鼠源性抗人HAAH mAb可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达

目的:从分泌抗人类天冬氨酰基β-羟化酶(HAAH)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞G3/F11中,克隆出鼠源an-ti-HAAH mAb重、轻链可变区基因,构建Anti-HAAH的单链抗体(scFv),并进行scFv基因的蛋白表达。方法:提取杂交瘤细胞G3/F11的总RNA,通过RT-PCR扩增出VH和VL基因;再利用重叠延伸PCR(SOE-PCR),通过设计在引物上的linker序列,将VH和VL拼接为完整anti-HAAHscFv基因。将测序正确的scFv基因克隆入pHEN1载体,并利用E.coliHB2151进行蛋白表达;通过SDS-PAGE,Western blot分析其表达状况,ELISA鉴定其抗原结合活性。结果:测序结果显示,本实验成功地构建出鼠源anti-HAAHVH-linker-VLscFv基因,且VH、VL均具有完整正确的小鼠抗体骨架区和互补决定区结构,所得的scFv基因片段全长744bp,编码248个氨基酸。SDS-PAGE和Westernblot分析表明,pHEN1-anti-HAAH在E.coliHB2151可表达为Mr约27000的可溶性scFv蛋白,表达量为7.8%。间接ELISA检测显示,可溶性鼠源anti-HAAHscFv蛋白具有较高的抗原结合活性。结论:成功扩增出的鼠源anti-HAAHmAbVH区和VL区基因,并构建为anti-HAAHscFv基因。然后,利用pHEN1载体对anti-HAAHscFv基因进行成功表达,为进一步研究其生物活性及应用奠定了基础。

ASPH和CD44V6在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨人天冬胺酰基β-羟化酶(ASPH)和CD44V6在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,评估其临床意义。方法收集中国人民解放军联勤保障部队第908医院2015年1月至2019年6月经病理确诊的NSCLC组织及配对的癌旁组织各90例、肺良性疾病组织20例,采用Leica-Bond全自动免疫组化仪检测ASPH和CD44V6的表达,并分析其与临床病理特征的关系。结果ASPH和CD44V6在NSCLC组织的阳性表达率(68.9%、72.2%)均显著高于癌旁(20.0%、11.1%)及肺良性疾病(10%、0%)组织(均P<0.01)。肿瘤大小(>5 cm)、TNM分期(Ⅲ—Ⅳ期)及淋巴结转移(有)的NSCLC组织中ASPH和CD44V6的表达更高(均P<0.05),但在年龄、性别、吸烟史、组织学分级、分化程度及组织学类型上差异无统计学意义(均P>0.05);NSCLC组织中ASPH和CD44V6的表达呈显著正相关(r=0.76,P<0.01)。结论ASPH和CD44V6可能是NSCLC及肺结节良恶性诊断与评估的重要参考指标。