人2型大麻素受体过表达诱导宫颈癌Caski细胞凋亡

目的构建人2型大麻素受体(h CB2R)基因真核表达载体,探讨h CB2R在细胞中的表达、定位以及h CB2R对宫颈癌Caski细胞的生长的影响及机制。方法构建GV230-h CB2R质粒,经双酶切、测序鉴定后,转染HEK293细胞和Caski细胞,Western blot法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测CB2R表达及细胞定位;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法及实时荧光定量PCR检测h CB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果双酶切获得1128 bp的目的片段,测序结果与h CB2R基因注册序列(NM_001841.2)的同源性为99%;转染HEK293细胞后,可表达相对分子质量(Mr)40 000的h CB2R蛋白,HEK293细胞膜和细胞质中均有CB2R表达;过表达的CB2R,可上调Bax、Bad的表达,抑制Bcl-2的表达,促进宫颈癌Caski细胞凋亡。结论上调Caski细胞h CB2R表达可增强Bax、Bad表达,抑制Bcl-2表达,诱导细胞凋亡。

上调2型大麻素受体诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:通过构建基因真核表达载体,探讨人2型大麻素受体(human cannabinoid receptor 2,hCB2R)对人子宫颈癌HeLa细胞体外凋亡的作用及机制。方法:选用人脑组织的cDNA作为模板,进行hCB2R基因的RT-PCR扩增,构建重组质粒GV230-h CB2R及其对照空质粒GV230并转染HeLa细胞,Western blotting法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测h CB2R表达及细胞内定位;流式细胞术检测He La细胞凋亡,Western blotting法及实时荧光定量PCR检测HeLa细胞中hCB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达。结果:与空质粒转染组相比,GV230-hCB2R转染HeLa细胞后表达相对分子质量40 000的hCB2R蛋白,且细胞膜和细胞质中均有hCB2R的表达;GV230-hCB2R转染组的细胞凋亡率显著高于GV230空质粒对照组[(14.51±4.51)%vs(6.29±0.57)%,t=1.72,P<0.05];与空质粒对照组相比,h CB2R转染组细胞内Bax和Bad的表达水平明显上调(P<0.05),而Bcl-2的表达明显下调(P<0.05)。结论:hCB2R对子宫颈癌HeLa细胞的生长表现出明显的抑制作用,其作用机制可能与hCB2R直接参与了细胞凋亡相关蛋白的表达变化有关。

5′-氮杂-2′-脱氧胞苷对人肺鳞状细胞癌细胞株NCI-H226和NCI-H520中CNRIP1基因甲基化及蛋白表达的影响

目的探讨5′-氮杂-2′-脱氧胞苷对人肺鳞状细胞癌细胞株NCI-H226和NCI-H520中大麻素受体相互作用蛋白-1(CNRIP1)基因甲基化和蛋白表达的影响。方法取对数生长期NCI-H226和NCI-H520细胞株分为实验组和对照组,对照组细胞使用不含5′-氮杂-2′-脱氧胞苷的培养基继续培养;将实验组细胞分为0.5、1.0、1.5μmol·L^-1组,分别使用含不同浓度(0.5、1.0、1.5μmol·L^-1)5′-氮杂-2′-脱氧胞苷的培养基继续培养。取各组培养72 h后的细胞进行DNA提取及蛋白提取,采用甲基化特异性聚合酶链反应法检测各组细胞中CNRIP1基因的甲基化状态,采用Western blot检测各组细胞中CNRIP1蛋白表达。结果对照组和0.5μmol·L^-1组NCI-H226、NCI-H520细胞株均显示为甲基化,1.0、1.5μmol·L^-1组中2种细胞株均显示为非甲基化。0.5、1.0、1.5μmol·L^-1组2种细胞株中CNRIP1蛋白表达量均高于对照组(P<0.05);0.5、1.0、1.5μmol·L^-1组2种细胞株中CNRIP1蛋白表达量随浓度的增加而升高,两两比较差异均有统计学意(P<0.05)。结论人肺鳞状细胞癌细胞株NCI-H226和NCI-H520中CNRIP1基因发生甲基化可能是导致基因表达下调甚至失活的主要原因,5′-氮杂-2′-脱氧胞苷可以逆转CNRIP1基因甲基化状态,促进CNRIPI蛋白表达。