Hsa_circ_0000128通过miR-623/EIF4A1轴促进人胃腺癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的目前对于hsa_circ_0000128是否通过miR-623/EIF4A1轴通路参与胃腺癌的发生过程尚不清楚。文中旨在研究环状RNA hsa_circ_0000128(Circ_01607)在胃腺癌组织、细胞株的表达以及对胃癌细胞的增殖、迁移、凋亡的影响。方法收集2019年9月至2020年8月江苏大学附属人民医院病理科的40份胃腺癌及癌旁组织标本。进行高通量测序筛选出表达明显提高的环状RNA hsa_circ_0000128;通过circBank、TargetScan等数据库预测下游miR-623。采用RT-PCR对40例临床胃腺癌组织、癌旁组织、胃癌细胞株(MGC-803,HGC-27,BGC-823)以及正常人胃粘膜上皮细胞株GES-1中hsa_circ_0000128的表达进行测定及验证结果。挑选出表达量差异最大的两组进行后续实验。将HGC-27、MGC-803细胞株分别接种于两块细胞培养板中,培养板中设置相应的circRNA组别:Si-NC组(Si-NC转染胃腺癌细胞)、Si-circ组(si-hsa_circ_0000128转染胃腺癌细胞)、Si-EIF4A1组(Si-EIF4A1转染胃腺癌细胞)、miR-NC组(miR-623-NC转染胃腺癌细胞)、miR-mimics组(miR-623-mimics转染胃腺癌细胞)、miR-inh组(miR-623-inhibitors转染胃腺癌细胞)、Si-circ+miR-NC组(Si-circ、miR-NC转染胃腺癌细胞)、Si-circ+miR-inh组(Si-circ、miR-inh转染胃腺癌细胞)。采用克隆形成实验测定各组细胞增殖能力;使用Transwell实验测定各组胃癌细胞的迁移能力;蛋白免疫印迹实验测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3、bcl-2和Bax的表达水平验证细胞凋亡情况。验证miR-623在组织及细胞中的表达情况,通过荧光素酶实验验证结合靶点信息,加入miRNA对应干扰并将其分组,通过细胞功能学实验,蛋白印迹实验比较胃癌细胞株各组细胞功能的变化。通过PCR及蛋白免疫印迹实验验证各组真核翻译起始因子4A1(EIF4A1)的相关表达水平与miR-623含量的关系。结果hsa_circ_0000128在胃癌组织及细胞株中较癌旁组织及正常胃黏膜上皮细胞中呈高表达状态。SI-circ组hsa_circ_0000128的相对表达量明显低于SI-NC组(P<0.05)。SI-circ+miR-inh组miR-623含量较SI-circ+miR-NC组下降(P<0.05)。SI-circ组Cleaved-caspase-3、Bax相对表达量较SI-NC组增加(P<0.05),Bcl-2相对表达量下降(P<0.05)。HGC-27和MGC-803细胞中Si-circ组的克隆形成率[(11.57±1.724)%、(12.47±2.401)%]明显低于Si-NC组[(32.53±3.250)%、(25.07±1.557)%],差异有统计学意义(P<0.05)。加入miR-623 inhibitor后可逆转抑制现象,SI-circ+miR-NC组克隆形成率[(10.43±1.305)%、(12.50±1.400)%]明显低于Si-circ+miR-inh组[(25.03±1.665)%、(19.63±1.955)%],差异具有统计学意义(P<0.01)。Transwell实验表明,SI-circ组较SI-NC组迁移明显降低(P<0.05)。EIF4A1在40对胃癌组织及胃癌细胞株HGC-27、MGC-803表达较癌旁组织、正常胃黏膜上皮细胞GES-1中呈高表达,差异具有统计学意义(P<0.01)。蛋白免疫印迹实验显示当敲减hsa_circ_0000128时,EIF4A1的含量下降;当加入miR-623 inhibitor逆转敲减circRNA情况时,EIF4A1的表达含量上升(P<0.01)。结论hsa_circ_0000128在胃癌细胞株、组织中呈高表达,hsa_circ_0000128作为miR-623的海绵上调EIF4A1促进胃癌细胞的生物学功能;含量下调后可显著抑制胃癌细胞增殖、迁移并诱导其凋亡。

干扰hsa_circ_0013958/miR-637对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨环状RNA(circularRNA,circRNA)hsa_circ_0013958对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Humankeloid fibroblast,HKF)增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法:将人瘢痕疙瘩成纤维细胞分为si-NC组、si-hsa_circ_0013958组、miR-NC组、miR-637组、si-hsa_circ_0013958+anti-miR-NC组和si-hsa_circ_0013958+anti-miR-637组。实时荧光定量PCR(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)试剂盒检测hsa_circ_0013958、miR-637表达;四甲基偶氮唑盐(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测细胞存活率;平板克隆实验检测细胞集落形成数;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测hsa_circ_0013958和miR-637的靶向关系。结果:瘢痕疙瘩组织中hsa_circ_0013958表达水平较正常皮肤组织升高,miR-637表达水平降低(P<0.05)。干扰hsa_circ_0013958表达或过表达miR-637后,HKF细胞存活率、集落形成数以及迁移、侵袭细胞数均降低(P<0.05)。hsa_circ_0013958和miR-637有靶向调控关系;抑制miR-637表达逆转了干扰hsa_circ_0013958对HKF增殖、迁移侵袭的影响。结论:干扰hsa_circ_0013958通过调控miR-637抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭。

血浆外泌体hsa_circ_0052513在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的筛选非小细胞肺癌(NSCLC)血浆外泌体中差异表达的circRNA,并验证其作为NSCLC的诊断价值。方法对6例NSCLC患者和6例健康者的血浆外泌体进行circRNA测序分析。qRT-PCR法验证60例NSCLC患者和60例健康对照样本外泌体中hsa_circ_0052513的表达水平。qRT-PCR检测NSCLC患者术前与术后血浆外泌体中hsa_circ_0052513的表达水平。统计分析NSCLC患者血浆外泌体hsa_circ_0052513的表达量与临床病例资料的相关性。结果测序结果显示hsa_circ_0052513在NSCLC患者血浆外泌体中的表达水平高于健康对照。qRT-PCR结果确认了测序结果,而在NSCLC患者手术切除肿瘤后表达降低(P<0.05)。NSCLC患者血浆外泌体hsa_circ_0052513的高表达与NSCLC的肿瘤大小、远端转移和TNM分期相关(均P<0.05)。血浆外泌体hsa_circ_0052513诊断NSCLC患者曲线下面积(AUC)为0.7904(P<0.0001)。结论Hsa_circ_0052513在NSCLC患者血浆外泌体中高表达,且和肿瘤大小、转移以及TNM分期相关,有望成为NSCLC新的诊断标志物。

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

Circular RNA hsa_circ_0078767通过miR-330-3p/p53轴调控肺癌细胞铁死亡

目的:探讨Circular RNAs(hsa_circ_0078767)通过调控miR-330-3p/p53信号通路,对肺癌细胞铁死亡的影响。方法:用qRT-PCR法检测四种人类肺癌细胞系(HCC827、A-549、Calu-3和H1975)和一种正常肺上皮细胞系BEAS-2B中hsa_circ_0078767的表达;转染hsa_circ_0078767的过表达载体(oe-circ)于A-549和H1975细胞内;RNA FISH确定hsa_circ_0078767的胞质定位;CCK-8、集落形成、EdU染色、FACS分析和流式细胞仪分别检测A-549和H1975细胞的活性、增殖、凋亡和ROS情况;铁测定试剂盒检测细胞铁含量;Western blot检测细胞中miR-330-3p、cleaved Caspase3和cleaved PARP的表达;RNA pull-down实验分析hsa_circ_0078767与miR-330-3p的结合位点的结合效率;RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测hsa_circ_0078767和miR-330-3p的mRNA水平;双荧光素酶报告基因实验检测hsa_circ_0078767与miR-330-3p的靶向关系;皮下注射A-549-vector和A549-oe-circ细胞(1×10~6个)到六周大的雄性裸鼠腹部,建立活体异种移植动物模型。结果:我们发现hsa_circ_0078767在肺癌细胞中低表达以及hsa_circ_0078767在肺癌恶性发展过程中对铁死亡的调控功能。在过表达hsa_circ_0078767的肺癌细胞中发现铁、Fe2+和ROS水平升高。铁死亡诱导剂erastin会降低细胞活力,而过表达hsa_circ_0078767会加强erastin对肺癌细胞的抑制作用。在机制方面,hsa_circ_0078767可通过海绵吸附miR-330-3p来影响p53的表达。上调miR-330-3p及敲降p53可逆转hsa_circ_0078767过表达对肺癌细胞的作用。结论:hsa_circ_0078767可能通过miR-330-3p/p53轴促进肺癌细胞铁死亡从而抑制肺癌进展。

环状RNA hsa_circ_0006156在系统性红斑狼疮患者外周血中的表达及其对Raji细胞增殖、凋亡的影响

目的:研究hsa_circ_0006156对Raji细胞增殖、凋亡的影响及其在系统性红斑狼疮(SLE)发生、发展中的作用。方法:收集广西医科大学第一附属医院皮肤性病科2021年9月至2023年9月收治的55例SLE患者(SLE组),并以40例健康对照者作为对照组(HC组),分离出外周血单个核细胞(PBMC)及CD20+B淋巴细胞,使用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测hsa_circ_0006156表达水平;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析hsa_circ_0006156的诊断效能。以Raji细胞为研究对象,使用慢病毒构建hsa_circ_0006156过表达模型,将细胞分为hsa_circ_0006156过表达组(OE组)、转染空病毒载体的阴性对照组(NC组)以及空白对照组(control组)。利用CCK8法检测0 h、6 h、12 h、18 h、24 h、30 h、36 h细胞450 nm吸光度,计算OE组和NC组增殖率。Western blotting实验检测各组Bcl-2、cleaved caspase-3凋亡蛋白表达水平。结果:与HC组比较,SLE组PBMC和CD20+B淋巴细胞中hsa_circ_0006156表达量均明显降低(P<0.001)。ROC曲线分析显示,hsa_circ_0006156区分SLE和HC的ROC曲线下面积(AUC)为0.787 3(95%CI:0.697 5~0.877;P<0.001),敏感度为97.5%,特异度为50.9%,对SLE诊断Cut-off值为<0.652。hsa_circ_0006156表达量在无活动或轻度活动与中重度活动患者之间存在显著差异(P=0.0148)。CCK8实验结果显示,在36 h时,OE组Raji细胞增殖较NC组受到明显抑制(P<0.001)。Western blotting检测结果表明,与NC组和control组比较,OE组Bcl-2蛋白表达水平降低,而cleaved caspase-3蛋白表达水平升高(均P<0.05)。结论:hsa_circ_0006156对SLE具有一定的诊断效能。hsa_circ_0006156可能是通过调节B细胞的增殖、凋亡影响SLE的发生、发展。

胃癌患者血浆hsa_circ_0001588水平与TLR4和T淋巴细胞亚群相关性

目的 探究胃癌患者血浆中hsa_circ_0001588水平,并分析其血浆水平与患者临床特征、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)、T淋巴细胞亚群的关系。方法 选取2021年3月至2022年5月于我院治疗的胃癌患者124例为研究组,另选取接受胃镜检查确诊为浅表性胃炎的患者130例作为良性组以及健康体检者130例作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应、Wmini5146流式细胞仪和双抗体夹心ELISA法检测受试者血浆hsa_circ_0001588水平、TLR4水平和CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平。分析血浆hsa_circ_0001588、TLR4、T淋巴细胞对于胃癌的诊断效能以及血浆hsa_circ_0001588水平与TLR4和T淋巴细胞水平的关系。结果 研究组血浆hsa_circ_0001588、TLR4和CD8^(+)表达水平高于良性组和对照组,CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平低于良性组和对照组(P<0.05),且研究组患者术后hsa_circ_0001588水平下降。临床分期越高、浸润深度越深、分化程度越低,发生远端转移的患者血浆hsa_circ_0001588水平越高(P<0.05)。血浆hsa_circ_0001588、TLR4和T淋巴细胞对于胃癌均有较好的诊断效能,其联合诊断的整体效能最高。血浆hsa_circ_0001588高表达患者CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)表达较低,TLR4和CD8^(+)表达较高(P<0.05),其血浆hsa_circ_0001588水平与CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)表达呈负相关性,与TLR4和CD8^(+)呈正相关性。结论 胃癌患者血浆hsa_circ_0001588水平偏高,且与CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平呈负相关性,与TLR4、CD8^(+)呈正相关性。

hsa_circ_0006156在胃癌组织和细胞中的表达及对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的探究hsa_circ_0006156在胃癌组织和细胞中的表达及其对胃癌细胞迁移、侵袭和增殖能力的影响。方法运用RT-qPCR检测并比较胃癌组织与对应癌旁组织、正常胃上皮细胞(gastric epithclial cells-1,GES-1)与三种胃癌细胞(MKN-28、AGS、SGC-7901)中hsa_circ_0006156的表达水平。应用相关性分析验证胃癌组织的hsa_circ_0006156表达水平与临床特征的关系。应用CCK-8、克隆形成实验、划痕愈合实验、Transwell侵袭实验分别验证沉默或上调hsa_circ_0006156表达对胃癌细胞活性、克隆形成能力、迁移及侵袭能力的影响。结果与癌旁组织相比,胃癌组织中hsa_circ_0006156相对表达量降低(P<0.05),胃癌细胞MKN-28、SGC-7901中hsa_circ_0006156的相对表达量低于GES-1细胞(P<0.001)。hsa_circ_0006156表达下调与TNM分期和CA50的表达相关(P<0.05);与性别、年龄、肿瘤直径、淋巴结转移、CA199、CA242、CA724无相关性(P>0.05)。沉默hsa_circ_0006156,胃癌细胞的活性和克隆形成能力明显提高,迁移距离显著减小,侵袭能力也明显下降。而上调表达hsa_circ_0006156,胃癌细胞的活性和克隆形成能力显著下降,迁移距离明显升高,侵袭能力也明显升高。结论hsa_circ_0006156在胃癌组织和细胞中表达量均下降,hsa_circ_0006156抑制胃癌细胞的活力、增殖能力,但促进其迁移和侵袭能力。

原发性干燥综合征患者外周血环状RNA hsa_circ_0045800的表达研究

目的探讨原发性干燥综合征(pSS)患者外周血hsa_circ_0045800的表达及其在pSS诊断中的价值。方法采用微阵列芯片技术测序筛查4例pSS患者和4例对照者的外周血差异circRNAs;并以RT-qPCR验证50例pSS患者和50例对照者外周血的hsa_circ_0045800的表达差异;通过受试者工作特征(ROC)曲线评估外周血中hsa_circ_0045800表达水平对pSS的诊断价值。结果pSS患者外周血中hsa_circ_0045800表达水平高于对照者,pSS患者治疗后hsa_circ_0045800表达水平低于治疗前(P<0.05);pSS患者hsa_circ_0045800的表达水平与病情评估指数(ESSDAI)、抗核抗体(ANA)滴度、血沉(ESR)均呈正相关(P<0.05);ROC曲线显示:血清hsa_circ_0045800表达水平曲线下面积(AUC)为0.927,敏感度为74%,特异度为94%,对p SS的诊断效能较好。结论hsa_circ_0045800可能与pSS的发生、发展有关,并且有潜力成为pSS诊断、评估病情严重程度及预后的生物标志物。

血清外泌体hsa_circ_0008035在胃癌前病变和早期胃癌中的临床意义

目的 探讨血清外泌体hsa_circ_0008035在早期胃癌(GC)及癌前病变中的临床意义。方法 2012年1月~2017年12月于我院就诊的GC病人90例(GC组)、癌前病变病人外周血样本89例(Pre组),同期纳入45例健康志愿者外周血样本作为对照(NC组),实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清外泌体hsa_circ_0008035水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清外泌体hsa_circ_0008035的诊断价值。通过内镜检查随访Pre组病人疾病进展情况。基于circBase和RegRNA 2.0靶点预测软件获得hsa_circ_0008035潜在的microRNA(miRNA)靶点。结果 与NC组比较,GC组和Pre组病人血清外泌体hsa_circ_0008035表达水平显著上调,其中GC组升高最为明显(P<0.05)。与传统肿瘤标志物检测比较,外泌体hsa_circ_0008035诊断GC及Pre的曲线下面积(AUC)、敏感性、准确性均显著提高,假阴性率和假阳性率显著降低(P<0.05)。在区分早期GC和Pre病人时的AUC为0.681,灵敏度和特异度为66.35%和83.31%。Pre组病人中位随访5.3年,21例病人发生疾病进展,这部分病人诊断为疾病进展时血清外泌体hsa_circ_0008035表达水平较基线值显著上调(P<0.001),基线时血清外泌体hsa_circ_0008035表达水平也较未发生疾病进展的病人普遍上调(P=0.005)。对于GC组病人,中晚期GC(TNM分期Ⅲ~Ⅳ期)病人血清外泌体hsa_circ_0008035表达水平高于早期GC病人,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa_circ_0008035靶通路预测结果显示,hsa_circ_0008035含有hsa-miR-599、hsa-miR-17-3p、hsa-miR-1256和hsa-miR-375种子序列及相关的常见下游靶点。结论 血清外泌体hsa_circ_0008035表达在早期GC及癌前病变病人中普遍上调,对早期GC、胃癌前病变的诊断和疾病进展的评估均有一定的临床意义。

hsa_circ_0010697在胃癌发生、发展和转移中的作用及机制

目的 探讨hsa_circ_0010697在胃癌中的表达水平及发生、发展过程中可能的分子机制。方法 从美国生物技术信息中心数据库中查询hsa_circ_0010697基因序列,合成慢病毒载体;制备胃癌细胞SGC-7901。设置3组。对照组:胃癌细胞SGC-7901,未转染慢病毒载体。shRNA-NC组:空载体(慢病毒载体)转染胃癌细胞SGC-7901。hsa_circ_0010697-shRNA组:hsa_circ_0010697慢病毒载体转染胃癌细胞SGC-7901。采用qRT-PCR检测3组hsa_circ_0010697基因在胃癌细胞SGC-7901中的表达,采用CCK-8法检测3组细胞增殖活性[以波长为450 nm处的吸光度(A_(450))值表示],Tranwell实验检测3组细胞迁移和侵袭能力(穿透基质膜到达下室的细胞数量),Western blot检测3组细胞RAS-ERK信号通路上的RAS、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、E2F转录因子1(E2F1)的蛋白质相对表达量。取6周龄雄性SPF级裸鼠6只,随机分入shRNA-NC组、hsa_circ_0010697-shRNA组,每组3只,检测两组裸鼠的体重和种瘤体积。结果 qRT-PCR结果显示,hsa_circ_0010697-shRNA组hsa_circ_0010697基因相对表达量为1.423±0.109,显著高于对照组的0.994±0.172和shRNA-NC组的1.006±0.137(P值均<0.05)。CCK-8法检测细胞增殖结果显示,hsa_circ_0010697-shRNA组细胞A_(450)值为0.757±0.051,显著低于对照组的1.000±0.044和shRNA-NC组的0.981±0.054(P值均<0.05)。Transwell实验结果显示,hsa_circ_0010697-shRNA组穿透基质膜到达下室的细胞数量为(93±11)个,显著少于对照组的(165±16)个和shRNA-NC组的(152±15)个(P值均<0.05)。Western blot结果显示,hsa_circ_0010697-shRNA组RAS-ERK信号通路上的RAS、ERK1/2、CDK4、Cyclin D1、E2F1蛋白质相对表达量显著高于对照组和shRNA-NC组(P值均<0.05)。裸鼠移植瘤模型实验结果显示,饲养12、18、22、24 d时,hsa_circ_0010697-shRNA组裸鼠的体重均显著大于shRNA-NC组同时间(P值均<0.05);饲养22、24 d时,hsa_circ_0010697-shRNA组裸鼠种瘤体积均显著小于shRNA-NC同时间(P值均<0.05)。结论 hsa_circ_0010697可以在胃癌诊治中作为一种潜在生物标志物和治疗靶点,为胃癌的药物靶向治策略提供了新思路。

血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896在肺腺癌中的筛查价值

目的探讨血清外泌体来源的环状RNA(circRNA)hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896作为肺腺癌分子标志物的临床筛查价值。方法共收集3个批次样本。第一批为血清外泌体组:收集肺腺癌患者127例,健康人对照组53例。第二批为血清组:收集肺腺癌患者87例,健康人对照组41例。第三批为手术前后血清外泌体组:收集手术前后肺腺癌患者26例。分离各组研究对象的血清及外泌体,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组血清及外泌体中hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的表达水平,统计并分析手术前后肺腺癌患者血清外泌体circRNA的表达水平及其与患者临床病理参数的关系。采用ROC曲线评估3个血清外泌体circRNA对肺腺癌的临床筛查效能,Pearson分析血清外泌体circRNA与各项肿瘤标志物的相关性。结果qRT-PCR结果显示,与健康人对照组比较,肺腺癌组血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的表达水平分别为0.338±1.362、1.650±1.329、2.064±1.621(t值分别为6.794、6.237、6.456,P<0.05);与术后比较,术前3个血清外泌体的表达水平分别为0.989±1.746、3.084±2.013、3.330±2.088(t值分别为5.289、4.197、4.966,P<0.05)。血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896筛查肺腺癌的ROC曲线下面积(AUC ROC)分别为0.777、0.766、0.793,当cut-off值分别为1.08、2.16、2.59时,其敏感性分别为73.23%、68.50%、66.14%,特异性分别为67.92%、79.25%、82.35%。此外,与健康人对照组比较,肺腺癌组血清hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的表达水平分别为0.318±2.077、1.932±1.971、2.141±1.815(t值分别为3.741、4.677、4.496,P<0.05);血清hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896筛查肺腺癌的AUC ROC分别为0.676、0.739、0.738,当cut-off值分别为0.29、1.88、2.44时,其敏感性分别为35.63%、48.28%、51.72%,特异性分别为95.12%、90.24%、85.37%。肺腺癌患者血清外泌体hsa_circ_0001439水平与T分期(P=0.042)、TNM分期(P=0.032)相关;而血清外泌体hsa_circ_0001492水平与年龄(P=0.027)、M分期(P=0.028)、T分期(P=0.004)、TNM分期(P=0.009)相关;血清外泌体hsa_circ_0000896水平与年龄(P=0.027)、T分期(P=0.001)、TNM分期(P=0.009)相关。Pearson分析显示血清外泌体circRNA与各项肿瘤标志物均无相关性(P>0.05)。结论血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的差异表达可用于肺腺癌的临床筛查。

宫颈鳞状细胞癌中hsa_circ_0007905的表达意义及对生长的影响

目的:探讨宫颈鳞状细胞癌(CSCC)中hsa_circ_0007905的表达、临床病理意义以及对生长的影响。方法:收集71例CSCC手术切除标本及临床病理参数。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测验证CSCC中hsa_circ_0007905的表达水平。统计分析hsa_circ_0007905的表达与临床病理特征的关系;CCK-8实验检测hsa_circ_0007905对CSCC细胞的增殖活性影响。裸鼠皮下荷瘤实验检测敲低hsa_circ_0007905表达后对移植瘤生长(体积和重量)的影响。结果:在71例CSCC组织中hsa_circ_0007905的表达水平明显高于癌旁正常组织(P=0.0001);hsa_circ_0007905在宫颈癌细胞HeLa、C33A的表达水平高于人正常子宫颈上皮细胞HcerEpic(P<0.05)。hsa_circ_0007905的表达高低与CSCC的肿瘤大小和分化程度密切相关(P均<0.05),而与患者年龄、HPV感染、淋巴结转移和TNM分期之间无相关性(P均>0.05)。即表达水平越高,肿瘤越大而且分化程度越低,恶性程度越高。CCK-8实验结果显示过表达hsa_circ_0007905提高了C33A细胞的增殖活性能力,而降低hsa_circ_0007905表达则抑制了C33A细胞的增殖活性能力(P均<0.05)。裸鼠皮下荷瘤实验表明降低hsa_circ_0007905表达后肿瘤的体积和重量明显小于对照组,两组间差异有统计学意义(P均<0.05)。该实验结果进一步表明hsa_circ_0007905促进宫颈癌的增殖和生长。结论:在CSCC中hsa_circ_0007905表达水平上调,是一个新的促进宫颈癌细胞的生长增殖的癌基因,本研究为未来靶向治疗CSCC提供有力的实验依据。

血清细胞外囊泡hsa_circ_0005075在复发性流产中的表达及临床意义

目的分析复发性流产(RSA)患者血清细胞外囊泡(EVs)hsa_circ_0005075的表达水平及临床意义。方法收集山东大学齐鲁医院妇产科就诊的14例RSA患者和14例正常妊娠者(对照组)为训练集,64例RSA患者和48例对照为验证集。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组间血清EVs中hsa_circ_0005075的表达水平,并分析其与RSA患者临床病理参数的关系。采用电化学发光法检测血清中甲状腺球蛋白抗体(A-TG)、抗甲状腺过氧化物酶自身抗体(A-TPO),化学发光免疫分析法检测血清抗心磷脂(ACA)抗体(IgA、IgG、IgM)、抗β2GP1抗体(IgA、IgG、IgM)水平;采用Person相关分析血清EVs hsa_circ_0005075与上述临床指标的关系;采用ROC曲线评估血清EVs hsa_circ_0005075对RSA的临床应用价值。结果训练集检测结果显示,血清EVs hsa_circ_0005075在RSA组中的表达水平[7.69(4.74,42.15)]显著高于对照组[1.02(0.51,4.23)],差异有统计学意义(U=28,P<0.01)。在验证集中,血清EVs hsa_circ_0005075在RSA组中的表达水平[4.96(1.73,8.89)]亦显著高于对照组[1.00(0.24,2.96)],差异有统计学意义(U=693,P<0.01)。ROC曲线显示,血清EVs hsa_circ_0005075对RSA具有较好的诊断价值(AUC^(ROC)=0.774),其敏感性和特异性分别为70.3%和75.0%。血清EVs hsa_circ_0005075的表达与A-TPO具有一定的相关性(r=0.298,P<0.05)。结论血清EVs hsa_circ_0005075在RSA患者中呈高表达,对RSA具有潜在的鉴别诊断价值。

Hsa_circ_0007067在子宫内膜样癌中的表达及临床意义

目的:子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,以子宫内膜样癌(endometrioid adenocarcinoma,EEC)最常见,其发病机制目前尚不清楚,已有研究证明环状RNA(circular RNA,circRNA)的表达与EEC的进展有关。本研究旨在检测hsa_circ_0007067在EEC中的表达,并探讨Hsa_circ_0007067与EEC临床病理特征的关系。方法:应用高通量测序分析2例EEC组织和2例正常子宫内膜组织基因表达水平,以|log2(Fold changes)|≥1.5且P<0.05为筛选标准,选择下调最显著的hsa_circ_0007067为研究对象,应用实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测36例EEC组织(EEC组)和36例正常子宫内膜组织(对照组)中hsa_circ_0007067的相对表达量。生物信息学分析预测hsa_circ_0007067的结合位点和编码能力。结果:EEC组中hsa_circ_0007067表达水平显著低于对照组(P<0.05),且表达水平与国际妇产科联盟(Inter-national Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期和组织分化程度有关;受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线显示曲线下面积(area under curve,AUC)为0.936,敏感度为0.833,特异度为0.889,最佳截断值为0.722,差异具有统计学意义(P<0.05)。Hsa_circ_0007067具有翻译成多肽的潜能,circbank数据库预测其miRNA潜在结合位点共24个。结论:Hsa_circ_0007067与EEC的发生、发展相关,可能通过与下游靶基因miRNA结合或编码蛋白质功能影响EEC的进程,有望作为EEC早期筛查和判断预后的分子指标。

hsa_circ_0013058促进食管鳞状细胞癌侵袭和迁移的机制研究

目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中hsa_circ_0013058的作用及其促进ESCC细胞侵袭和迁移的机制。方法收集75例患者的ESCC组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和RNA原位杂交技术(RISH)检测hsa_circ_0013058表达情况,并分析其与ESCC患者临床病理资料的关系。采用划痕实验和Transwell实验检测ESCC细胞侵袭和迁移能力。采用生物信息学方法预测hsa_circ_0013058的靶基因。采用Rescue实验检测hsa_circ_0013058对下游基因的调控及对ESCC细胞侵袭、迁移的影响。结果qRT-PCR结果显示,ESCC组织中hsa_circ_0013058表达量高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(t=5.078,P<0.05)。ESCC细胞株KYSE70中hsa_circ_0013058表达量高于人正常食管上皮细胞Het-1A,差异有统计学意义(P<0.05)。在RNA水平上,hsa_circ_0013058与miR-548p呈负相关(r=-0.2542,P<0.05)。ESCC组织中,hsa_circ_0013058 RNA阳性表达率为72.00%,高于癌旁正常组织的17.33%,差异有统计学意义(χ2=6.862,P<0.05)。hsa_circ_0013058阳性表达与肿瘤浸润深度、分化程度和淋巴结转移均密切相关(P<0.05)。划痕实验结果表明,过表达hsa_circ_0013058增强KYSE70细胞的迁移能力(P<0.05);敲低hsa_circ_0013058表达减弱KYSE70细胞的迁移能力(P<0.05)。过表达hsa_circ_0013058后,ESCC细胞侵袭和迁移细胞数目增加,敲低hsa_circ_0013058表达后,侵袭和迁移细胞数目下降(P<0.05)。qRT-PCR实验证实,hsa_circ_0013058可调控微小RNA-548p(miR-548p)表达。双荧光素酶报告基因实验表明,miR-548p与LPAR3为特异性结合,LPAR3是miR-548p的直接靶基因。Rescue实验结果表明,hsa_circ_0013058通过miR-548p/LPAR3信号轴调控ESCC细胞的侵袭、转移。结论ESCC中,hsa_circ_0013058抑制miR-548p表达,进而激活LPAR3信号通路,促进ESCC细胞的侵袭、迁移。

hsa_circ_0030042对口腔鳞状细胞癌作用的研究

目的:探究hsa_circ_0030042在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的作用。方法:通过实时荧光定量PCR检测OSCC细胞中hsa_circ_0030042的表达,在OSCC细胞中转染小干扰RNA(siRNA)以敲低hsa_circ_0030042,采用CCK-8、集落形成实验、划痕实验、Transwell实验检测hsa_circ_0030042对OSCC细胞的增殖、侵袭、迁移作用影响。结果:hsa_circ_0030042在CAL27和HSC3细胞中的表达显著升高(P<0.001);与对照组相比,敲低hsa_circ_0030042后,CAL27、HSC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低(P<0.05)。结论:hsa_circ_0030042在OSCC细胞中的表达显著增高,可促进OSCC细胞的增殖、侵袭和迁移。

环状RNA Hsa_circ_0006948对口腔鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA Hsa_circ_0006948(circ_0006948)对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞恶性生物学行为的影响。方法qRT-PCR检测SCC-15、CAL27和HIOEC细胞circ_0006948的表达;将SCC-15细胞分别转染pc-NC、pc-circ_0006948、si-NC、si-circ_0006948,记为pc-NC组、pc-circ_0006948组、si-NC组以及si-circ_0006948组,取正常培养的细胞作为NC组。CCK-8法检测细胞存活率;平板克隆法检测细胞克隆情况;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞E-Cadherin、N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果与HIOEC细胞相比,CAL27细胞和SCC-15细胞中circ_0006948表达明显升高(P<0.05),由于SCC-15细胞中circ_0006948的表达最高,后续使用SCC-15细胞进行后续转染实验。与NC组和pc-NC组相比,pc-circ_0006948组细胞存活率、克隆个数、迁移和侵袭个数以及细胞N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显升高(P<0.05),细胞凋亡率以及E-Cadherin蛋白表达明显降低(P<0.05);与NC组和si-NC组相比,si-circ_0006948组细胞存活率、克隆个数、迁移和侵袭个数以及细胞N-Cadherin、MMP-2、MMP-9蛋白表达明显降低(P<0.05),细胞凋亡率以及E-Cadherin蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论circ_0006948在OSCC细胞中呈高表达,过表达circ_0006948会促进SCC-15细胞增殖,克隆,迁移,侵袭,并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与调控上皮间充质转化(EMT)有关。

hsa_circ_0090231与hsa_circ_0004543在急性脑梗死患者颈动脉斑块中的临床意义

目的探讨hsa_circ_0090231与hsa_circ_0004543在急性脑梗死(ACI)患者颈动脉斑块中的临床意义。方法选取2022年1月至12月于浙江省嘉兴市第一医院收治的60例ACI患者作为试验组,根据预后情况分为预后良好组(39例)和预后不良组(21例);选择同期于浙江省嘉兴市第一医院体检中心体检的50例健康体检者作为对照组。采用实时定量聚合酶链反应测定hsa_circ_0090231和hsa_circ_0004543表达;采用Pearson分析hsa_circ_0090231、hsa_circ_0004543与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的相关性;采用受试者操作特征(ROC)曲线分析hsa_circ_0090231、hsa_circ_0004543对ACI患者不良预后的诊断效能。结果试验组hsa_circ_0090231、hsa_circ_0004543及LDL-C水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组hsa_circ_0090231、hsa_circ_0004543及LDL-C水平均高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,ACI患者hsa_circ_0090231、hsa_circ_0004543表达均与LDL-C水平呈正相关(r=0.650、0.726,P<0.001)。ROC曲线显示,hsa_circ_0090231的曲线下面积为0.84375(95%CI:0.736~0.939),特异度为0.875,灵敏度为0.700;hsa_circ_0004543的曲线下面积为0.96875(95%CI:0.922~0.996),特异度为0.900,灵敏度为0.950。结论hsa_circ_0090231和hsa_circ_0004543在ACI患者中表达激活,其在不良预后患者中表达高于预后良好者,且其对患者不良预后具有一定诊断价值。

Role of hsa_circ_0007482 in pterygium development: insights into proliferation, apoptosis, and clinical correlations

AIM:To investigate the impact of hsa_circ_0007482 on the proliferation and apoptosis of human pterygium fibroblasts(HPFs)and its correlation with the severity grades of pterygium.METHODS:Pterygium and normal conjunctival tissues were collected from the superior area of the same patient’s eye(n=33).The correlation between pterygium severity and hsa_circ_0007482 expression using quantitative reversetranscription polymerase chain reaction(RT-qPCR)were analyzed.Three distinct siRNA sequences targeting hsa_circ_0007482,along with a negative control sequence,were transfected into HPFs.Cell proliferation was assessed using the cell counting kit-8.Expression levels of Ki67,proliferating cell nuclear antigen(PCNA),Cyclin D1,Bax,B-cell lymphoma-2(Bcl-2),and Caspase-3 were measured via RT-qPCR.Immunofluorescence staining was employed to detect Ki67 and vimentin expressions.Apoptosis was evaluated using flow cytometry.RESULTS:Hsa_circ_0007482 expression was significantly higher in pterygium tissues compared to normal conjunctival tissues(P<0.001).Positive correlations were observed between hsa_circ_0007482 expression and pterygium severity,thickness,and vascular density.Knockdown of hsa_circ_0007482 inhibited cell proliferation,reducing the mRNA expression of Ki67,PCNA,and Cyclin D1 in HPFs.Hsa_circ_0007482 knockdown induced apoptosis,increasing mRNA expression levels of Bax and Caspase-3,while decreasing Bcl-2 expression in HPFs.Additionally,hsa_circ_0007482 knockdown attenuated vimentin expression in HPFs.CONCLUSION:The downregulation of hsa_circ_0007482 effectively hampers cell proliferation and triggers apoptosis in HPFs.There are discernible positive correlations detected between the expression of hsa_circ_0007482 and the severity of pterygium.