重组人ZP3蛋白在大肠杆菌中的高效表达

目的：用基因工程方法制备重组人ZP3蛋白。方法：以全长人ZP3 cDNA片段为模板，通过PCR扩增出编码人ZP3蛋白不同肽段的cDNA片段，然后将这些cDNA片段分别插入到表达载体pET-I9b的Nco I-BamH I或Nde I-BamH I位点内，共构建成6种人ZP3蛋白非融合表达质粒（pFZP3-1-pEZP3-6）和3种人ZP3蛋白融合表达质粒（pFZP3-7-Pfzp3-9）.将这9种表达质粒分别转化大肠杆菌Rosetta2（DE3）感受态细胞并选择出Ap转化子，将Ap转化子接种到NZCYM培养基中（含AP 100μg/mL），在35-37℃振荡培养到对数生长期，加入IPTG至1.0-1.5mmol/L浓度诱导培养3h，离心收集细胞进行SDS-PAGE电泳检测和Western Blot杂交分析。结果：这9种人ZP3蛋白表达质粒在大肠杆菌Rosetta2（DE3）中得到高效表达，目的蛋白占总细胞蛋白的10-25%，表达产物均以包涵体形式存在。结论：成功构建了重组人ZP3蛋白原核表达系统，为地一步研究和应用人ZP3蛋白打下了基础。

人ZP3 186S突变蛋白在毕赤酵母X33细胞中的表达

目的:利用毕赤酵母表达人ZP3186S蛋白(23～348氨基酸),为临床相关疾病的诊断提供实验材料。方法:经PCR获得编码人ZP3(23～348氨基酸)的基因,构建表达载体pPICZα-hZP3。将ZP3186位点精氨酸突变为丝氨酸构建pPICZα-hZP3186S质粒。转染毕赤酵母X33细胞,用高浓度Zeocin筛选转染细胞,甲醇诱导目的蛋白分泌,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定人ZP3186S蛋白。结果:pPICZα-hZP3186S表达质粒经测序正确,并在毕赤酵母X33中能够高效表达。结论:毕赤酵母能够分泌性表达重组人ZP3186S蛋白(23～348氨基酸),进一步研究其生物学活性为研制不孕症诊断试剂和免疫避孕疫苗提供实验材料。