环状RNA FAT1(hsa_circ_0001461)通过调控miR-181d-5p/miR-199a-5p促进口腔鳞状细胞癌进展

目的:探讨环状RNA FAT1(hsa_circ_0001461)-miR-181d-5p/miR-199a-5p轴在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞生物学功能中的作用及机制。方法:收集30例OSCC患者的临床组织,采用实时定量PCR检测circFAT1、miR-181d-5p及miR-199a-5p在OSCC组织和细胞中的表达。通过StarBase和双荧光素酶报告基因实验验证miR-181d-5p/miR-199a-5p与circFAT1的靶向关系。利用CCK-8、Transwell、流式细胞术检测circFAT1-miR-181d-5p/miR-199a-5p轴对于OSCC细胞活力、迁移、侵袭、凋亡和周期的影响。采用免疫印迹法结合LY294002处理检测PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的表达。结果:在OSCC中circFAT1表达升高,miR-181d-5p、miR-199a-5p表达下降(P<0.001)。circFAT1可以同时靶向miR-181d-5p和miR-199a-5p(P<0.01)。沉默circFAT1、过表达miR-181d及miR-199a-5p抑制了OSCC细胞活力、迁移、侵袭和周期进展、诱导凋亡,同时抑制PI3K/Akt/mTOR通路的激活;过表达circFAT1、抑制miR-181d-5p及miR-199a-5p则发挥相反作用(P<0.05)。miR-181d-5p、miR-199a-5p可部分逆转circFAT1对OSCC细胞生物学功能的影响(P<0.05)。LY294002预处理逆转了过表达circFAT1对PI3K/Akt/mTOR通路和细胞活力的影响(P<0.05)。结论:circFAT1通过调控miR-181d-5p和miR-199a-5p促进OSCC细胞恶性进展。

干扰hsa_circ_0013958/miR-637对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨环状RNA(circularRNA,circRNA)hsa_circ_0013958对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(Humankeloid fibroblast,HKF)增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法:将人瘢痕疙瘩成纤维细胞分为si-NC组、si-hsa_circ_0013958组、miR-NC组、miR-637组、si-hsa_circ_0013958+anti-miR-NC组和si-hsa_circ_0013958+anti-miR-637组。实时荧光定量PCR(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)试剂盒检测hsa_circ_0013958、miR-637表达;四甲基偶氮唑盐(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测细胞存活率;平板克隆实验检测细胞集落形成数;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测hsa_circ_0013958和miR-637的靶向关系。结果:瘢痕疙瘩组织中hsa_circ_0013958表达水平较正常皮肤组织升高,miR-637表达水平降低(P<0.05)。干扰hsa_circ_0013958表达或过表达miR-637后,HKF细胞存活率、集落形成数以及迁移、侵袭细胞数均降低(P<0.05)。hsa_circ_0013958和miR-637有靶向调控关系;抑制miR-637表达逆转了干扰hsa_circ_0013958对HKF增殖、迁移侵袭的影响。结论:干扰hsa_circ_0013958通过调控miR-637抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖、迁移和侵袭。

环状RNA hsa_circ_0085576调控微小RNA-498/B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1轴对口腔鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探究环状RNA hsa_circ_0085576对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白印迹法检测OSCC细胞中hsa_circ_0085576、微小RNA-498(miR-498)以及B细胞特异性莫洛尼鼠白血病病毒整合位点1(BMI-1)的表达水平。使用CCK-8、划痕实验、Transwell实验以及qRT-PCR、蛋白印迹法分别检测SCC-15细胞增殖活力、迁移及侵袭能力以及相关基因和蛋白的相对表达量。结果OSCC细胞中hsa_circ_0085576与BMI-1表达上调,miR-498表达下调(P<0.05)。下调hsa_circ_0085576表达或过表达miR-498后SCC-15细胞的增殖活性、划痕愈合率、侵袭细胞数目以及细胞周期蛋白D1、波形蛋白表达水平下调,miR-498和E-钙黏蛋白表达水平上调(P<0.05);抑制miR-498表达可减弱下调hsa_circ_0085576表达对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用;上调BMI-1表达可减弱过表达miR-498对OSCC细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论下调hsa_circ_0085576表达可通过激活miR-498/BMI-1轴抑制OSCC细胞增殖、迁移及侵袭。

环状RNA hsa_circ_0006156在系统性红斑狼疮患者外周血中的表达及其对Raji细胞增殖、凋亡的影响

目的:研究hsa_circ_0006156对Raji细胞增殖、凋亡的影响及其在系统性红斑狼疮(SLE)发生、发展中的作用。方法:收集广西医科大学第一附属医院皮肤性病科2021年9月至2023年9月收治的55例SLE患者(SLE组),并以40例健康对照者作为对照组(HC组),分离出外周血单个核细胞(PBMC)及CD20+B淋巴细胞,使用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测hsa_circ_0006156表达水平;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析hsa_circ_0006156的诊断效能。以Raji细胞为研究对象,使用慢病毒构建hsa_circ_0006156过表达模型,将细胞分为hsa_circ_0006156过表达组(OE组)、转染空病毒载体的阴性对照组(NC组)以及空白对照组(control组)。利用CCK8法检测0 h、6 h、12 h、18 h、24 h、30 h、36 h细胞450 nm吸光度,计算OE组和NC组增殖率。Western blotting实验检测各组Bcl-2、cleaved caspase-3凋亡蛋白表达水平。结果:与HC组比较,SLE组PBMC和CD20+B淋巴细胞中hsa_circ_0006156表达量均明显降低(P<0.001)。ROC曲线分析显示,hsa_circ_0006156区分SLE和HC的ROC曲线下面积(AUC)为0.787 3(95%CI:0.697 5~0.877;P<0.001),敏感度为97.5%,特异度为50.9%,对SLE诊断Cut-off值为<0.652。hsa_circ_0006156表达量在无活动或轻度活动与中重度活动患者之间存在显著差异(P=0.0148)。CCK8实验结果显示,在36 h时,OE组Raji细胞增殖较NC组受到明显抑制(P<0.001)。Western blotting检测结果表明,与NC组和control组比较,OE组Bcl-2蛋白表达水平降低,而cleaved caspase-3蛋白表达水平升高(均P<0.05)。结论:hsa_circ_0006156对SLE具有一定的诊断效能。hsa_circ_0006156可能是通过调节B细胞的增殖、凋亡影响SLE的发生、发展。

胃癌患者血浆hsa_circ_0001588水平与TLR4和T淋巴细胞亚群相关性

目的 探究胃癌患者血浆中hsa_circ_0001588水平,并分析其血浆水平与患者临床特征、Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)、T淋巴细胞亚群的关系。方法 选取2021年3月至2022年5月于我院治疗的胃癌患者124例为研究组,另选取接受胃镜检查确诊为浅表性胃炎的患者130例作为良性组以及健康体检者130例作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应、Wmini5146流式细胞仪和双抗体夹心ELISA法检测受试者血浆hsa_circ_0001588水平、TLR4水平和CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平。分析血浆hsa_circ_0001588、TLR4、T淋巴细胞对于胃癌的诊断效能以及血浆hsa_circ_0001588水平与TLR4和T淋巴细胞水平的关系。结果 研究组血浆hsa_circ_0001588、TLR4和CD8^(+)表达水平高于良性组和对照组,CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平低于良性组和对照组(P<0.05),且研究组患者术后hsa_circ_0001588水平下降。临床分期越高、浸润深度越深、分化程度越低,发生远端转移的患者血浆hsa_circ_0001588水平越高(P<0.05)。血浆hsa_circ_0001588、TLR4和T淋巴细胞对于胃癌均有较好的诊断效能,其联合诊断的整体效能最高。血浆hsa_circ_0001588高表达患者CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)表达较低,TLR4和CD8^(+)表达较高(P<0.05),其血浆hsa_circ_0001588水平与CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)表达呈负相关性,与TLR4和CD8^(+)呈正相关性。结论 胃癌患者血浆hsa_circ_0001588水平偏高,且与CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平呈负相关性,与TLR4、CD8^(+)呈正相关性。

血清外泌体hsa_circ_0008035在胃癌前病变和早期胃癌中的临床意义

目的 探讨血清外泌体hsa_circ_0008035在早期胃癌(GC)及癌前病变中的临床意义。方法 2012年1月~2017年12月于我院就诊的GC病人90例(GC组)、癌前病变病人外周血样本89例(Pre组),同期纳入45例健康志愿者外周血样本作为对照(NC组),实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清外泌体hsa_circ_0008035水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估血清外泌体hsa_circ_0008035的诊断价值。通过内镜检查随访Pre组病人疾病进展情况。基于circBase和RegRNA 2.0靶点预测软件获得hsa_circ_0008035潜在的microRNA(miRNA)靶点。结果 与NC组比较,GC组和Pre组病人血清外泌体hsa_circ_0008035表达水平显著上调,其中GC组升高最为明显(P<0.05)。与传统肿瘤标志物检测比较,外泌体hsa_circ_0008035诊断GC及Pre的曲线下面积(AUC)、敏感性、准确性均显著提高,假阴性率和假阳性率显著降低(P<0.05)。在区分早期GC和Pre病人时的AUC为0.681,灵敏度和特异度为66.35%和83.31%。Pre组病人中位随访5.3年,21例病人发生疾病进展,这部分病人诊断为疾病进展时血清外泌体hsa_circ_0008035表达水平较基线值显著上调(P<0.001),基线时血清外泌体hsa_circ_0008035表达水平也较未发生疾病进展的病人普遍上调(P=0.005)。对于GC组病人,中晚期GC(TNM分期Ⅲ~Ⅳ期)病人血清外泌体hsa_circ_0008035表达水平高于早期GC病人,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa_circ_0008035靶通路预测结果显示,hsa_circ_0008035含有hsa-miR-599、hsa-miR-17-3p、hsa-miR-1256和hsa-miR-375种子序列及相关的常见下游靶点。结论 血清外泌体hsa_circ_0008035表达在早期GC及癌前病变病人中普遍上调,对早期GC、胃癌前病变的诊断和疾病进展的评估均有一定的临床意义。

血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896在肺腺癌中的筛查价值

目的探讨血清外泌体来源的环状RNA(circRNA)hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896作为肺腺癌分子标志物的临床筛查价值。方法共收集3个批次样本。第一批为血清外泌体组:收集肺腺癌患者127例,健康人对照组53例。第二批为血清组:收集肺腺癌患者87例,健康人对照组41例。第三批为手术前后血清外泌体组:收集手术前后肺腺癌患者26例。分离各组研究对象的血清及外泌体,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组血清及外泌体中hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的表达水平,统计并分析手术前后肺腺癌患者血清外泌体circRNA的表达水平及其与患者临床病理参数的关系。采用ROC曲线评估3个血清外泌体circRNA对肺腺癌的临床筛查效能,Pearson分析血清外泌体circRNA与各项肿瘤标志物的相关性。结果qRT-PCR结果显示,与健康人对照组比较,肺腺癌组血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的表达水平分别为0.338±1.362、1.650±1.329、2.064±1.621(t值分别为6.794、6.237、6.456,P<0.05);与术后比较,术前3个血清外泌体的表达水平分别为0.989±1.746、3.084±2.013、3.330±2.088(t值分别为5.289、4.197、4.966,P<0.05)。血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896筛查肺腺癌的ROC曲线下面积(AUC ROC)分别为0.777、0.766、0.793,当cut-off值分别为1.08、2.16、2.59时,其敏感性分别为73.23%、68.50%、66.14%,特异性分别为67.92%、79.25%、82.35%。此外,与健康人对照组比较,肺腺癌组血清hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的表达水平分别为0.318±2.077、1.932±1.971、2.141±1.815(t值分别为3.741、4.677、4.496,P<0.05);血清hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896筛查肺腺癌的AUC ROC分别为0.676、0.739、0.738,当cut-off值分别为0.29、1.88、2.44时,其敏感性分别为35.63%、48.28%、51.72%,特异性分别为95.12%、90.24%、85.37%。肺腺癌患者血清外泌体hsa_circ_0001439水平与T分期(P=0.042)、TNM分期(P=0.032)相关;而血清外泌体hsa_circ_0001492水平与年龄(P=0.027)、M分期(P=0.028)、T分期(P=0.004)、TNM分期(P=0.009)相关;血清外泌体hsa_circ_0000896水平与年龄(P=0.027)、T分期(P=0.001)、TNM分期(P=0.009)相关。Pearson分析显示血清外泌体circRNA与各项肿瘤标志物均无相关性(P>0.05)。结论血清外泌体hsa_circ_0001439、hsa_circ_0001492、hsa_circ_0000896的差异表达可用于肺腺癌的临床筛查。

宫颈鳞状细胞癌中hsa_circ_0007905的表达意义及对生长的影响

目的:探讨宫颈鳞状细胞癌(CSCC)中hsa_circ_0007905的表达、临床病理意义以及对生长的影响。方法:收集71例CSCC手术切除标本及临床病理参数。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测验证CSCC中hsa_circ_0007905的表达水平。统计分析hsa_circ_0007905的表达与临床病理特征的关系;CCK-8实验检测hsa_circ_0007905对CSCC细胞的增殖活性影响。裸鼠皮下荷瘤实验检测敲低hsa_circ_0007905表达后对移植瘤生长(体积和重量)的影响。结果:在71例CSCC组织中hsa_circ_0007905的表达水平明显高于癌旁正常组织(P=0.0001);hsa_circ_0007905在宫颈癌细胞HeLa、C33A的表达水平高于人正常子宫颈上皮细胞HcerEpic(P<0.05)。hsa_circ_0007905的表达高低与CSCC的肿瘤大小和分化程度密切相关(P均<0.05),而与患者年龄、HPV感染、淋巴结转移和TNM分期之间无相关性(P均>0.05)。即表达水平越高,肿瘤越大而且分化程度越低,恶性程度越高。CCK-8实验结果显示过表达hsa_circ_0007905提高了C33A细胞的增殖活性能力,而降低hsa_circ_0007905表达则抑制了C33A细胞的增殖活性能力(P均<0.05)。裸鼠皮下荷瘤实验表明降低hsa_circ_0007905表达后肿瘤的体积和重量明显小于对照组,两组间差异有统计学意义(P均<0.05)。该实验结果进一步表明hsa_circ_0007905促进宫颈癌的增殖和生长。结论:在CSCC中hsa_circ_0007905表达水平上调,是一个新的促进宫颈癌细胞的生长增殖的癌基因,本研究为未来靶向治疗CSCC提供有力的实验依据。

血清细胞外囊泡hsa_circ_0005075在复发性流产中的表达及临床意义

目的分析复发性流产(RSA)患者血清细胞外囊泡(EVs)hsa_circ_0005075的表达水平及临床意义。方法收集山东大学齐鲁医院妇产科就诊的14例RSA患者和14例正常妊娠者(对照组)为训练集,64例RSA患者和48例对照为验证集。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组间血清EVs中hsa_circ_0005075的表达水平,并分析其与RSA患者临床病理参数的关系。采用电化学发光法检测血清中甲状腺球蛋白抗体(A-TG)、抗甲状腺过氧化物酶自身抗体(A-TPO),化学发光免疫分析法检测血清抗心磷脂(ACA)抗体(IgA、IgG、IgM)、抗β2GP1抗体(IgA、IgG、IgM)水平;采用Person相关分析血清EVs hsa_circ_0005075与上述临床指标的关系;采用ROC曲线评估血清EVs hsa_circ_0005075对RSA的临床应用价值。结果训练集检测结果显示,血清EVs hsa_circ_0005075在RSA组中的表达水平[7.69(4.74,42.15)]显著高于对照组[1.02(0.51,4.23)],差异有统计学意义(U=28,P<0.01)。在验证集中,血清EVs hsa_circ_0005075在RSA组中的表达水平[4.96(1.73,8.89)]亦显著高于对照组[1.00(0.24,2.96)],差异有统计学意义(U=693,P<0.01)。ROC曲线显示,血清EVs hsa_circ_0005075对RSA具有较好的诊断价值(AUC^(ROC)=0.774),其敏感性和特异性分别为70.3%和75.0%。血清EVs hsa_circ_0005075的表达与A-TPO具有一定的相关性(r=0.298,P<0.05)。结论血清EVs hsa_circ_0005075在RSA患者中呈高表达,对RSA具有潜在的鉴别诊断价值。

Hsa_circ_0007067在子宫内膜样癌中的表达及临床意义

目的:子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤,以子宫内膜样癌(endometrioid adenocarcinoma,EEC)最常见,其发病机制目前尚不清楚,已有研究证明环状RNA(circular RNA,circRNA)的表达与EEC的进展有关。本研究旨在检测hsa_circ_0007067在EEC中的表达,并探讨Hsa_circ_0007067与EEC临床病理特征的关系。方法:应用高通量测序分析2例EEC组织和2例正常子宫内膜组织基因表达水平,以|log2(Fold changes)|≥1.5且P<0.05为筛选标准,选择下调最显著的hsa_circ_0007067为研究对象,应用实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测36例EEC组织(EEC组)和36例正常子宫内膜组织(对照组)中hsa_circ_0007067的相对表达量。生物信息学分析预测hsa_circ_0007067的结合位点和编码能力。结果:EEC组中hsa_circ_0007067表达水平显著低于对照组(P<0.05),且表达水平与国际妇产科联盟(Inter-national Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)分期和组织分化程度有关;受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线显示曲线下面积(area under curve,AUC)为0.936,敏感度为0.833,特异度为0.889,最佳截断值为0.722,差异具有统计学意义(P<0.05)。Hsa_circ_0007067具有翻译成多肽的潜能,circbank数据库预测其miRNA潜在结合位点共24个。结论:Hsa_circ_0007067与EEC的发生、发展相关,可能通过与下游靶基因miRNA结合或编码蛋白质功能影响EEC的进程,有望作为EEC早期筛查和判断预后的分子指标。

hsa_circ_0013058促进食管鳞状细胞癌侵袭和迁移的机制研究

目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)中hsa_circ_0013058的作用及其促进ESCC细胞侵袭和迁移的机制。方法收集75例患者的ESCC组织及癌旁正常组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和RNA原位杂交技术(RISH)检测hsa_circ_0013058表达情况,并分析其与ESCC患者临床病理资料的关系。采用划痕实验和Transwell实验检测ESCC细胞侵袭和迁移能力。采用生物信息学方法预测hsa_circ_0013058的靶基因。采用Rescue实验检测hsa_circ_0013058对下游基因的调控及对ESCC细胞侵袭、迁移的影响。结果qRT-PCR结果显示,ESCC组织中hsa_circ_0013058表达量高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(t=5.078,P<0.05)。ESCC细胞株KYSE70中hsa_circ_0013058表达量高于人正常食管上皮细胞Het-1A,差异有统计学意义(P<0.05)。在RNA水平上,hsa_circ_0013058与miR-548p呈负相关(r=-0.2542,P<0.05)。ESCC组织中,hsa_circ_0013058 RNA阳性表达率为72.00%,高于癌旁正常组织的17.33%,差异有统计学意义(χ2=6.862,P<0.05)。hsa_circ_0013058阳性表达与肿瘤浸润深度、分化程度和淋巴结转移均密切相关(P<0.05)。划痕实验结果表明,过表达hsa_circ_0013058增强KYSE70细胞的迁移能力(P<0.05);敲低hsa_circ_0013058表达减弱KYSE70细胞的迁移能力(P<0.05)。过表达hsa_circ_0013058后,ESCC细胞侵袭和迁移细胞数目增加,敲低hsa_circ_0013058表达后,侵袭和迁移细胞数目下降(P<0.05)。qRT-PCR实验证实,hsa_circ_0013058可调控微小RNA-548p(miR-548p)表达。双荧光素酶报告基因实验表明,miR-548p与LPAR3为特异性结合,LPAR3是miR-548p的直接靶基因。Rescue实验结果表明,hsa_circ_0013058通过miR-548p/LPAR3信号轴调控ESCC细胞的侵袭、转移。结论ESCC中,hsa_circ_0013058抑制miR-548p表达,进而激活LPAR3信号通路,促进ESCC细胞的侵袭、迁移。

hsa_circ_401724表达与2型糖尿病患者的炎症反应及与胰岛细胞功能的关系研究

目的分析hsa_circ_401724表达与2型糖尿病(T2DM)患者的炎症反应及与胰岛细胞功能的关系。方法选取2017年4月至2022年12月临汾市中心医院收治的102例T2DM患者作为观察组,同期选取该院100例糖耐量正常的体检健康者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验法检测受试者血中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平评估受试者炎症因子水平。依照检测熔解曲线计算hsa_circ_401724/U6相对表达水平,以及评估受试者胰岛细胞功能,包括胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、稳态模型评估的胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)水平。Pearson相关性分析hsa_circ_401724表达水平与炎症反应、胰岛细胞功能的相关性,采用Logistic回归模型分析hsa_circ_401724表达水平与炎症反应、胰岛细胞功能的关系。结果观察组患者HOMA-IR、TNF-α、IL-6、ICAM-1水平明显高于对照组,观察组患者HOMA-β水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者hsa_circ_401724相对表达水平(0.75±0.13)明显高于对照组(0.24±0.06),差异有统计学意义(P<0.05)。hsa_circ_401724高表达组患者HOMA-IR、TNF-α、IL-6、ICAM-1水平明显高于hsa_circ_401724低表达组,且HOMA-β水平明显低于hsa_circ_401724低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。hsa_circ_401724相对表达水平与HOMA-IR、TNF-α、IL-6、ICAM-1水平呈正相关(r=0.657、0.671、0.703、0.698,P<0.05),hsa_circ_401724表达水平与HOMA-β水平呈负相关(r=-0.611,P<0.05)。hsa_circ_401724高表达是影响T2DM患者HOMA-IR、HOMA-β、TNF-α、IL-6、ICAM-1水平的独立危险因素(P<0.05)。结论hsa_circ_401724高表达与T2DM患者的炎症反应及其胰岛细胞功能下降有关。

hsa_circ_0011946靶向miR-767-3p调控宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨hsa_circ_0011946靶向miR-767-3p在宫颈癌进展中的作用。方法RT-qPCR分析hsa_circ_0011946、miR-767-3p在宫颈癌组织、癌旁正常组织、人宫颈上皮永生化细胞(H8)及宫颈癌细胞(SiHa、HeLa、Caski)中的表达水平。分别用si-NC、si-hsa_circ_0011946、miR-NC、miR-767-3p、pcDNA、pcDNA-hsa_circ_0011946、anti-miR-NC+si-hsa_circ_0011946、anti-miR-767-3p+si-hsa_circ_0011946转染SiHa细胞,并设为si-NC组、si-hsa_circ_0011946组、miR-NC组、miR-767-3p组、pcDNA组、pcDNAhsa_circ_0011946组、anti-miR-NC+si-hsa_circ_0011946组、anti-miR-767-3p+si-hsa_circ_0011946组,未转染的细胞作为NC组。采用RT-qPCR检测各组SiHa细胞中hsa_circ_0011946和miR-767-3p的表达;CCK-8法检测细胞活力;平板克隆形成实验检测细胞克隆数;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭数;Western blot检测MMP-2、MMP-9蛋白表达。circular RNA interactome预测miR-767-3p与hsa_circ_0011946的结合位点,双荧光素酶报告基因实验分析hsa_circ_0011946和miR-767-3p的靶向关系。结果与癌旁正常组织比较,宫颈癌组织中hsa_circ_0011946表达水平显著升高(P<0.05),miR-767-3p表达水平显著降低(P<0.05)。与H8细胞比较,SiHa、HeLa、Caski细胞中hsa_circ_0011946表达水平显著升高(P<0.05),miR-767-3p表达水平显著降低(P<0.05)。与NC组比较,si-hsa_circ_0011946组SiHa细胞hsa_circ_0011946表达水平、吸光度(A)值、克隆数、迁移数、侵袭数及MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低/减少(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-767-3p组SiHa细胞miR-767-3p表达水平显著升高(P<0.05),A值、克隆数、迁移数、侵袭数及MMP-2、MMP-2蛋白表达水平显著降低/减少(P<0.05)。与pcDNA组比较,pcDNA-hsa_circ_0011946组SiHa细胞miR-767-3p表达水平显著降低(P<0.05),hsa_circ_0011946表达水平显著升高(P<0.05)。共转染miR-767-3pmimics和WT-hsa_circ_0011946的SiHa细胞相对荧光素酶活性低于共转染miR-NC和WT-hsa_circ_0011946(P<0.05)。hsa_circ_0011946与miR-767-3p直接特异性结合。与anti-miR-NC+si-hsa_circ_0011946组比较,anti-miR-767-3p+si-hsa_circ_0011946组SiHa细胞miR-767-3p表达水平显著降低(P<0.05),A值、克隆数、迁移数、侵袭数及MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著升高/增加(P<0.05)。结论干扰hsa_circ_0011946通过靶向上调miR-767-3p抑制宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

血清外泌体hsa_circ_0004390预测上皮性卵巢癌铂类耐药及预后的临床研究

目的探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者血清外泌体hsa_circ_0004390与化疗耐药和预后的关系。方法收集2017年1月至12月启东市人民医院(南通大学附属启东医院)肿瘤一科收治的87例原发性EOC患者癌组织及血清样本,另外招募85例健康女性志愿者,获取对照血清样本。将辅助化疗无效或6个月内疾病发生进展的患者纳入耐药组(n=30),其余患者设为敏感组(n=57)。10例接受根治性手术患者的组织样本进行下一代测序(NGS)以筛选circRNA基因谱。实时荧光定量PCR(qPCR)法验证候选circRNAs基因的表达水平。结果在NGS鉴定出的circRNA基因中,共285个circRNA在耐药组和敏感组EOC组织中存在表达差异(P<0.05)。验证后发现5例耐药组EOC组织中只有hsa_circ_0004390(P=0.004)和hsa_circ_0006276(P=0.045)相对表达量高于敏感组,因此选择这两种基因进行分析。qPCR检测结果显示,与对照组比较,EOC组患者血清外泌体hsa_circ_0004390[2.57(1.47,2.99)vs.0.94(0.61,1.35),P<0.001]和hsa_circ_0006276[1.26(1.03,1.46)vs.0.87(0.67,1.39),P=0.001]相对表达量均显著升高。受试者工作特征(ROC)曲线进一步分析发现血清外泌体hsa_circ_0004390对EOC的诊断效能更高。耐药组患者血清外泌体hsa_circ_0004390表达显著高于敏感组患者[3.07(2.66,3.66)vs.1.69(1.23,2.59),P<0.001],血清外泌体hsa_circ_0006276与铂类化疗反应无关(P>0.05)。进一步校正客观干扰因素后,发现血清外泌体hsa_circ_0004390是影响EOC患者铂类化疗反应的独立因素(P<0.05)。血清外泌体hsa_circ_0004390表达低水平(<2.57)亚组患者OS较高水平亚组(≥2.57)患者更优(P=0.005)。结论血清外泌体hsa_circ_0004390有助于预测EOC患者对基于铂类方案的化疗反应以及生存预后,可能为EOC治疗提供新的靶点。

垂体腺瘤环状RNA Hsa_circ_0043459表达水平与术后复发的相关性

目的探讨垂体腺瘤组织中环状RNA hsa_circ_0043459的表达与术后复发的关系。方法回顾性分析2014年6月至2019年6月经手术治疗的120例垂体腺瘤患者的临床资料,另外选取20例同期经颅脑损伤内减压术中切除的正常脑组织。实时荧光定量PCR法检测垂体腺瘤及脑组织中hsa_circ_0043459的表达。垂体腺瘤患者均随访至2021年6月,按随访结局分为复发组和未复发组。多因素回归分析判定术后复发相关因素。结果垂体腺瘤组织中hsa_circ_0043459表达高于正常脑组织(P<0.05);术后2年内复发23例,复发率19.17%。相较于未复发组,复发组hsa_circ_0043459表达明显升高(P<0.05)。以120例垂体腺瘤hsa_circ_0043459的平均表达水平(3.26)为标准,分为高表达49例,低表达71例。高表达组复发率(36.73%)明显高于低表达组(7.04%)(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,高表达组术后复发时间明显较低表达组缩短(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,hsa_circ_0043459表达升高,被认为是垂体腺瘤术后复发的独立危险因素(P<0.05)。结论hsa_circ_0043459在垂体腺瘤组织中表达升高,且与垂体腺瘤术后复发呈正相关。

hsa_circ_0000520通过调控miR-556-5p/SLC38A2促进乳腺癌的发生和转移

目的:探究hsa_circ_0000520促进乳腺癌发生和转移的作用机制。方法:双荧光素酶报告基因实验、RNA pull-down实验验证miR-556-5p与hsa_circ_0000520、溶质载体家族38成员2(SLC38A2)的靶向关系。MCF7细胞分为sh-NC组、sh-hsa_circ_0000520组、sh-hsa_circ_0000520+anti-NC组、sh-hsa_circ_0000520+anti-miR-556-5p组,qRT-PCR或Western blot检测细胞中hsa_circ_0000520、miR-556-5p、SLC38A2表达水平;MTT检测、平板克隆形成实验评估细胞增殖能力;划痕愈合实验、Transwell实验评估细胞迁移、侵袭能力。通过裸鼠成瘤实验评估hsa_circ_0000520对miR-556-5p/SLC38A2的调控作用及对移植瘤生长的影响。结果:经验证,MCF7细胞中miR-556-5p与hsa_circ_0000520、SLC38A2均存在靶向关系。与sh-NC组比较,sh-hsa_circ_0000520组可降低MCF7细胞中hsa_circ_0000520、SLC38A2 mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、克隆形成数目、划痕愈合率及迁移、侵袭细胞数(P<0.05),升高miR-556-5p表达水平(P<0.05);与sh-hsa_circ_0000520+anti-NC组比较,sh-hsa_circ_0000520+anti-miR-556-5p组可降低MCF7细胞中miR-556-5p表达水平(P<0.05),升高SLC38A2 mRNA和蛋白表达水平、细胞活力、克隆形成数目、划痕愈合率及迁移、侵袭细胞数(P<0.05),而对hsa_circ_0000520表达无显著影响(P>0.05)。裸鼠成瘤实验结果表明,敲低移植瘤中hsa_circ_0000520的表达可升高miR-556-5p表达水平并降低SLC38A2 mRNA和蛋白表达水平,同时降低肿瘤体积和肿瘤重量(P<0.05)。结论:hsa_circ_0000520可能通过靶向调控miR-556-5p/SLC38A2促进乳腺癌的发生和转移。

人前体脂肪细胞分化过程及肥胖人群脂肪组织中hsa_circ_0017650高表达

目的探讨hsa_circ_0017650在人前体脂肪细胞分化过程以及肥胖人群脂肪组织中的表达变化。方法RT-qPCR测定人前体脂肪细胞分化第0/1/3/5/7/9/12天hsa_circ_0017650的水平变化;油红O染色观察人前体脂肪细胞分化第0/6/12天脂滴形成;RT-qPCR测定人前体脂肪细胞中CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4/ap2)和脂蛋白脂酶(LPL)mRNA水平;根据体质指数(BMI)将125例患者分为肥胖组和对照组,比较2组腹膜后白色脂肪组织hsa_circ_0017650表达差异;Pearson相关性分析hsa_circ_0017650表达水平与肥胖组患者BMI、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)相关性。结果培养第12天时人前体脂肪细胞中C/EBPα、FABP4/ap2和LPL水平均高于第0天(P<0.001);Hsa_circ_0017650表达呈时间依赖性,其中第3天达到峰值(P<0.001)。与对照组相比,肥胖组白色脂肪组织中hsa_circ_0017650水平及BMI、腰臀比、TC、TG、LDL-C水平以及升高(P<0.001);Hsa_circ_0017650与BMI、TG、LDL-C呈正相关(r=0.554、0.569、0.618,P<0.001)。结论Hsa_circ_0017650在人前体脂肪细胞分化过程以及肥胖人群白色脂肪组织中高表达,与患者肥胖密切相关,为肥胖患者的治疗提供靶点。

hsa_circ_0006404、miR-151-3p在胰腺癌组织中表达及其临床诊断价值

目的探讨胰腺癌组织中hsa_circ_0006404(circFOXO3)、微小RNA(mir)-151-3p表达水平及其与临床病理特征的关系,以及血清circFOXO3、miR-151-3p诊断胰腺癌的效能。方法以行手术治疗的100例胰腺癌患者为PC组,对照组为90例体检健康者。采用qRT-PCR技术检测癌组织及血清中circFOXO3、miR-151-3p表达变化,并分析与其临床病理特征的关系;比较血清miR-151-3p、circFOXO3诊断胰腺癌的效能。Pearson法分析circFOXO3与miR-151-3p的相关性。结果癌组织中circFOXO3表达水平(0.72±0.14)显著低于癌旁组织(1.01±0.17),miR-151-3p表达水平(1.89±0.36)显著高于癌旁组织(1.03±0.15)(P<0.05);低分化、Ⅲ期、淋巴结转移的胰腺癌癌组织circFOXO3表达水平低于中高分化、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移者,而miR-151-3p表达水平高于中高分化、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移者(P<0.05)。PC组血清circFOXO3表达水平(0.76±0.12)低于对照组(0.98±0.17),miR-151-3p表达水平(1.60±0.34)高于对照组(1.02±0.20)(P<0.05);癌组织和血清中circFOXO3与miR-151-3p表达均呈负相关(γ=-0.619、-0.610,P均<0.001)。circFOXO3、miR-151-3p诊断胰腺癌的曲线下面积分别为0.879、0.937,circFOXO3联合miR-151-3p诊断的曲线下面积为0.968。结论胰腺癌组织及血清中circFOXO3表达水平降低、miR-151-3p表达水平升高,circFOXO3、miR-151-3p表达与部分临床病理特征有关,血清circFOXO3联合miR-151-3p诊断胰腺癌的效能较佳。

hsa_circ_0001785在乳腺癌患者血清中的表达及临床意义研究

目的探讨hsa_circ_0001785在乳腺癌患者血清中的表达及临床意义。方法选择2021年9月至2022年3月广州医科大学附属第五医院甲乳外科收治的乳腺癌患者43例(乳腺癌组),乳腺良性肿瘤患者54例(良性肿瘤组),健康体检者45名(健康对照组)。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测其血清hsa_circ_0001785的相对表达量,并进行三组间比较。分析hsa_circ_0001785表达水平与乳腺癌患者临床病理特征的关联性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析hsa_circ_0001785诊断乳腺癌的效能。结果乳腺癌组血清hsa_circ_0001785表达水平显著高于良性肿瘤组和健康对照组(P<0.05),良性肿瘤组和健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清hsa_circ_0001785具有诊断乳腺癌的应用价值(AUC=0.780,P<0.05),且诊断效能优于癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)。乳腺癌患者血清hsa_circ_0001785的表达水平与其年龄、肿瘤类型、TNM分期、淋巴结受累、远处转移、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人类表皮生长因子受体2(HER2)均无显著关联(P>0.05)。结论hsa_circ_0001785在乳腺癌患者血清中高表达,有作为乳腺癌诊断分子标志物的潜力。

环状RNA hsa_circ_0001479在胃癌中的表达及功能研究

目的:探讨hsa_circ_0001479在胃癌(gastric cancer,GC)组织中的表达情况及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:建立实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测hsa_circ_0001479表达量的方法并进行方法学性能评价;通过RT-qPCR检测76对胃癌组织和配对癌旁组织中hsa_circ_0001479的表达水平并分析其表达量与临床病理参数的关系;构建针对hsa_circ_0001479的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和过表达载体,转染至胃癌细胞株,通过CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期分布,划痕实验检测细胞横向迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果:RT-qPCR检测hsa_circ_0001479表达量的方法具有良好的精密度、正确度和线性;hsa_circ_0001479在胃癌组织中表达增高且表达水平与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和CA19-9水平有关;细胞功能实验显示,在胃癌细胞株中干扰hsa_circ_0001479的表达可抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移,过表达hsa_circ_0001479则呈现相反的结果。结论:胃癌组织中高表达的hsa_circ_0001479具有促进胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的功能。