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正常和龋病牙髓中von Willebrand因子阳性血管的研究
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作者 郝玉梅 郝占国 +1 位作者 靳立巾 毕伟东 《现代中西医结合杂志》 CAS 2004年第3期293-294,共2页
目的 研究人龋病牙髓中vonWillebrand因子阳性血管在龋病自然进程中的变化特点 ,为探讨牙髓局部微循环系统如何参与牙髓的各种病理改变提供理论基础。方法 用免疫组织化学染色的方法标记牙髓中血管内皮并进行定量研究。结果 正常及... 目的 研究人龋病牙髓中vonWillebrand因子阳性血管在龋病自然进程中的变化特点 ,为探讨牙髓局部微循环系统如何参与牙髓的各种病理改变提供理论基础。方法 用免疫组织化学染色的方法标记牙髓中血管内皮并进行定量研究。结果 正常及龋病牙髓中均存在阳性血管 ,随龋病进展 ,管壁增厚 ,管腔扩大 ,数目增多 ,各组间比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 血管内皮细胞通过分泌Ⅷ因子相关抗原 ,参与调节牙髓免疫应答和修复过程。 展开更多
关键词 龋病 人牙髓 von willebrand因子 免疫组织化学染色
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过表达vWF对人脐静脉内皮细胞生物学影响的实验研究
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作者 张龙飞 陈世远 +3 位作者 冯奔驰 刘德朗 张秀杨 高涌 《蚌埠医学院学报》 CAS 2024年第3期281-285,290,共6页
目的:探讨过表达血管性血友病因子(vWF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移、侵袭、凋亡及成管能力的影响。方法:设计构建5种过表达vWF的质粒CRISPRa载体,将HUVECs分为实验组(5组)与对照组。将5种质粒分别转染实验组细胞,Western blo... 目的:探讨过表达血管性血友病因子(vWF)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移、侵袭、凋亡及成管能力的影响。方法:设计构建5种过表达vWF的质粒CRISPRa载体,将HUVECs分为实验组(5组)与对照组。将5种质粒分别转染实验组细胞,Western blotting检测各组细胞vWF的表达效果,选取优势组。通过细胞增殖实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验、细胞凋亡实验、细胞成管实验等,观察过表达vWF对HUVECs增殖、迁移、侵袭、凋亡及成管能力的影响。Western blotting检测5个常见通路蛋白因子在2组细胞中的表达,探测可能相关的机制。结果:成功转染后各组HUVECs的vWF蛋白表达水平均明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。其中vWF-OE4组过表达量最高,故选取该引物序列进行后续实验。与对照组相比,vWF-OE组细胞增殖减慢,细胞划痕48 h迁移率降低、Transwell细胞侵袭率降低(P<0.05),细胞凋亡率、血管形成能力、HUVECs生成小管的长度均增高(P<0.05),JUN、P53蛋白含量均增高(P<0.05)。结论:过表达vWF对HUVECs增殖、迁移、侵袭行为具有显著抑制作用,促进凋亡,成管能力增强。 展开更多
关键词 布加综合征 血管血友病因子 人脐静脉内皮细胞
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人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物制备工艺中除菌滤器的选择
3
作者 郭全娟 周安 +4 位作者 刘文杰 徐一轲 史文强 陈晨 菅长永 《中国输血杂志》 CAS 2023年第6期483-487,共5页
目的筛选适用于人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物(FⅧ/VWF)的除菌滤器,对除菌过滤工艺进行研究。方法采用过滤量、过滤通量、FⅧ效价回收率、VWF效价回收率、VWF抗原回收率、蛋白质回收率、VWF分子分布等指标,评估4种除菌级滤器过滤... 目的筛选适用于人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物(FⅧ/VWF)的除菌滤器,对除菌过滤工艺进行研究。方法采用过滤量、过滤通量、FⅧ效价回收率、VWF效价回收率、VWF抗原回收率、蛋白质回收率、VWF分子分布等指标,评估4种除菌级滤器过滤FⅧ/VWF复合物的效果。选择其中过滤性能最优的除菌滤器,以过滤总蛋白量、蛋白回收率、过滤效率作为指标,通过一般全因子设计试验,确定适宜的过滤蛋白浓度和过滤速度范围,从而确定工艺操作参数。结果Sartobran P、Sartopore 2 XLG、Sartopore Platinum和Sartopore 2 XLI过滤通量分别为1.71±0.01,1.80±0.01,1.34±0.01,1.81±0.04 L·(m^(2))^(-1)·min^(-1);FⅧ效价回收率(%)分别为97.09±2.82,99.22±0.99,96.87±1.85,93.76±1.21,VWF效价回收率(%)分别为98.12±1.42,99.95±1.85,94.80±1.62,92.09±1.67。Sarto⁃pore 2 XLG与Sartobran P相比,过滤通量(P=0.0004,P<0.001)具统计学意义;与Sartopore Platinum相比,过滤通量(P=5.9ⅹ10-7,P<0.001)、VWF效价回收率(P=0.02,P<0.05)具统计学意义;与Sartopore 2 XLI相比,FⅧ效价回收率(P=0.004,P<0.01)、VWF效价回收率(P=0.005,P<0.01)具统计学意义。Sartopore 2 XLG的最优工艺操作空间为:蛋白浓度0.45~0.58mg/mL,过滤速度为1.48~2.95L·(m^(2))^(-1)·min^(-1)。结论适合FⅧ/VWF复合物除菌过滤的滤器为Sartopore 2 XLG,DoE试验证明Sartopore 2 XLG具有良好的工艺操作空间。 展开更多
关键词 人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物 除菌滤器 工艺操作空间
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离子交换层析法对人血管性血友病因子中人纤维连接蛋白去除效果的研究
4
作者 周铮 张学成 +2 位作者 王明华 李佳雯 马小伟 《中国输血杂志》 CAS 2023年第3期266-268,共3页
目的通过层析工艺处理人凝血因子Ⅷ层析洗涤制品,采用离子交换层析法对人血管性血友病因子(vWF)中人纤维连接蛋白(Fn)去除效果进行研究,以期在不改变活性收率条件下,选择1种能够有效降低Fn的方法。方法在多批次的工艺开发实验中,采用德... 目的通过层析工艺处理人凝血因子Ⅷ层析洗涤制品,采用离子交换层析法对人血管性血友病因子(vWF)中人纤维连接蛋白(Fn)去除效果进行研究,以期在不改变活性收率条件下,选择1种能够有效降低Fn的方法。方法在多批次的工艺开发实验中,采用德国默克公司生产的Fractogel■EMD TMAE(M)强阴离子填料进行层析,考察了vWF瑞斯托霉素效价(vWF:RCof)、vWF回收率、蛋白质含量和Fn含量。结果在vWF小试纯化工艺开发过程中,经过离子交换层析工艺能有效降低样品中Fn含量,去除率达到87%以上,vWF效价回收率达到80%以上,其他质量指标未发生明显变化。结论使用离子交换层析纯化vWF,能够有效降低Fn含量,对于开发新产品工艺和提高血液制品生产企业产品质量具有积极意义。 展开更多
关键词 人血管性血友病因子 离子交换层析 人纤维连接蛋白 vWF效价回收率 Fn去除率
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我国人凝血因子Ⅷ制品中血管性血友病因子效力分析 被引量:2
5
作者 杜晞 马莉 +7 位作者 王宗奎 叶生亮 刘凤娟 张容 苏娜 林方昭 曹海军 李长清 《中国输血杂志》 CAS 2021年第6期574-578,共5页
目的获得国内人凝血因子Ⅷ(FⅧ)制品中血管性血友病因子(vWF)的效力信息。方法获得国内7家及国外1家血液制品厂生产的FⅧ制品,检测其中FⅧ和vWF各项指标。结果国内7家FⅧ制品中有2个厂家FⅧ制品中vWF活性损失超过25%;国内不同厂家FⅧ制... 目的获得国内人凝血因子Ⅷ(FⅧ)制品中血管性血友病因子(vWF)的效力信息。方法获得国内7家及国外1家血液制品厂生产的FⅧ制品,检测其中FⅧ和vWF各项指标。结果国内7家FⅧ制品中有2个厂家FⅧ制品中vWF活性损失超过25%;国内不同厂家FⅧ制品中vWF活性与FⅧ活性比值差异较大,P<0.05。C、D、F厂家制品中vWF活性与FⅧ活性比值>1,与国外批准用于治疗vWD的FⅧ制品wilate@相似。而E厂家制品中此比值>0.7且<1,A、B、G厂家制品中此比值<0.5;另外,国内不同厂家FⅧ制品中FⅧ、vWF比活差异较大,P<0.05,且其中FⅧ、vWF比活远低于wilate@。结论国内FⅧ制品中vWF质量与wilate@的差距主要是vWF含量的差距。从各项指标综合考虑国内C、D厂家制品有用于治疗vWD的可能。 展开更多
关键词 血管性血友病因子 人凝血因子Ⅷ制品 血管性血友病 vWF多聚体
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ECV304细胞可作为一般模型、工具或靶用于生物医学和药学研究(英文) 被引量:19
6
作者 吴其夏 邱劲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期139-142,共4页
ECV304 was reported first in 1990 as a spont aneously-transformed and immortalized cell line derived from a Japanese HUVEC. S ubsequently, many studies validated that the ECV304 is a permanent endothelial cell line. I... ECV304 was reported first in 1990 as a spont aneously-transformed and immortalized cell line derived from a Japanese HUVEC. S ubsequently, many studies validated that the ECV304 is a permanent endothelial cell line. It has been used widely as an endothelial cell model and an useful re search tool in biomedicine and pharmacology. However, several distinct differenc es exist between ECV304 and HUVEC. Some studies even pointed out that ECV304 is not of HUVEC origin. According to the research data including ours, this reporte dly endothelial-derived permanent human cell line ECV304 may be dedifferentiated towards an epithelial phenotype. It is therefore not an appropriate cell line t o study endothelial cell biology. But cultured ECV304 cells can still be used as a model, tool or target in the pathophysiological and pharmacological studies, depending on whether or not their functional expression or markers are suitable for the research work. 展开更多
关键词 ECV304细胞 生物医学 药学 医学实验
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丹参多酚酸盐对人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶表达的影响 被引量:1
7
作者 蒋丽琼 卢国元 《临床肾脏病杂志》 2013年第7期325-328,共4页
目的观察丹参多酚酸盐对人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶表达的影响,初步分析其意义。方法肾小管上皮细胞体外培养,将细胞接种在培养瓶中,待细胞融合至80%~90%时,更换含有丹参多酚酸盐终浓度分别为0、0.1、0.5、1.0、... 目的观察丹参多酚酸盐对人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶表达的影响,初步分析其意义。方法肾小管上皮细胞体外培养,将细胞接种在培养瓶中,待细胞融合至80%~90%时,更换含有丹参多酚酸盐终浓度分别为0、0.1、0.5、1.0、2.0mg/L的培养基,培养24h后,收集人肾小管上皮细胞并提取mRNA,转化为CDNA,用实时定量荧光聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶mRNA的表达,并经凝胶成像行半定量分析。结果以空白对照人肾小管上皮细胞表达的血管性血友病因子裂解酶mRNA量为参照1,则0.1、0.5、1.0、2.0mg/L浓度丹参多酚酸盐共培养后的人肾小管上皮细胞表达的血管性血友病因子裂解酶mRNA依次为2.39、3.05、4.65和6.65,数据为重复2次实验的平均值。结论人肾小管上皮细胞可表达血管性血友病因子裂解酶mRNA,丹参多酚酸盐能增加人肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶的表达。丹参多酚酸盐对肾小管上皮细胞血管性血友病因子裂解酶的调节可能会影响肾脏局部循环的出血、凝血状态,可能是丹参多酚酸盐的药理机制之一。 展开更多
关键词 血管性血友病因子裂解酶 丹参多酚酸盐 人近端肾小管上皮细胞
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STAT6介导白细胞介素-13诱导巨核细胞系HEL细胞血小板膜糖蛋白Ⅱb和血管性血友病因子的表达
8
作者 石小玉 李文林 +2 位作者 蔡伟 周莹 唐洪林 《解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期329-332,共4页
目的:探索信号转导子和转录激活因子6(STAT6)介导白细胞介素-13(IL-13)对巨核细胞系-人红白血病HEL细胞(HEL)血小板膜糖蛋白Ⅱb(GPⅡb)和血管性血友病因子(vWF)表达的作用,部分阐明IL-13的信号转导通路。方法:RT-PCR检测GP... 目的:探索信号转导子和转录激活因子6(STAT6)介导白细胞介素-13(IL-13)对巨核细胞系-人红白血病HEL细胞(HEL)血小板膜糖蛋白Ⅱb(GPⅡb)和血管性血友病因子(vWF)表达的作用,部分阐明IL-13的信号转导通路。方法:RT-PCR检测GPⅡb和vWF mRNA的表达,免疫印迹法检测磷酸化的STAT6、GPⅡb和vWF蛋白的表达,图像分析检测电泳条带吸光度。结果:IL-13(100μg/L)作用HEL细胞,使HEL细胞STAT6磷酸化,磷酸化抑制剂A77-1726(50μmol/L)阻断了IL-13诱导的HEL细胞STAT6磷酸化。IL-13(100μg/L)上调了HEL细胞GPⅡb和vWF mRNA和蛋白的表达,A77-1726(50μmol/L)抑制了STAT6介导的IL-13诱导HEL细胞GPⅡb和vWF mRNA和蛋白的表达。结论:IL-13上调了HEL细胞GPⅡb和vWF的表达,STAT6介导了IL-13上调HEL细胞GPⅡb和vWF的表达。 展开更多
关键词 信号转导子与转录激活子6 白细胞介素-13 人红白血病细胞 血小板膜糖蛋白Ⅱb 血管性血友病因子
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高糖对人脐静脉内皮细胞ET-1、vWF表达的影响
9
作者 肖国华 洪丽 +3 位作者 余坚 张素君 尹卫东 王宗保 《中南医学科学杂志》 CAS 2012年第1期31-35,共5页
目的探讨体外培养条件下高糖状态对人脐静脉内皮细胞假性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)、内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)表达的影响。方法体外培养,利用高浓度葡萄糖诱导内皮细胞HUVEC-12细胞株功能损伤。实验分为正常对照组、... 目的探讨体外培养条件下高糖状态对人脐静脉内皮细胞假性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)、内皮素-1(Endothelin-1,ET-1)表达的影响。方法体外培养,利用高浓度葡萄糖诱导内皮细胞HUVEC-12细胞株功能损伤。实验分为正常对照组、低剂量高糖组、中剂量高糖组和高剂量高糖组,普通光镜和Hoechst 33258荧光染色观察HUVEC-12细胞形态和核形态的变化;逆转录-聚合酶链式反应检测细胞内ET-1、vWF mRNA的表达;细胞免疫荧光检测细胞内ET-1、vWF蛋白水平的改变。结果与对照组细胞比较,不同浓度高糖处理内皮细胞72 h后,普通光学显微镜下观察到,细胞数目减少,圆形细胞明显增多,细胞间隙增宽,细胞边界不清;Hoechst33258染色结果表明有细胞核浓缩、出现高亮度蓝色荧光的凋亡细胞,并呈剂量依赖性损伤细胞;细胞ET-1、vWF mRNA及蛋白表达上调。结论高糖对人脐静脉内皮细胞有显著的损伤作用,可能与vWF、ET-1表达升高有关。 展开更多
关键词 人脐静脉内皮细胞 高糖 假性血友病因子 内皮素-1
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血管性血友病因子、整合素β_3在人肺癌细胞H460中的表达及其与肿瘤转移的相关性 被引量:5
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作者 张立 刘伟 +2 位作者 杨爱军 王晨昱 李敏 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2008年第4期271-275,共5页
背景与目的:血管性血友病因子(von Willebr and factor,vWF)、整合素β3(integrinβ3)与肿瘤转移的机制目前研究不清楚。本研究目的是观察vWF与integrinβ3在人肺癌细胞H460中的表达,人肺癌细胞H460与vWF黏附的关系,两因子与肿瘤轻移的... 背景与目的:血管性血友病因子(von Willebr and factor,vWF)、整合素β3(integrinβ3)与肿瘤转移的机制目前研究不清楚。本研究目的是观察vWF与integrinβ3在人肺癌细胞H460中的表达,人肺癌细胞H460与vWF黏附的关系,两因子与肿瘤轻移的相关性及vWF与integrinβ3的相互关系。方法:①应用免疫组化技术观察vWF及integrinβ3在人肺癌细胞株H460的表达;②联合应用vWF黏附实验、抗体抑制实验及MTT法,观察vWF及integrinβ3与人肺癌细胞H460的黏附,及vWF与integrinβ3的相互关系。结果:①免疫组化结果显示H460细胞均表达vWF及integrinβ3。②vWF可以与H460细胞黏附,Anti-integrinβ3抑制后这种黏附降低,A值由1.59±0.06降到0.55±0.03,(P=0.01619),Anti-vWF抑制后这种黏附也降低,A值由1.60±0.06降到0.54±0.03,(P=0.01598),两者抑制黏附效果相同。结论:H460细胞表达vWF及integrinβ3,vWF可以与H460细胞黏附,vWF可能通过与integrinβ3结合发挥黏附作用,从而促进肿瘤细胞转移。 展开更多
关键词 血管性血友病因子 整合素Β3 人肺癌细胞株H460 黏附 肿瘤转移
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一步离子交换层析制备人血管性血友病因子/人凝血因子Ⅷ蛋白液 被引量:1
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作者 陈新朋 匡青芬 +3 位作者 罗二华 梁小明 刘敏亮 龚佳莉 《中国输血杂志》 CAS 2020年第11期1147-1150,共4页
目的研究通过一步离子交换层析法,制备vWF∶Rco/FⅧ∶C≈1的人血管性血友病因子/人凝血因子Ⅷ蛋白液。方法选用Toyopearl? DEAE-650填料,取同一批次的人血管性血友病因子(vWF)上柱前液,研究不同上样量、不同洗脱液盐浓度对洗脱液中人血... 目的研究通过一步离子交换层析法,制备vWF∶Rco/FⅧ∶C≈1的人血管性血友病因子/人凝血因子Ⅷ蛋白液。方法选用Toyopearl? DEAE-650填料,取同一批次的人血管性血友病因子(vWF)上柱前液,研究不同上样量、不同洗脱液盐浓度对洗脱液中人血管性血友病因子抗原(vWF∶Ag)、人凝血因子Ⅷ效价(FⅧ∶C)、人血管性血友病因子效价(vWF∶Rco)的影响。结果从得率考虑,上样量最佳为4-5倍柱体积;洗脱液盐浓度0.42 mol/L时,vWF∶Rco/FⅧ∶C≈1∶1,vWF回收率≈60%,为最佳配方。结论在本试验层析条件前提下,调节洗脱液中盐浓度0.42 mol/L,可获得vWF∶Rco/FⅧ∶C≈1∶1的vWF/FⅧ蛋白液。 展开更多
关键词 人血管性血友病因子 人凝血因子Ⅷ 效价
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电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物冻干注射剂中的21种元素 被引量:2
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作者 姜树银 张迅杰 +4 位作者 张乃斌 李春焕 贺美莲 石峰 咸瑞卿 《药学研究》 CAS 2021年第10期648-651,共4页
目的建立电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)同时测定人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物冻干注射剂中硼(B)、镁(Mg)、铝(Al)、硅(Si)、钒(V)、镉(Cr)、锰(Mn)、铁(Fe)、钴(Co)、镍(Ni)、铜(Cu)、锌(Zn)、锶(Sr)、锆(Zr)、钼(Mo)、铑(Rh)、... 目的建立电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)同时测定人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物冻干注射剂中硼(B)、镁(Mg)、铝(Al)、硅(Si)、钒(V)、镉(Cr)、锰(Mn)、铁(Fe)、钴(Co)、镍(Ni)、铜(Cu)、锌(Zn)、锶(Sr)、锆(Zr)、钼(Mo)、铑(Rh)、钯(Pd)、锡(Sn)、钡(Ba)、铈(Ce)、铅(Pb)元素含量的方法。方法样品经微波消解后,以钪(Sc)、锗(Ge)、铟(In)、铋(Bi)为内标,采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法同时测定上述元素的含量。ICP-MS功率为1550 W,采样深度为10.0 mm,等离子气、雾化气、辅助气流量分别为15.0、0.99、0.9 L·min^(-1),泵速为0.10 r·s^(-1),雾化室温度为2℃,硼(B)元素采用No Gas调谐模式,其他元素采用He调谐模式,数据采集3次。结果21种元素在测定的浓度范围内,线性关系良好,相关系数r>0.9990;检出限为0.001~2.04μg·L^(-1);各元素回收率为87.78%~102.72%,RSD为1.31%~7.91%。结论该方法快速简便、灵敏度高、准确性好,可用于人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物冻干注射剂中金属元素的检测。 展开更多
关键词 金属元素 微波消解 人凝血因子Ⅷ/血管性血友病因子复合物冻干注射剂 电感耦合等离子体质谱
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不同配方的冻干保护剂对人血管性血友病因子制品的冻干及干热工艺的影响
13
作者 陈新朋 匡青芬 +2 位作者 梁小明 罗二华 陈婷婷 《中南药学》 CAS 2020年第6期974-977,共4页
目的研究不同配方的冻干保护剂对人血管性血友病因子(vWF)冻干及干热的影响。方法取同一批次的vWF中间品,分别用不同配方的冻干保护剂等体积透析,除菌过滤后进行冻干、干热灭活[(99.5±0.5)℃,30 min],测定冻干及干热后vWF的外观、... 目的研究不同配方的冻干保护剂对人血管性血友病因子(vWF)冻干及干热的影响。方法取同一批次的vWF中间品,分别用不同配方的冻干保护剂等体积透析,除菌过滤后进行冻干、干热灭活[(99.5±0.5)℃,30 min],测定冻干及干热后vWF的外观、复溶时间、可见异物、抗原及效价。结果配方G对冻干及干热过程中vWF稳定效果最好,冻干及干热后外观、复溶时间、可见异物、抗原、效价5个指标最优。结论配方G可作为vWF的冻干保护剂。 展开更多
关键词 人血管性血友病因子 冻干 干热 效价
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中国血浆蛋白制品的展望 被引量:4
14
作者 菅长永 董方玉 +7 位作者 陈晨 周安 周久越 董雪 张翠萍 宋佃卫 周波 马山 《中国输血杂志》 CAS 2022年第2期227-232,共6页
血浆蛋白制品是从健康人血浆提取的用于临床治疗的生物制品,为多种疾病的必需药品。全球以美国、欧洲为首的血浆蛋白新制品的开发已呈全面且深入的状态,这对加快研发中国血浆蛋白新制品具有重要的启示意义。本文总结了国外已投入临床使... 血浆蛋白制品是从健康人血浆提取的用于临床治疗的生物制品,为多种疾病的必需药品。全球以美国、欧洲为首的血浆蛋白新制品的开发已呈全面且深入的状态,这对加快研发中国血浆蛋白新制品具有重要的启示意义。本文总结了国外已投入临床使用而中国尚未国产的血浆蛋白制品的研究现状,分析中国开发这类血浆蛋白制品难点并对其研发种类和应用前景作出展望。 展开更多
关键词 血浆蛋白制品 人免疫球蛋白 血管性血友病因子复合物 人活化凝血酶原复合物 人抗凝血酶Ⅲ 人C1酯酶抑制剂
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刮取法改良人原代大隐静脉内皮细胞的提取方法
15
作者 于瑞明 邴卫东 +2 位作者 刘春晓 孟祥斌 毕研文 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2023年第2期43-48,共6页
目的改良人原代大隐静脉内皮细胞的提取方法,为冠状动脉旁路移植术后静脉移植物衰败的研究提供细胞模型。方法传统酶消法(酶消组)和刮取法(刮取组,刮取酶消法后的大隐静脉内皮并进一步酶消)从人大隐静脉中提取内皮细胞。获得的内皮细胞... 目的改良人原代大隐静脉内皮细胞的提取方法,为冠状动脉旁路移植术后静脉移植物衰败的研究提供细胞模型。方法传统酶消法(酶消组)和刮取法(刮取组,刮取酶消法后的大隐静脉内皮并进一步酶消)从人大隐静脉中提取内皮细胞。获得的内皮细胞在含10%胎牛血清+1%内皮细胞生长补充剂+100 U/mL青霉素+100 mg/mL链霉素的内皮细胞培养基中传代培养。倒置显微镜观察内皮细胞形态和贴壁情况;血管性血友病因子(vWF)的免疫荧光实验鉴定内皮细胞特异性抗原;CD31流式细胞计数检测内皮细胞纯度;绘制不同观测日的内皮细胞生长曲线测定内皮细胞活性。结果显微镜下观察到两组大隐静脉内皮细胞贴壁汇合并且呈典型的鹅卵石样排列;免疫荧光实验证实培养的细胞vWF阳性表达;流式细胞计数结果显示,酶消组99.9%、刮取组89.2%的细胞阳性表达CD31;不同观测日的生长曲线结果显示,两组内皮细胞活性的主效应不显著(P=0.057)。两组内皮细胞均能够传至第7~8代。结论在传统酶消法的基础上增加刮取再消化的步骤,能够提取出数量更多且满足实验需要的原代人大隐静脉内皮细胞。 展开更多
关键词 人大隐静脉 内皮细胞 提取方法 血管性血友病因子 静脉移植物衰败
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血浆相关因子对重组FVIII稳定循环及降解途径的影响 被引量:1
16
作者 伍立恒 李德款 +4 位作者 连通 李成 林方昭 宋春雷 梁洪 《药物生物技术》 CAS 2023年第3期234-238,共5页
探究本研究中的重组人凝血因子VIII(rhFVIII)与血管性血友病因子(vWF)的结合力;FVIII激活后的活化FVIII(FVIIIa),经活化蛋白C(APC)介导降解的速率以及在FVIII抑制物存在条件下的生物活性变化,并与市售重组FVIII产品(ADVATE)与血源FVIII... 探究本研究中的重组人凝血因子VIII(rhFVIII)与血管性血友病因子(vWF)的结合力;FVIII激活后的活化FVIII(FVIIIa),经活化蛋白C(APC)介导降解的速率以及在FVIII抑制物存在条件下的生物活性变化,并与市售重组FVIII产品(ADVATE)与血源FVIII产品进行比较。将FVIII加至人vWF(无FVIII)中进行孵育,通过ELISA法检测FVIII与vWF的结合情况,计算出平衡解离常数进行比较;利用过量凝血酶激活获得FVIIIa,加入APC后通过检测剩余保留活性的FVIIIa计算出灭活速率;制备抑制物模拟血浆,检测不同抑制物浓度下FVIII的剩余活性,计算FVIIIa抑制率,并与ADVATE与血源FVIII进行比较。本研究的rhFVIII对APC介导降解的敏感性与ADVATE及血源FVIII产品相比没有统计学差异(P>0.05)。在vWF结合力方面,本研究rhFVIII与ADVATE没有统计学差异(P>0.05)。在含有抑制物血浆中,本研究rhFVIII的活性抑制率与ADVATE及血源FVIII产品均没有统计学差异(P>0.05)。证实了本研究rhFVIII可与vWF稳定结合,激活后的rhFVIIIa可经APC途径正常降解,为A型血友病患者的治疗提供了新的选择。 展开更多
关键词 血友病A 重组人凝血因子VIII 活化蛋白C 血管性血友病因子 FVIII抑制物
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血管性血友病因子裂解酶对血管新生的抑制作用 被引量:3
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作者 金春海 王霜 +2 位作者 赵艳红 金圣宇 李华 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期602-606,共5页
目的 观察血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)对血管内皮细胞生长因子(VEGF)介导的血管新生的抑制作用.方法 以不同浓度的ADAMTS13(1、5、25、50、100 nmol/L)处理脐带静脉内皮细胞(HUVEC),采用MTT法检测ADAMTS13对HUVEC增殖的影... 目的 观察血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)对血管内皮细胞生长因子(VEGF)介导的血管新生的抑制作用.方法 以不同浓度的ADAMTS13(1、5、25、50、100 nmol/L)处理脐带静脉内皮细胞(HUVEC),采用MTT法检测ADAMTS13对HUVEC增殖的影响,通过管腔形成实验观察ADAMTS13对HUVEC分化的影响,通过刮伤愈合实验观察ADAMTS 13对HUVEC迁移的影响,利用鸡胚绒毛尿囊膜实验和基质胶塞实验观察ADAMTS13在体内对血管新生的影响.结果 与对照组相比,25、50、100 nmol/L ADAMTS13对HUVEC增殖均有明显的抑制作用(P值均<0.01).在刮伤愈合实验中,制造损伤8h后,对照组HUVEC的迁移距离为(79±22)μm,VEGF处理组为(250±8) μm,VEGF+ADAMTS13处理组为(170±23)μm,组间差异均有统计学意义(P值均<0.05).在管腔形成试验中,VEGF处理组、VEGF+ADAMTS13处理组HUVEC培养16h后形成的管状结构长度分别是对照组的(450.6±16.6)%、(235.3±19.0)%,VEGF+ ADAMTS13处理组管状结构少于VEGF处理组(P<0.001).鸡胚绒毛尿囊膜实验中,VEGF(20 ng/ml)、ADAMTS13(100 nmol/L)、ADAMTS13(100nmol/L) +VEGF(20 ng/ml)处理组的血管形成数量分别为对照组的(228.2±10.8)%、(69.2±21.1)%、(184.6±15.2)%.基质胶塞实验结果显示VEGF+ADAMTS13处理组小鼠体内的血管数量为VEGF组的43.5%.结论 体外实验结果表明ADAMTS13对HUVEC增殖、分化、迁移能力均有抑制作用;体内实验结果提示ADAMTS13对血管新生有抑制作用. 展开更多
关键词 von willebrand因子 血管生成抑制剂 内皮生长因子 人脐静脉内皮细胞
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影响获得性血栓性血小板减少性紫癜首次缓解期内复发的相关指标研究 被引量:1
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作者 鲁旭娟 李笑峰 +1 位作者 陈满强 谢晓园 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2016年第5期374-379,共6页
目的探讨血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS)13活性和抗ADAMTS13抗体表达水平,与获得性血栓性血小板减少性紫癜(TTP)于首次缓解期内复发的关系。方法选择2008年3月至2014年6月于陕西延安大学附属医院和陕西省渭南市富平县医院诊治... 目的探讨血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS)13活性和抗ADAMTS13抗体表达水平,与获得性血栓性血小板减少性紫癜(TTP)于首次缓解期内复发的关系。方法选择2008年3月至2014年6月于陕西延安大学附属医院和陕西省渭南市富平县医院诊治的37例获得性TTP患者为研究对象,按照其在首次缓解随访期内是否复发,分为研究组(n=15)和对照组(n=22)。分别采用残余胶原结合试验、ELISA、免疫印迹等方法,检测两组患者的ADAMTS13活性,ADAMTS13抗原水平,抗ADAMTS13抗体,ADAMTS13抑制物,血管性血友病因子(vWF)抗原和超大分子量vWF(ULVWF)多聚体等指标,并且进行统计学分析;采用多因素非条件logistic回归分析法,评估获得性TTP患者于首次缓解期内复发的独立影响因素。本研究遵循的程序符合病例收集医院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该伦理会批准,分组征得受试对象本人的知情同意,并与之签订临床研究知情同意书。结果①研究组患者的中位ADAMTS13活性为11%(7%~124%),低于对照组的53%(7%~151%),差异有统计学意义(u=4.018,P〈0.05)。研究组与对照组患者的ADAMTS13活性显著降低率分别为53.3%(8/15)和22.7%(5/22),二者比较,差异有统计学意义(P=0.049)。②37例获得性TTP患者的血浆ADAMTS13活性和ADAMTS13抗原水平呈正相关关系(rs=0.810,P=0.001)。研究组患者的中位ADAMTS13抗原水平为33%(3%~99%),低于对照组的59%(3%~128%),差异有统计学意义(u=4.121,P〈0.05)。研究组与对照组ADAMTS13抗原水平显著降低率分别为13.3%(2/15)和9.1%(2/22),二者比较,差异有统计学意义(P=0.008)。③研究组患者的抗ADAMTS13抗体检出率为66.7%(10/15),高于对照组的36.4%(8/22),差异有统计学意义(P=0.007)。④研究组患者中抗ADAMTS13抑制物检出率为46.7%(7/15),高于对照组患者的18.2%(4/22),差异有统计学意义(P=0.011)。⑤研究组与对照组患者ULVwF多聚体检出率分别为20.0%(3/15)和13.6%(3/22),二者比较,差异有统计学意义(P=0.042)。⑥多因素非条件logistic回归分析结果显示,获得性TTP患者于首次缓解期内复发的独立危险因素包括ADAMTS13活性显著降低(OR=2.95,95%CI:1.13~6.96,P〈0.05),检出抗ADAMTS13抗体(OR=3.31,95%CI:1.08~8.19,P〈0.05),检出抗ADAMTS13抑制物(OR=3.24,95%CI:1.24~9.03,P〈0.05)。结论获得性TTP患者在首次缓解期内,ADAMTS13活性水平显著降低,存在抗ADAMTS13抗体及抗ADAMTS13抑制物,会显著增加疾病复发风险,可以考虑将其作为预测获得性TTP患者于首次缓解期内复发的重要指标。 展开更多
关键词 紫癜 血栓性血小板减少性 ADAMTS13蛋白 人类 von willebrand因子 复发
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低剂量X射线对脐静脉内皮细胞分泌vWF的影响 被引量:1
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作者 王一凡 郑盈盈 +1 位作者 解奇 刘炬 《中国辐射卫生》 2018年第1期25-27,共3页
目的探讨低剂量X射线(0.1 Gy)照射对脐静脉内皮细胞分泌vWF的影响。方法采用医用直线加速器对脐静脉内皮细胞进行0、0.1 Gy(剂量率为200 cGy/min)的X射线照射,然后采用MTT法、台盼蓝染色和细胞凋亡实验检测细胞增殖、细胞活力及细胞凋... 目的探讨低剂量X射线(0.1 Gy)照射对脐静脉内皮细胞分泌vWF的影响。方法采用医用直线加速器对脐静脉内皮细胞进行0、0.1 Gy(剂量率为200 cGy/min)的X射线照射,然后采用MTT法、台盼蓝染色和细胞凋亡实验检测细胞增殖、细胞活力及细胞凋亡。此外,采用ELISA和Westernblot方法检测受X射线照射后的细胞培养液中vWF的表达。结果以0.1 Gy的低剂量X射线照射脐静脉内皮细胞后,细胞增殖、细胞活力以及细胞凋亡的结果与对照组相比无统计学差异,但照射后的脐静脉内皮细胞培养基中vWF水平明显升高。结论低剂量(0.1 Gy)的X射线剂量照射不会导致脐静脉内皮细胞增殖、凋亡或细胞活性的显著改变,但是促使其分泌vWF的量增多。 展开更多
关键词 X射线 0.1 GY 血管性血友病因子 脐静脉内皮细胞 血栓形成
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遗传性血栓性血小板减少性紫癜的诊断及治疗进展 被引量:2
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作者 刘婉莹 肖毅 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2022年第4期442-446,共5页
遗传性血栓性血小板减少性紫癜(congenital thrombotic thrombocytopenic purpura,cTTP)也被称为Upshaw-Schulman综合征,是一种罕见的常染色体隐性遗传病。主要的发病机制为位于染色体9q34上的纯合或双杂合的血管假性血友病因子裂解酶(A... 遗传性血栓性血小板减少性紫癜(congenital thrombotic thrombocytopenic purpura,cTTP)也被称为Upshaw-Schulman综合征,是一种罕见的常染色体隐性遗传病。主要的发病机制为位于染色体9q34上的纯合或双杂合的血管假性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)基因突变,使血浆中裂解血管假性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)多聚体的ADAMTS13严重缺乏,微血管血栓的风险增高,导致各种并发症。随着对cTTP发病机制的研究不断完善,重组人ADAMTS13和基因治疗在cTTP治疗方面取得了突破性进展,本文对cTTP的诊断与治疗的最新进展进行综述。 展开更多
关键词 血栓性血小板减少性紫癜 血管假性血友病因子裂解蛋白酶 血浆输注 重组人ADAMTS13 基因治疗
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