雷公藤多甙和白细胞介素-10对人树突状细胞表面人类白细胞抗原-DR和CD80表达及白细胞介素-12p40转录和分泌的影响

目的 :研究雷公藤多甙和 IL - 10对人树突状细胞 (DC)表面人类白细胞抗原 - DR(HL A- DR)和 CD80表达及 IL - 12 p40转录和分泌的影响。方法 :通过粒细胞 -巨噬细胞型集落刺激因子 (GM- CSF)、IL- 4和肿瘤坏死因子 α(TNF- α)体外培养体系 ,从人外周血单个核细胞中获得 DC,细胞表面 HL A- DR和 CD80表达采用流式细胞仪分析 ,IL - 12 p40转录和分泌分别采用逆转录多聚酶链反应 (RT- PCR)技术和 EL ISA法。结果 :雷公藤多甙 (5～ 2 0μg/ ml)、IL - 10 (5 0～ 2 0 0 ng/ ml)能下调 DC表面 HL A- DR和 CD80的表达 ,同时雷公藤多甙、IL- 10能抑制 DC内 IL- 12 p40 m RNA的转录和分泌。结论 :雷公藤多甙、IL- 10能通过抑制表面分子的表达和细胞因子的合成而干扰 DC的成熟和功能。

人乳头瘤病毒11型E7与共刺激分子CD80嵌合DNA疫苗质粒的构建及鉴定

目的:构建人乳头瘤病毒11型(HPV ll)E7与共刺激分子CDS0嵌合DNA疫苗质粒。方法:从尖锐湿疣病变组织中提取DNA制备模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增HPV ll-E7基因,经双酶切后定向克隆到pcDNA3.1(+)中,获得pcDNA3.1(+)/HPV llE7,测序鉴定后,再用PCR方法扩增去除终止密码子的E7基因片段,按上述方法插入质粒pcD-NA3.1(+)/CD80中CD80上游,构建pcDNA3.1(+)/HPV llE7-CD80融合基因真核表达质粒。结果:去除终止子的E7基因片段成功正向插入CD80上游,双向测序分析显示序列无误,pcDNA3.1(+)/HPV llE7-CD80嵌合真核表达质粒构建成功。结论:HPV ll-E7/CD80嵌合DNA疫苗质粒构建成功,为研究该疫苗在尖锐湿疣防治中的作用奠定了基础。

hTERT启动子调控的SEA-CD80基因共表达重组腺病毒载体的构建及在不同肿瘤细胞中的表达鉴定

目的:构建肿瘤靶向性葡萄球菌肠毒素A和CD80基因共表达重组腺病毒载体。方法:采用PCR技术从质粒pShuttle-AFP-CD80扩增人CD80全长cDNA片段,克隆至已构建载体pMD18-T-BIS,取代小鼠CD80 cDNA片段。重组质粒命名为pMD18-T-hBIS。经酶切,将CWV增强子修饰的人端粒酶反转录酶启动子从已构建载体pGL3-CWVE-hTP,亚克隆至穿梭质粒pShuttle2,然后经酶切将片段hCD80-IRES-SEA从pMD18-T-hBIS质粒亚克隆至CWV增强子修饰的人端粒酶反转录酶启动子下游,构建质粒pShuttle2-CE-hTP-hBIS。再与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化E.coli BJ5183,以获得的重组子(命名为Ad-CE-hTP-BIS)转染Ad293细胞制备病毒并纯化。将病毒分别感染人肝癌细胞H7721、宫颈癌细胞株Hela细胞和原代培养的人牙龈成纤维细胞,经免疫荧光染色后,激光共聚焦显微镜观察SEA和CD80在细胞膜的表达情况。结果:重组腺病毒能够使CD80和SEA在人肝癌细胞H7721、宫颈癌细胞株Hela细胞膜上共表达,而在人牙龈成纤维细胞中不表达。结论:成功地构建了多肿瘤靶向性SEA和CD80基因共表达重组腺病毒载体。为应用SEA和CD80基因对人多种肿瘤进行靶向基因治疗奠定了基础。

人共刺激分子B7-1/CD80胞外编码区cDNA的克隆及序列分析

用RT PCR法从人外周血单核细胞克隆了编码共刺激分子B7 1 /CD80胞外区的cDNA ,并用Sanger链终止法进行测序 .结果表明 ,所获cDNA片段的序列与GenBank中已报道的人B7 1 /CD80cDNA序列的对应部分仅有两个碱基存在差异( 6 58位A→T ,773位A→G) ,这为探讨B7 1

人胎儿胸腺内CD80和癌胚抗原的表达及定位

目的探讨人胎儿胸腺内CD80和癌胚抗原（CEA）的表达水平及定位与胎儿发育的关系。方法自附属医院妇产科收集流产死亡的胎儿12例,其中,小于4个月的4例列为早期,5个月的8例列为晚期。早晚期标本各分为两等份,一份制备冷冻切片进行HE染色、α-醋酸萘酯酶（ANAE）组织化学染色、CD80及CEA免疫组织化学染色,另一份以Trizol提取蛋白后进行CD80的免疫印迹和CEA的酶联免疫吸附测定（ELISA）检测。结果早期胎儿胸腺髓质发育差,晚期胎儿胸腺CD80阳性网状上皮细胞可分为6型：Ⅰ型扁平细胞分布于被膜内面和小梁表面;Ⅱ型呈小星形分布于皮质内;Ⅲ型及Ⅳ型呈扁平状,位于皮髓质交界处;Ⅴ型呈大星形状,突起多而细长相连成网状;Ⅵ型位于哈氏小体。在胎儿胸腺髓质网孔处可见ANAE点型（CD4＋CD8-）和散粒型（CD4-CD8＋）细胞各呈丛状分布。早期组CEA阳性分布于髓质上皮细胞和哈氏小体,晚期组CEA阳性更集中于哈氏小体。CD80的免疫印迹和CEA的ELISA检测皆显示晚期组表达高于早期组。结论研究结果提示,人胎儿胸腺内CD80和CEA的表达及定位与胎儿胸腺细胞的发育及功能密切相关。

卵巢上皮癌组织中HLAⅠ、CD54和CD80的表达及其临床意义

目的 :研究卵巢上皮癌 (OEC)组织中人类白细胞抗原Ⅰ (HLAⅠ )、CD54和CD80的表达及其临床意义。方法 :应用免疫组化法检测HLAⅠ和CD54的表达 ,用逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR)检测CD80mRNA的表达。结果 :4 4份OEC组织中 ,HLAⅠ、CD54的阳性表达率分别为 59.0 9%和 4 5.4 5%。CD80mRNA的表达率为 9.0 9%。HLAⅠ类分子的阳性表达在Ⅲ～Ⅳ期显著低于Ⅰ～Ⅱ期 (P <0 .0 5) ,有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组 (P <0 .0 5) ,肿瘤复发组显著低于未复发组 (P <0 .0 1)。CD54的表达率与临床指标及复发均无关 ,但在无HLAⅠ表达组 ,CD54表达患者的复发率显著升高 (P <0 .0 5)。CD80mRNA阳性 4例均未复发 ,而CD80mRNA阴性者复发率为 57.5% ,两组差异有显著性 (P <0 .0 5)。HLAⅠ与CD80同时缺乏时 ,患者复发率较HLAⅠ与CD80共表达时复发率显著升高 (P <0 .0 1)。结论 :OEC可能通过HLAⅠ、CD80、及CD54的异常表达逃避机体的免疫监视。检测上述调节分子的表达 。

人CD80胞外区在大肠杆菌中的表达和鉴定

目的在人大肠杆菌中表达人ＣＤ８０胞外区蛋白质。方法采用ＰＣＲ扩增人ＣＤ８０胞外区基因ｃＤＮＡ，先后经Ｋｌｅｎｏｗ和ＨｉｎｄⅢ酶切并纯化，再定向克隆至高效表达载体ｐＫｐＬ－３ａ中，构建成ｐＫｐＬ－ＣＤ８０。转化大肠杆菌ｐｏｐ２１３６后，温度诱导表达，再用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定之并检测其活性。结果转化菌表达出分子量为２４０００的蛋白质，免疫学鉴定为ＣＤ８０，并证实有一定生物学活性。结论大肠杆菌中可以成功表达出具有生物学活性的ＣＤ８０，为进一步研究和开发ＣＤ８０打下了基础。

人乳头瘤病毒11型DNA疫苗协同CD80基因诱导小鼠特异性免疫反应

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)11E7、L1-E7 DNA疫苗质粒协同共刺激分子CD80诱导的特异性免疫反应。方法将所构建的pcDNA3.1(+)/HPV11E7、E7-CD80、L1-E7 DNA疫苗质粒分别经肌内注射免疫小鼠,并设L1-E7质粒与CD80质粒共同注射组,PCR和RT-PCR检测质粒DNA的组织分布和目的基因RNA转录,MTT法测脾淋巴细胞增殖活性,ELISA检测脾淋巴细胞培养上清细胞因子的表达水平及血清抗体的水平。结果免疫小鼠后,质粒主要分布在注射部位。DNA疫苗诱导机体产生特异性脾淋巴细胞增殖和分泌IL-2、IFN-γ增加,产生HPV11E7 IgG/L1 IgG抗体;与CD80基因嵌合后,脾淋巴细胞增殖和分泌活性显著增强;与CD80联合免疫组所诱导的细胞免疫反应和体液免疫均显著强于L1-E7单独免疫组。结论HPV11 DNA疫苗能诱导小鼠产生特异性免疫反应,CD80可加强其免疫效果。

女性生殖道尖锐湿疣患者外周血淋巴细胞B7-CD28／CTLA-4的表达及意义

目的探讨B7-CD28/CTLA-4(cDl52)T淋巴细胞活化协同刺激分子在女性生殖道尖锐湿疣发病、发展及转归中的作用。方法用流式细胞仪检测30例女性生殖道尖锐湿疣患者和15例正常人外周血淋巴细胞中CD80/CD86及CD4^+/CD8^+T淋巴细胞中CD28/CDl52(CTLA-4)的表达。结果CD80/CD86及CD4^+、CD8^+/CD28阳性表达水平初发组(17例)、复发组(13例)与正常人对照组(15例)比较,差异无统计学意义;恢复组(15例)CD4^+、CD8^+/CD28及CD80阳性表达水平分别较复发组明显增高(P<0.05)。CD4^+、CD8^+/CD152在尖锐湿疣复发组和初发组阳性表达水平均较正常人对照组明显增高(P<0.05),且复发组较初发组进一步增高,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);恢复组CD4^+、CD8^+/CD152阳性表达水平较初发组及复发组明显降低(P<0.05),与正常人对照组比较差异无统计学意义。结论女性生殖道尖锐湿疣患者外周血淋巴细胞和CD4^+、CD8^+T淋巴细胞中B7-CD28/CTLA-4(CD152)表达异常,并与其病程发展关系密切。