副结核分枝杆菌hsp65基因的克隆及序列分析

以副结核分枝杆菌C-2株基因组DNA为模板,以hsp65基因特异性引物进行PCR扩增,获得了1 626 bp的DNA片段。通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T载体。经鉴定,成功地构建出了重组质粒pGEM-T-hsp65。序列分析结果表明:该序列与GenBank中副结核分枝杆菌K-10株的同源性为99.2%。

副结核分枝杆菌hsp65基因在大肠杆菌中的表达

本研究以EcoR Ⅴ和EcoR Ⅰ双酶切pGEM-T-hsp65和pET-32a(+),并将纯化的hsp65基因亚克隆至pET-32a(+)中,构建出原核表达载体pET-hsp65。将pET-hsp65转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见一条约76ku的外源蛋白带。Western blot分析表明,该蛋白具有与副结核分枝杆菌多克隆抗体发生反应的特性,为进一步研究有关hsp65的新型疫苗奠定了基础。

hsp65基因序列PCR-RFLP法鉴定130株临床分枝杆菌研究

目的探讨hsp65基因序列PCR-RFLP法用于临床分枝杆菌鉴定的诊断价值。方法用hsp65基因序列PCR-RFLP法鉴定经过传统方法鉴定过的130株临床分枝杆菌。结果130株临床分枝杆菌中,鉴定出结核分枝杆菌105株,戈登分枝杆菌4株、瘰痢分枝杆菌3株、耻垢分枝杆菌1株。用PCR-RFLP法,偶然分枝杆菌复合群和鸟胞分枝杆菌复合群进一步鉴定,偶然分枝杆菌2株、脓肿分枝杆菌2株、龟分枝杆菌4株、鸟分枝杆菌5株、胞分枝杆菌4株。结论hsp65基因序列PCR-RFLP法比传统方法有更高的准确性、敏感性、特异性和重复性,具有很好的临床应用价值。

基于hsp65基因的PCR技术在检测临床标本中结核杆菌的应用

目的:评价基于hsp65的多聚酶链反应(PCR)在快速检测结核分枝杆菌(MTB)中的应用。方法:从80例临床标本(68份痰标本,10份脑脊液,2份活检标本)中提取MTB基因DNA,设计针对hsp65基因的特异性引物,PCR扩增hsp65基因后用于琼脂糖凝胶电泳观察,同时选择部分阳性产物进行测序。结果:本方法的敏感性为86.44%,特异性为90.48%,阳性和阴性预测值分别为96.23%和70.37%。结论:基于hsp65的PCR能有效区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌,是一种简单有效的方法。

牛分支杆菌热休克蛋白65基因的分子克隆和表达

以牛型分枝杆菌Vallee菌株基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增热休克蛋白65(Hsp6S)基因,PER产物经纯化与EcoR Ⅰ/Sal Ⅰ双酶切后与经同样处理的原核表达载体pGEX-6P-1进行连接,转化感受态细胞BL21中,筛选和构建了原核重组表达质粒pGEX-H65,核苷酸序列测定验证其正确性。以1 Mol/LIPTG诱导,进行SDS-PAGE电泳。结果表明,Hsp65基因表达的融合蛋白GST-H65裂解为两部分;即64kD和22kD,两个蛋白分子量相加与预测的86kD(HsP60 kD+GST26 kD)相符。牛分支杆菌热休克蛋白HSP65的成功表达为其功能的研究打下基础。

结核杆菌HSP65 DNA疫苗的初步研究

目的构建以结核分枝杆菌热休克蛋白65 000 u基因为基础的核酸 疫苗。方法采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Rv株基因中，扩增出HSP65的编码基因，经限制性核酸内切酶消化后， 插入真核表达载体pcDNA3.1(-) 的相应酶切位点，并将此重组质粒免疫动物。结果 重组质粒的插入基因经序列测定证实为结核分枝杆菌HSP65。DNA免疫小鼠体内产 生特异性抗体。结论以HSP65编码基因为基础的真核表达载体构建成功,并能引起特异性动物免疫反应，为进一步研究其在结核病防治中的作用 奠定了基础。

胞内分枝杆菌热休克蛋白65基因的克隆和原核表达

本研究以胞内分枝杆菌ATCC13950株基因组DNA为模板,应用巢氏PCR方法扩增热休克蛋白65(HSP65)基因,PCR产物经纯化后与PMD18-T载体连接构建克隆质粒PMD18-T-HSP65,并转化大肠杆菌感受态细胞DH5,筛选阳性克隆并测序,NdeⅠ和BamHⅠ双酶切PMD18-T-HSP65和表达载体PET15b,用T4连接酶4℃过夜连接,转化大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)pLysS中,筛选和构建了原核重组表达质粒PET15b-HSP65,双酶切鉴定正确后,以终浓度为1mmol/LIPTG诱导并进行SDS-PAGE分析。结果表明,获得约65KD大小的蛋白,与预期结果相符,为胞内分枝杆菌及HSP65基因功能的研究打下基础。

278株非结核分枝杆菌临床株的菌种鉴定和克拉霉素的药敏实验结果

【摘要】本文的目的在于分析非结核分枝杆菌不同菌种的比例和对克拉霉素的药物敏感情况。278株非结核分枝杆菌临床株通过16S rRNA、rpoB和hsp65基因片被鉴定为不同菌种，克拉霉素通过微孔板Alamar蓝方法对不同菌种进行药敏实验，

一种鉴定常见分枝杆菌分离株的简单快速分子生物学方法

目的 :用分子生物学方法检测常见的分枝杆菌临床分离株 ,以适应临床分枝杆菌标本鉴定的需要。方法 :对 11株分枝杆菌参考株及 15 0株临床分离株用PCR RFLP的方法分析其hsp6 5基因。结果 :对结核分枝杆菌复合群和鸟分枝杆菌复合物鉴定的敏感性和特异性达 10 0 %。结论 :该方法简单、快速、经济 ,特别适用于标本量较大的临床实验室对分枝杆菌的鉴定。

用BPDA-PCR检测牛的流产布氏杆菌和牛分支杆菌

美国研究人员研制了一种BPDA-PCR法,可以用牛乳和鼻分泌物同时检测牛分支杆菌和流产布氏杆菌感染。这种方法根据对种特异性靶进行双扩增,流产布氏杆菌的种特异性靶为其BCSP31K基因的一个区,牛分支杆菌为其hsp65基因中的一个重复顺序区,然后对扩增子进行固相探针捕获杂交检测。用来自流产布氏杆菌和牛分支杆菌高度流行地区(印度。

肾移植患者胞内分枝杆菌感染的分子诊断

目的探讨肾移植患者非结核分枝杆菌(NTM)病临床特点及分子诊断。方法回顾性分析2011年4月1例皮肤软组织NTM感染的肾移植患者的临床特点,并以其病变组织DNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增hsp65基因和rpoB基因序列,测序比对鉴定其NTM菌种。结合文献复习NTM病及分析分子生物学技术在移植患者NTM感染诊断中的作用。结果该肾移植患者系皮肤软组织胞内分枝杆菌感染,临床特点与结核病极其相似,难以进行鉴别诊断。PCR扩增、测序的结果显示hsp65产物和rpoB产物序列与胞内分枝杆菌GeneBank中FJ643456.1及CP003324.1序列100%一致。结论 NTM病的临床表现与结核病相似,分子生物学方法鉴定菌种对移植患者胞内分枝杆菌病的诊断有帮助。