胞侵袭

背景与目的microRNAs(miRNAs)是小的非编码RNA,它们通过与靶mRNA不完全互补连接的方式转录后调控靶基因的表达。尽管一些失常的miRNA调节机制在人许多恶性肿瘤中被发现,但是,hsa-miR-125a-5p在肺癌细胞中的表达及功能还尚不清楚。本研究探讨了hsa-miR-125a-5p在非小细胞肺癌细胞中的表达及其与肺癌细胞侵袭的关系。方法应用real-timePCR的方法检测了hsa-miR-125a-5p在6种肺癌细胞系中的表达情况,并在A549细胞中分别转染正义的hsa-miR-125a-5p2’-O-甲基寡核苷酸24h、36h、48h、60h和72h后检测hsa-miR-125a-5p的表达情况。同时应用transwell小室观察上调hsa-miR-125a-5p后,A549细胞侵袭能力的变化。结果hsa-miR-125a-5p在6种肺癌细胞系中低表达,以LH7、NCI-H460、SPC-A-1和A549细胞最为明显。在A549细胞中,转染正义的hsa-miR-125a-5p2’-O-甲基寡核苷酸36h后,hsa-miR-125a-5p表达最高,并进一步发现,上调hsa-miR-125a-5p后A549和NCI-H460细胞侵袭能力增强。结论hsa-miR-125a-5p在肺癌细胞中低表达,但上调hsa-miR-125a-5p能够促进A549和NCI-H460细胞侵袭。

葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶siRNA对7702肝细胞增殖的影响及机制研究

目的探讨糖鞘脂合成代谢在肝细胞增殖中的可能作用机制。方法体外培养肝细胞株7702细胞,利用UDP-葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶(UGCG)si RNA转染肝细胞。采用MTT法检测细胞增殖,采用实时荧光定量PCR法检测Bcl-2、Bax和Caspase 3基因水平,采用Western blot法检测肝细胞Caspase 3蛋白表达情况。结果 UGCG si RNA干扰组细胞糖化神经酰胺合成酶基因水平比对照组明显下调(P<0.05);干扰糖化神经酰胺合成酶基因表达后,转染组细胞Bcl-2 m RNA水平显著下降(P<0.05),Bax m RNA水平显著升高,Caspase 3 m RNA及其蛋白表达水平均上调(P值均<0.05)。结论糖化神经酰胺合成酶的缺乏引起的鞘脂代谢改变可能参与肝细胞的增殖的过程中,这可能与BCL2/BAX调节的细胞信号通路有关。

天麻素通过激活AMPK通路减少油酸诱导的HL-7702细胞脂肪蓄积

目的研究天麻素(GSTD)对油酸(OA)诱导的HL-7702细胞脂肪蓄积的抑制作用,并探讨其可能的细胞信号通路。方法以噻唑蓝(MTT)法测定GSTD对HL-7702细胞存活率的影响;以1 mmol·L-1的OA处理24 h诱导细胞脂肪变性,同时加入不同浓度的GSTD,油红O(ORO)染色观察细胞脂肪蓄积情况并测定细胞内三酰甘油(TG)含量;以Western blot检测GSTD处理后细胞中AMPKα和ACC的磷酸化水平;以compound C处理细胞,研究其对GSTD药效的影响。结果 GSTD浓度≤3 386.5μmol·L-1时对HL-7702细胞没有明显毒性。OA处理24 h后细胞中出现大量脂滴蓄积,TG含量明显增加,但同时加入浓度为169.3或338.7μmol·L-1的GSTD可明显抑制HL-7702细胞的脂肪蓄积,并使TG含量分别平均下降35%和43.6%(与单加OA的细胞比较P<0.01)。GSTD处理后能时间和浓度依赖性地增加细胞中的p-AMPKα和p-ACC水平,compound C能完全阻断GSTD对AMPK通路的激活作用以及减少肝细胞TG蓄积的作用。结论 GSTD可明显抑制OA诱导的HL-7702细胞脂肪蓄积,降低TG含量,其作用依赖于细胞中AMPK通路的激活。

Hsa-miR-93在肝癌中的作用机制研究

目的观察hsa-miR-93对肝癌细胞生长和细胞周期的影响,以分析其在肝癌中的作用机制。方法用real time RT-PCR法分析hsa-miR-93在人肝癌和癌旁肝组织的表达情况。此后构建hsa-miR-93过表达载体,同时合成二甲氧修饰的hsa-miR-93的反义核苷酸序列,二者转染肝癌细胞株观察它们对肝癌细胞生长及细胞周期的影响,分别以空载体和无关寡核苷酸序列为对照。转染后CCK-8法检测肝癌细胞生长情况,通过流式细胞仪分析细胞周期。结果hsa-miR-93在肝癌组织中表达明显高于癌旁肝组织。hsa-miR-93过表达载体可以促进肝癌细胞生长,促进细胞周期的G1/S期转换,而hsa-miR-93反义序列抑制肝癌细胞生长,使肝癌细胞阻滞于G1期(P<0.05)。结论hsa-miR-93通过促进细胞周期的G1/S期转换而促进肝癌细胞生长,提示hsa-miR-93可能是肝癌的发病机制中一个重要分子。