人BRE1B基因对眼B16黑色素瘤细胞生长的影响

目的构建人BRE1B基因真核表达载体,并初步探讨该基因对眼B16黑色素瘤细胞生长的影响。方法将传代培养的眼B16黑色素瘤细胞随机分为实验组(转染p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒)和对照组(转染p CMV质粒)。以乳腺癌文库为模板应用PCR技术扩增出人BRE1B基因的CDS编码区序列,构建p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒,将p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒和p CMV质粒瞬时转染眼B16黑色素瘤细胞后,应用Western blot法检测BRE1B蛋白的表达,应用CCK8法和克隆形成法检测该重组质粒对眼B16黑色素瘤细胞生长的影响。结果 PCR技术扩增出人BRE1B基因CDS编码区序列,且条带与预期大小一致;与对照组相比,菌液PCR鉴定结果为阳性,双酶切的条带长度分别为大约4000 bp和3050 bp,测序鉴定人BRE1B基因的编码序列与插入的DNA序列完全一致;Western blot结果表明p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒在实验组眼B16黑色素瘤细胞成功表达,对照组则未检测到特异条带;CCK8法和克隆形成法结果表明p CMV-Tag-2B-BRE1B重组质粒能够抑制眼B16黑色素瘤细胞的生长。结论本研究成功构建了带有p CMV-Tag-2B标签的人BRE1B基因真核表达载体,并发现该基因抑制眼B16黑色素瘤细胞的生长。