环状RNA hsacirc0000231与HnRNPK相互作用对乳腺癌增殖、迁移及凋亡的影响

目的 研究环状RNA hsa_circ_0000231与HnRNPK相互作用对乳腺癌增殖、迁移及凋亡的影响。方法 采用微阵列分析技术对4对乳腺癌组织及其癌旁组织的环状RNA表达谱进行分析。选取重庆医科大学附属第一医院2019年9月至2021年1月收治的乳腺癌患者癌组织标本35例,qRT-PCR验证hsa_circ_0000231的相对表达量,FISH实验检测其在细胞中的定位与表达。转染干扰质粒后,通过划痕、CCK-8、EdU、克隆形成、Hoechst33342、TUNEL、流式细胞仪和Transwell实验检测hsa_circ_0000231在乳腺癌细胞迁移、侵袭、增殖和细胞凋亡中的作用,Western blot检测CCND2、CCND1和CDK4的表达变化;在裸鼠体内研究hsa_circ_0000231对移植瘤生长的影响。RNA pulldown实验检测与hsa_circ_0000231作用的相关蛋白表达,FISH-IF实验观察hsa_circ_0000231与HnRNPK的亚细胞定位,qRT-PCR和Western blot检测c-Myc的表达变化。结果 hsa_circ_0000231在乳腺癌组织(P<0.001)和乳腺癌细胞(P<0.01)中高表达,敲低hsa_circ_0000231能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡及细胞周期G;期阻滞,CCND2、CCND1和CDK4蛋白表达明显下降。裸鼠移植瘤实验结果表明敲低hsa_circ_0000231可抑制移植瘤生长。HnRNPK蛋白与hsa_circ_0000231共定位于细胞核,且与hsa_circ_0000231相互作用能促进c-Myc的表达。结论 敲低hsa_circ_0000231能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期,并在体内抑制移植瘤生长,hsa_circ_0000231能够与HnRNPK相互作用增强c-Myc的表达,从而促进乳腺癌的发生和发展。

hsa_circ_0000231调控Wnt/β-catenin信号通路影响舌癌细胞的增殖和迁移

目的探讨hsa_circ_0000231在舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)发生、发展中的作用机制。方法收集2014年12月至2017年12月在南通大学附属医院和南通大学附属肿瘤医院收治并进行手术的舌癌患者60例(男32例,女28例,年龄36~84岁),唾液标本来自同时期的10例舌癌患者,以及10名健康志愿者(男5名,女5名,年龄40~75岁),3株舌癌细胞为TSCC常用工具细胞(CAL-27、Tca-8113、HN-4)。采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测60对新鲜配对TSCC组织、10对唾液标本及3株TSCC细胞系中的hsa_circ_0000231的表达;结合随访资料,分析hsa_circ_0000231相对表达量与患者临床病理特征及预后的关系。选择敲低效率最高的细胞行蛋白免疫印迹法(WB)、细胞计数试验(cell counting kit-8,CCK-8)、克隆形成、Transwell侵袭和划痕试验,研究TSCC细胞的增殖、侵袭、转移及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的能力;使用Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl与TSCC细胞共培养,WB检测并研究Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达变化。裸鼠成瘤实验比较皮下移植瘤的生长。使用SPSS 25.0统计分析软件行数据分析,组间比较采用t检验和χ^(2)检验。结果hsa_circ_0000231在TSCC患者组织、唾液标本及细胞系CAL-27、Tca-8113和HN-4中高表达,配对癌旁组织、健康人唾液标本及正常人类口腔黏膜细胞(human oral keratinocytes,HOK)中低表达(P值均<0.05)。单因素分析显示hsa_circ_0000231表达水平、肿瘤分化程度和T分级与TSCC患者的生存预后相关(P值均<0.05)。多因素Cox风险回归模型分析显示hsa_circ_0000231表达水平(χ^(2)=5.77,P=0.016)和T分级(χ^(2)=5.27,P=0.029)是TSCC患者预后不良的独立影响因子。WB显示,敲低hsa_circ_0000231表达可以显著提高CAL-27和Tca-8113细胞中EMT相关蛋白即E-钙黏蛋白的表达,并降低Snail、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达。与阴性对照组相比,干扰组细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、C-myc、Bcl-2、MMP-9和CyclinD1的表达被抑制,使用Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl与干扰组TSCC细胞共培养后,干扰组细胞中上述蛋白的表达趋势被逆转;细胞功能学证实敲低hsa_circ_0000231表达可以显著抑制CAL-27和Tca-8113细胞增殖、侵袭和转移能力;使用LiCl逆转了hsa_circ_0000231促进CAL-27和Tca-8113细胞迁移和侵袭的能力。裸鼠成瘤实验显示使用LiCl处理过的皮下移植瘤的质量和体积明显大于hsa_circ_0000231敲低组。结论hsa_circ_0000231是TSCC的独立预后因子,hsa_circ_0000231可以通过激活Wnt/β-catenin通路促进舌癌细胞的增殖、侵袭和转移。