应用AdMax载体系统构建SCL基因重组腺病毒表达载体

目的用AdMax载体系统构建人SCL基因重组腺病毒载体,为研究SCL基因对ICC样细胞功能恢复奠定基础。方法采用PCR方法从含人SCL基因质粒中扩增SCL基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,构建重组穿梭质粒pDC315-EGFP/SCL,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1、3Cre共转染293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pDC315-SCL经HEK293细胞扩增,纯化后测定病毒滴度。结果 PCR结果和Western blotting检测证实pDC315-SCL重组腺病毒载体构建成功,滴度达到1×1010PFU/mL。结论 AdMax载体系统可成功构建pDC315-SCL重组腺病毒载体。

人SCL基因pDC315-EGFP真核表达载体的构建及意义

目的构建含有人SCL基因的pDC315-EGFP真核表达载体,为糖尿病膀胱病变(DCP)的治疗提供新思路。方法从含有人SCL基因的质粒中,采用PCR方法扩增SCL基因,将目的载体pDC315-EGFP进行酶切后交换,其产物转化细菌感受态细胞,对克隆产物进行菌落PCR鉴定,对阳性克隆产物进行测序和比对分析,比对正确的克隆即为构建成功的质粒。结果 PCR扩增的基因片段长度为1 036 bp,测序结果以及重组质粒pDC315-EGFP-SCL阳性克隆凝胶电泳鉴定均证明SCL基因成功克隆到真核表达载体中。结论成功构建了真核表达载体pDC315-EGFP-SCL,该载体有望用于DCP的治疗。