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人FGF21原核表达载体的构建及重组蛋白表达 被引量:1
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作者 张礼林 唐青蓝 +2 位作者 许庆忠 雷霆雯 李红梅 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期218-222,共5页
构建人FGF21(fibroblast growth factor,FGF)cDNA的原核表达载体并诱导其重组蛋白表达。提取人肝脏总RNA后,经RT-PCR扩增获得目的片段,构建其T载体进行保存。再构建重组原核表达载体pET-28a(+)-h FGF21,重组质粒转化至大肠杆菌菌株BL21(... 构建人FGF21(fibroblast growth factor,FGF)cDNA的原核表达载体并诱导其重组蛋白表达。提取人肝脏总RNA后,经RT-PCR扩增获得目的片段,构建其T载体进行保存。再构建重组原核表达载体pET-28a(+)-h FGF21,重组质粒转化至大肠杆菌菌株BL21(DE3)中,在IPTG诱导下得到可溶性表达,采用亲和层析法纯化表达产物后,进行Western blot鉴定。成功构建重组质粒pET-28(+)-hFGF21,对其进行可溶性表达后成功纯化出his-hFGF21,经Western blot鉴定该融合蛋白可与FGF21抗体特异性结合。成功构建pET-28(+)-hFGF21,并可溶性表达his-hFGF21蛋白。 展开更多
关键词 人成纤维细胞生长因子(fgf21) 克隆 原核表达 蛋白纯化
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重组rHSA-hFGF21融合蛋白在毕赤酵母中的表达纯化及活性分析 被引量:3
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作者 黄甜甜 齐剑英 +1 位作者 杨刚刚 叶贤龙 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期3419-3432,共14页
人成纤维细胞生长因子21(human fibroblast growth factor 21,hFGF21)已成为改善血糖和脂质代谢的候选药物,但却存在半衰期短和易被体内代谢等缺点,导致靶组织利用率低,限制了其临床应用。本研究通过柔性连接肽(GGGGS)_(3)将hFGF21的N... 人成纤维细胞生长因子21(human fibroblast growth factor 21,hFGF21)已成为改善血糖和脂质代谢的候选药物,但却存在半衰期短和易被体内代谢等缺点,导致靶组织利用率低,限制了其临床应用。本研究通过柔性连接肽(GGGGS)_(3)将hFGF21的N端连接至人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的C端,经过毕赤酵母密码子优化后,将重组基因片段rHSA-hFGF21连入pPIC9k和pPICZαA两种载体,并转化到X33、GS115和SMD1168三种不同酵母菌株中。通过加压筛选得到高表达的X33-pPIC9K-rHSA-hFGF21工程菌株,并优化摇瓶诱导条件如OD值、甲醇浓度和诱导时间进一步提高rHSA-hFGF21的表达效率。培养上清经中空纤维膜切向流技术粗分离、Blue亲和层析和Q离子交换层析纯化获得纯度约98.18%的rHSA-hFGF21蛋白。与hFGF21相比,rHSA-hFGF21具有更好的热稳定性和抗胰蛋白酶降解的能力,其血浆半衰期也延长了约27.6倍;中高浓度条件下rHSA-hFGF21刺激HepG2细胞摄取葡萄糖的能力优于hFGF21;在2型糖尿病动物中rHSA-hFGF21比hFGF21具有更好的长效降糖效果。本研究将为FGF21蛋白的大规模生产奠定基础。 展开更多
关键词 成纤维细胞生长因子21(fgf21) 人血白蛋白(HSA) 融合蛋白 毕赤酵母 糖尿病
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重组人成纤维细胞生长因子21慢病毒质粒的构建及鉴定 被引量:1
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作者 陈瑜 徐丽兰 +6 位作者 杨建波 马开利 和占龙 马进 李鸿钧 吴正存 鲁帅尧 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第7期677-681,共5页
目的构建人成纤维细胞生长因子21(human fibroblast growth factor 21,h FGF21)重组慢病毒质粒,并进行包装和鉴定。方法 PCR扩增人FGF21 ORF序列,经Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切后,连接至慢病毒载体PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro,构建重组慢病毒质粒... 目的构建人成纤维细胞生长因子21(human fibroblast growth factor 21,h FGF21)重组慢病毒质粒,并进行包装和鉴定。方法 PCR扩增人FGF21 ORF序列,经Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切后,连接至慢病毒载体PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro,构建重组慢病毒质粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-h FGF21,经293T细胞包装为重组慢病毒颗粒,并感染KMB17靶细胞。荧光显微镜观察293T细胞中报告基因EGFP的绿色荧光,判断重组慢病毒的感染效率;RT-PCR法检测KMB17靶细胞中h FGF21基因m RNA的转录;免疫荧光和Western blot法检测KMB17靶细胞中h FGF21蛋白的表达。结果重组慢病毒质粒PLV-EF1a-EGFP[2A]Puro-h FGF21经双酶切及测序鉴定,证明构建正确,在包装细胞中获得较高的转染效率,重组慢病毒感染KMB17靶细胞72 h后,荧光显微镜下可见EGFP绿色荧光。感染组KMB17靶细胞中存在h FGF21基因m RNA的转录和蛋白的表达。结论成功构建了重组慢病毒质粒PLV-EF1aEGFP[2A]Puro-h FGF21,并于KMB17靶细胞中表达,为FGF21功能与特性的相关研究及基因工程药物的探索和研发奠定了基础。 展开更多
关键词 人成纤维细胞生长因子21 慢病毒质粒 KMB17细胞
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Relationship between fibroblast growth factor 21 and thyroid stimulating hormone in healthy subjects without components of metabolic syndrome
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作者 Tianxu Fu Shanshan Yuan +6 位作者 Ying Gao Chenxue Qu Lan Chen Yan Hui Guizhi Lu Yanming Gao Xiaohui Guo 《Family Medicine and Community Health》 2014年第3期1-6,共6页
Objective:To determine the relationship between human fibroblast growth factor 21(FGF21)and thyroid stimulating hormone(TSH)by testing the level of FGF21,lipid metabolism,and car-bohydrate metabolism-related indices,a... Objective:To determine the relationship between human fibroblast growth factor 21(FGF21)and thyroid stimulating hormone(TSH)by testing the level of FGF21,lipid metabolism,and car-bohydrate metabolism-related indices,as well as the level of TSH,among metabolic syndrome-free patients with normal physical examination results.Methods:An enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)was used to test the levels of serum FGF21 and free fatty acids(FFA)in metabolic syndrome-free patients with normal physi-cal examination results,and electrochemiluminescence(ECLIA)was used to measure TSH,thy-roglobulin antibodies(TGAbs),and thyroid peroxidase antibody(TPOAb)levels.Results:Three hundred fifty-six metabolic syndrome-free patients(116 males and 240 females;average age,43±13 years)with normal physical examination results were enrolled.Among the pa-tients with normal physical examination results,FGF21 had a weak relationship with obesity indices,such as the waist circumference(r=0.110,P=0.038),the waist-to-hip ratio(r=0.119,P=0.025),and the triglycerides level(TG;r=0.302,P=0.000),and a weak relationship with blood lipid levels,such as total cholesterol(TCHO;r=0.113,P=0.012)and low-density lipoprotein-cholesterol(LDL-C;r=0.175,P=0.001),but no relationship with TSH(r=-0.023,P=0.666).In addition,the FGF21 levels in thyroid autoantibody-positive and-negative groups were not significantly different.Conclusion:Among the metabolic syndrome-free patients with normal physical examina-tion results,FGF21 has no apparent relationship with TSH or thyroid autoimmunity. 展开更多
关键词 human fibroblast growth factor 21(fgf21) Thyroid stimulating hormone(TSH) AUTOIMMUNITY Free fatty acids(FFA)
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