甘草黄酮诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对相关蛋白survivin表达的影响

目的:探讨甘草黄酮(GF9)对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测GF9对人肝癌细胞SMMC-7721细胞生长的影响,Hoechst染色法和电镜观察GF9诱导细胞凋亡的形态变化,流式细胞仪检测GF9诱导的细胞凋亡率,并通过免疫印迹法检测凋亡相关蛋白survivin和pro-caspase-3表达水平的变化。结果:GF9可抑制SMMC-7721细胞增殖,并呈时间剂量效应;400!mol/LGF9可诱导细胞凋亡,呈时间依赖性;随着GF9作用时间的延长,survivin和pro-caspase-3表达下调。结论:GF9能诱导SMMC-7721细胞凋亡,这可能与GF9能够引起抑制凋亡蛋白survivin的下调有关。

转染survivin对HLF细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨survivin基因表达对人肺纤维母细胞(humanlungfibroblast,HLF)增殖、凋亡的影响。方法构建survivin基因真核表达质粒pcDNA3.1/SVN;利用脂质体转染法将其转入不表达survivinmRNA的HLF细胞系。连续培养10周,筛选出稳定表达的阳性克隆(HLF/SVN)及转空质粒对照(HLF/K)。用RT-PCR、免疫组化、Westernblot检测细胞中survivin、bcl-2和caspase3mRNA表达;通过观察细胞生长曲线、细胞凋亡指数,探讨转染survivin基因对HLF细胞生长、凋亡的影响。结果转染pcDNA3.1/SVN后,在4、6、8和10周HLF/SVN细胞查见survivinmRNA表达;免疫组化和Westernblot见HLF/SVN细胞survivin阳性表达;转染后caspase3mRNA受到抑制,表达减弱或消失。HLF/SVN细胞凋亡指数(0.3%、1.0%、1.5%)皆低于HLF(0.9%、4.3%、2.1%)及HLF/K(0.8%、1.4%、2.8%)。细胞生长曲线示HLF/SVN细胞生长快于HLF和HLF/K,差异有统计学意义(Р﹤0.05)。结论survivin基因能促进HLF细胞生长,可能通过抑制凋亡和促进细胞分裂而发挥作用。

Survivin基因及蛋白表达与人786-0肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡的相关性研究

目的研究Survivin基因及蛋白表达与人786-0肾透明癌细胞增殖和凋亡的相关性。方法人肾癌细胞系786-0作为Survivin转染组,肾小管上皮细胞系HK-2作为阴性对照组,分别用Survivin模拟物转染;转染72 h后测定Survivin基因及蛋白表达;对比两组细胞吸光值、细胞数及凋亡细胞比值;对Survivin基因和蛋白表达水平与细胞吸光值、细胞数和凋亡细胞比值进行Pearson相关性分析。结果转染后,Survivin转染组Survivin mRNA、Survivin蛋白表达水平显著高于阴性对照组(P<0.05);吸光值从第1 d开始显著低于阴性对照组(P<0.05);细胞数从第2d开始显著少于阴性对照组(P<0.05)。786-0细胞的凋亡比例从第1d开始显著低于阴性对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,Survivin基因和蛋白表达水平与吸光值和细胞数呈负相关,与凋亡细胞比值呈正相关。结论 Survivin基因和蛋白表达可以抑制786-0肾透明癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

重组survivin腺病毒对喉癌细胞抗凋亡作用的体外实验

目的观察survinvin基因对人喉癌细胞系HEP2的凋亡抑制作用及相关凋亡蛋白的表达变化。方法重组survivin腺病毒感染喉癌细胞系后分别用MTT法、FACS、Western法检测转染细胞生长情况,并应用表面增强激光解析离子化-飞行时间质谱仪(surface enhanced laser desorption/ionizationtime-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)分析蛋白质谱的变化。结果重组survivin腺病毒感染人喉癌Hep2细胞48h后,显微镜下可见明显的细胞生长旺盛;FACS检测见G1/S和G2/M期的细胞明显增多;Western法见凋亡相关蛋白CASPASE-3、CASPASE-10和CASPASE-11在病毒感染后表达减少;SELDI检测可见质荷比(m/z)分别为M4924_02、M8518_09和M2454_31的3个蛋白质峰在腺病毒感染组的峰度明显低于对照组。结论重组survivin腺病毒在体外能够有效地抑制人喉癌Hep2细胞凋亡,并且其作用与Caspase-3、Caspase-10和Caspase-11有相关性。

抗凋亡蛋白survivin研究与癌治疗新策略的进展

survivin是凋亡抑制蛋白家族中的一个新成员,在近乎所有的人类肿瘤中都显示高表达,而在终末分化的正常组织中未能检测出表达。survivin表达的另一个独特性质是,其表达受细胞周期调控,在G2/M期有异常高的特异性表达。survivin的功能意义在于参与细胞凋亡调控和细胞分裂调控。引人兴趣的是,新近癌生物学基础与应用研究则更关注它是一个枢纽癌基因。本文将重点讨论与survivin在细胞死亡和细胞分裂功能相联系的、当前一些新的癌治疗策略的进展。

烟草悬凝物诱导永生化人支气管上皮细胞恶性转化过程中survivin基因及蛋白表达的研究

目的:探讨人支气管上皮细胞(BEP-2D)恶性转化过程中survivin基因及蛋白表达的变化。方法:选取正常BEP-2D细胞及经烟草悬凝物处理后的第15代(P-15)、25代(P-25)、38代(P-38)BEP-2D细胞共4组细胞株作为研究对象,采用半定量反转录PCR(Retro-translation PCR,RT-PCR)检测各组细胞株中survivin基因变化,免疫组织化检测各组中survivin蛋白的表达。结果:1.survivin mRNA在正常细胞BEP-2D中的表达强度为0.08,在转化的肺癌细胞P-15、P-25和P-38中分别为0.56、0.80和0.81。2.survivin蛋白在正常BEP-2D细胞株中表达阴性,在转化的3组细胞中表达阳性,且survivin蛋白在正常细胞与转化细胞株中的表达存在明显差异,其中在P-15具有明显差异(P<0.05)。结论:survivin基因及蛋白的表达水平可作为早期肺癌的一个检测指标。

拉帕替尼诱导Her-2高表达乳腺癌细胞凋亡的机制探讨

目的探讨拉帕替尼诱导Her-2高表达乳腺癌细胞株SKBR-3凋亡的机制。方法取处于对数生长期的SKBR-3细胞,接种于96孔板。随机分为实验组和对照组,每组设6个复孔。实验组加入终浓度500μg/L拉帕替尼,对照组加入含DMSO无血清的DMEM培养液。培养24、48、72 h后,采用MTT法检SKBR-3生存率,用流式细胞仪检测两组细胞凋亡情况,Western blot法检测磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)及survivin蛋白。结果拉帕替尼作用24、48、72 h时SKBR-3生存率分别为100%、69.4%、62.0%(P均<0.05)。实验组细胞凋亡率为10.48%,明显高于对照组的2.14%(P<0.05);实验组p-AKT与survivin蛋白相对表达量为0.49±0.12、0.51±0.38,明显低于对照组的1.46±0.13、0.89±0.36(P均<0.05)。结论拉帕替尼诱导Her-2高表达乳腺癌SKBR-3细胞凋亡的机制与其下调p-AKT、survivin蛋白表达有关。

G蛋白偶联受体4、Ki-67、生存素与高危HPV感染的相关性及诊断宫颈癌价值

目的:探讨G蛋白偶联受体4(LGR4)、Ki-67、生存素(Survivin)表达与高危型人乳头瘤病毒(hr-HPV)感染的相关性及对宫颈癌的诊断价值。方法:回顾性选取2021年9月-2022年6月本院诊治的hr-HPV感染患者102例临床资料,根据感染类型分为多重感染组(n=61)与单一感染组(n=41),根据并发宫颈癌为宫颈癌组(n=33)与非宫颈癌组(n=69),分别对比两组LGR4、Ki-67、Survivin表达,分析LGR4、Ki-67、Survivin阳性表达与hr-HPV多重感染的相关性及诊断宫颈癌效能。结果:多重感染组LGR4(51.68±12.68pg/ml)、Ki-67阳性细胞率(83.5±13.2)%、Survivin阳性细胞率(86.8±14.7)%均高于单一感染组(42.65±6.79pg/ml、70.6%±11.9%、Survivin 74.6%±12.5%),宫颈癌组LGR4(58.04±12.39pg/ml)、Ki-67阳性细胞率(89.9±11.7)%、Survivin阳性细胞率(94.2±11.4)%均高于非宫颈癌组(43.27±7.39pg/ml、72.8%±11.0%、76.0%±12.8%)(均P<0.05)。Kendall's tau-b相关性分析,LGR4、Ki-67、Survivin阳性表达与hr-HPV多重感染呈正相关(P<0.05)。LGR4、Ki-67、Survivin阳性表达高水平组宫颈癌发生率高于低水平组(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析显示,LGR4、Ki-67、Survivin诊断宫颈癌的曲线下面积值分别为0.880、0.856、0.875,敏感度分别为97.0%、78.8%、81.8%,特异度分别为100.0%、89.9%、89.9%。结论:LGR4表达、Ki-67及Survivin阳性细胞率会随着HPV感染类型而发生异常改变,动态监测可为诊断宫颈癌提供重要参考。

EB病毒潜伏膜蛋白1对鼻咽癌细胞增殖及STAT3信号通路的影响

目的：探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白1（LMP1）对人鼻咽癌细胞增殖及信号转导与转录活化因子3（STAT3）信号通路的影响。方法：体外培养人高分化鼻咽癌细胞系CNE1及转染了LMP1基因质粒的CNE1细胞（CNE1-GL细胞），通过绘制细胞生长曲线及平板克隆形成实验比较转染LMPl基因前后细胞增殖能力的变化；RT-PCR及免疫印迹方法检测STAT3及其下游基因survivin表达的变化。结果：转染LMP1基因后，CNE1细胞生长加快、克隆形成率增加；STAT3活化程度增加，survivin表达增强。结论：LMP1可促进CNE1细胞增殖，其机制可能是通过活化STAT3信号通路，进而促进抗凋亡基因survivin表达。

survivin、p53及人表皮生长因子受体2在乳腺癌组织中的表达及预后判断价值

目的探讨细胞凋亡相关因子survivin、p53及人表皮生长因子受体2(HER2)在乳腺癌组织中的表达及对预后判断的价值。方法前瞻性选择2015年2月至2019年1月唐山市妇幼保健院收治的131例行乳腺癌根治术患者为研究对象,术中采集患者癌组织和癌旁组织(距离肿瘤边缘>3 cm的正常组织)。采用免疫组织化学法检测患者癌组织和癌旁组织survivin、p53、HER2表达情况。记录随访3年内患者预后情况,其中复发、转移、死亡定义为预后不良,其余为预后良好;比较预后不良组和预后良好组间临床病理特征差异。采用多因素logistic回归分析乳腺癌患者预后危险因素。以乳腺癌预后结果为金标准,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析survivin阳性、p53阳性、HER2阳性单独、两两联合及三者联合判断患者预后不良的价值。结果癌组织survivin阳性表达率[49.6%(65/131)比7.6%(10/131)]、p53阳性表达率[60.3%(79/131)比13.0%(17/131)]、HER2阳性表达率[79.4%(104/131)比16.8%(22/131)]均高于癌旁组织(均P<0.001)。131例患者随访3年无失访者,随访率为100%;随访3年内复发15例(11.5%),转移8例(6.1%),死亡10例(7.6%),预后不良发生率为25.2%(33/131),其余98例(74.8%)预后良好。预后不良组TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移、组织低分化、肿瘤长径≥3 cm及survivin阳性、p53阳性、HER2阳性患者比例均高于预后良好组(均P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,TNM分期Ⅲ期[OR=5.323(95%CI 2.190~12.936)]、有淋巴结转移[OR=4.773(95%CI 1.964~11.600)]、肿瘤长径≥3 cm[OR=3.582(95%CI 1.474~8.706)]及癌组织survivin阳性[OR=2.740(95%CI 1.127~6.659)]、p53阳性[OR=3.271(95%CI 1.346~7.949)]、HER2阳性[OR=3.873(95%CI 1.594~9.412)]为乳腺癌患者预后的独立危险因素(均P<0.001)。ROC曲线分析显示,以survivin、p53、HER2阳性及两两联合判断乳腺癌患者预后不良的曲线下面积均>0.80(均P<0.001),三者联合的曲线下面积为0.944(95%CI 0.890~0.977)(P<0.001)。结论survivin、p53、HER2在乳腺癌组织中表达均较高,三者的表达情况可用于判断乳腺癌患者预后,且三者联合的判断价值更高。

中心体α-微管蛋白、γ-微管蛋白在脑胶质瘤中的表达及其与Survivin表达的相关性研究

目的探讨中心体α-微管蛋白和弘微管蛋白在脑胶质瘤中的表达，及其与凋亡抑制基因Survivin表达的相关性。方法应用免疫组织化学方法检测51例脑胶质瘤组织中廿微管蛋白、Survivin蛋白的表达，免疫荧光染色方法检测α-微管蛋白的表达，并分析其之间的相关性。结果脑胶质瘤高级别组（Ⅲ～Ⅳ级）α-微管蛋白、γ-微管蛋白及Survivin蛋白表达阳性率（88．0％、80．0％、92．0％）明显高于低级别组（Ⅰ、Ⅱ级）（22．2％、47．1％；11．1％、35．3％；33．3％、52．9％），且差异具有统计学意义（P均〈0．0125）。α-微管蛋白、γ-微管蛋白与Survivin表达之间均呈正相关（r分别为0．4404、0．5478，P〈0．05）。结论α-微管蛋白、γ-微管蛋白和Survivin在胶质瘤中的表达随恶性程度升高而增加，且相互之间均呈正相关。微管蛋白与Survivin的相互作用可能是胶质瘤发生发展过程中的重要事件。

宫颈癌组织中HPV16E6 mRNA与survivin蛋白表达的关系研究

目的:探讨宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)16E6 mRNA与survivin蛋白表达的情况及其相互关系。方法:选取宫颈癌患者40例、宫颈上皮瘤变患者90例(Cl N 1、Cl N 2、Cl N 3分别30例)及宫颈炎妇女30例,分别检测上述各类患者宫颈组织中HPV16E6 mRNA与survivin蛋白的表达情况,并进行相关性分析。结果:宫颈癌、宫颈上皮瘤变(Cl N 1、Cl N 2、Cl N 3)患者的HPV16E6 mRNA表达水平显著高于慢性宫颈炎患者,且HPV16E6 mRNA表达水平在宫颈癌>Cl N 3>Cl N 2>Cl N1>慢性宫颈炎患者且组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。不同年龄、临床分期、病理类型的宫颈癌患者宫颈癌组织中的survivin蛋白、HPV16 E6蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),不同病理分化的宫颈癌患者survivin蛋白、HPV16 E6蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05),低分化患者的survivin蛋白、HPV16 E6蛋白表达显著高于高分化、中分化患者(P<0.05)。对HPV16E6蛋白及mRNA分别与survivin蛋白进行Spearman相关性,结果显示HPV16E6蛋白与survivin蛋白呈正相关关系(r=0.604,P<0.001),HPV16E6 mRNA与survivin蛋白呈正相关关系(r=0.615,P<0.001)。结论:HPV16E6 mRNA与宫颈病变有一定的关系,HPV16E6 mRNA与survivin蛋白在宫颈癌组织中的表达具有一定的关系。

腺病毒介导的靶向survivin的siRNA上调乳腺癌MCF-7细胞雌激素受体表达

目的探讨腺病毒介导的靶向smwivin的小干扰RNA（siRNA）对乳腺癌MCF-7细胞雌激素受体（ER）表达的影响。方法构建靶向survivin的siRNA腺病毒载体并转染乳腺癌MCF-7细胞，采用Westernblot法检测MCF-7细胞转染腺病毒后survivin、ER表达的变化。结果实验组、阴性组、空白组sur—vivin的表达强度分别为0．09±0．04、0．86±0．08、0．82±0．17；ER的表达强度分别为1．57±0．09、1．16±0．10、1．23±0．01。统计学分析表明，本研究中所构建的靶向survivin的siRNA腺病毒载体可以高效地抑制survivin的表达，抑制survivin的表达可以显著上调乳腺癌MCF-7细胞ER的表达（P〈0．05）。结论在乳腺癌MCF-7细胞中，smwivin与ER信号通路之间可能存在着某种相互调节机制，提示靶向survivin的siRNA在ER阳性乳腺癌的内分泌治疗中可能具有潜在的重要意义。

HPV L1壳蛋白联合HPV、Survivin检测宫颈癌前病变的运用探讨

目的:了解HPV L1壳蛋白联合HPV、Survivin检测在诊断宫颈癌前病变中的作用。方法:回顾性地对该医院妇科门诊2007年7月～2011年5月进行HPV L1壳蛋白联合HPV、Survivin检测的284例患者进行总结和分析。结果:HPV L1壳蛋白随着宫颈病变程度的加重呈现下降趋势,其在CINⅠ组和CINⅡ组中的阳性率显著高于对照组(P<0.05)。HPV病毒随着宫颈病变程度的加重呈现上升趋势,其在CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和SCC组中的阳性率显著高于对照组(P<0.05)。Survivin随着宫颈病变程度的加重呈现上升趋势,其在CINⅢ组和SCC组中的阳性率显著高于对照组(P<0.05)。HPV L1壳蛋白和HPV病毒表达呈负相关,HPV病毒与Survivin表达呈正相关(P<0.05)。结论:HPV L1壳蛋白联合HPV、Survivin检测可以作为预测宫颈癌前病变进展的生物学标志物。

非小细胞肺癌存活素蛋白和VEGF表达与HPV感染的关系

目的探究非小细胞肺癌(NSCLC)存活素(survivin)蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)表达及其与人乳头状瘤病毒(HPV)感染的关系。方法选取2018年1月-2019年6月唐山市工人医院收治的100例NSCLC患者为研究对象,采集病例患者新鲜癌组织标本和癌旁组织标本,免疫组化分析NSCLC癌组织和癌旁组织中survivin蛋白、VEGF、HPV表达情况,分析NSCLC患者survivin蛋白、VEGF表达与HPV感染及病理特征的关系。结果 NSCLC患者癌组织survivin蛋白、VEGF、HPV表达阳性率分别为89.00%(89/100)、96.00%(96/100)、39.00%(39/100)高于癌旁组织(P<0.001)。39例HPV感染NSCLC患者survivin阳性15例,survivin阴性24例,HPV感染NSCLC患者survivin阳性组分化程度为低分化、淋巴结有转移的占比分别为53.33%(8/15)、46.67%(7/15)高于survivin阴性组(P<0.05)。39例HPV感染NSCLC患者VEGF阳性19例,VEGF阴性20例,HPV感染NSCLC患者VEGF阳性组临床分期为III期、Ⅳ期、分化程度为低分化、淋巴结有转移的占比分别为71.43%(10/14)、100.00%(1/1)、90.91%(10/11)、88.89%(8/9)高于VEGF阴性组(P<0.05)。NSCLC患者survivin蛋白、VEGF表达阳性率与HPV阳性率呈正相关(P<0.001)。结论 NSCLC患者survivin蛋白、VEGF表达与HPV感染密切相关,HPV感染可能是通过上调survivin蛋白、VEGF的表达,而参与NSCLC患者的恶性生物学行为。