心脏彩超联检血清cTnI、IGF-Ⅰ和IGFBP-3水平对先天性心脏病诊断的临床价值

目的:探讨了心脏彩超联检血清心特异性肌钙蛋白(cTnI)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)水平对先天性心脏病的诊断价值。方法:应用放射免疫分析和酶联法对32例先天性心脏病患者进行了血清cTnII、GF-Ⅰ和IGFBP-3测定,并与35名正常健康人作比较。结果:先天性心脏病患者血清cTnI水平显著地高于正常人组(P<0.01),而IGF-Ⅰ和IGFBP-3又非常显著地低于正常人组(P<0.01),且血清cTnI水平与IGF-Ⅰ和IGFBP-3水平呈显著负相关(r=-0.4105、-0.5122,P<0.01)。结论:检测先天性心脏病患者血清cTnI、IGF-Ⅰ和IGFBP-3水平的变化对了解病情和预后具有重要价值。

血清NGAL、hs-cTnⅠ、MMP-13水平联合检测在妊娠期糖尿病肾病诊断中的效能

目的:分析血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、超敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnⅠ)、人基质金属蛋白酶-13(MMP-13)水平联合检测在妊娠期糖尿病(GDM)肾病诊断中的效能。方法:选取2019年1月至2021年1月该院收治的80例GDM肾病患者作为研究组,并根据尿微量白蛋白排泄率(UAER)分类,UAER<30 mg/24 h为前期肾病患者(n=29),30 mg/24 h≤UAER≤300 mg/24 h为早期肾病患者(n=27),UAER≥300 mg/24 h为临床肾病患者(n=24),另选取同期体检的80名健康孕妇作为对照组。比较两组、不同肾损伤程度GDM患者血清NGAL、hs-c TnI、MMP-13水平,并绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析血清NGAL、hs-cTnⅠ、MMP-13单项及联合检测诊断GDM肾病的效能。结果:研究组NGAL、hs-cTnⅠ水平均高于对照组,MMP-13水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);临床肾病患者NGAL、hs-cTnⅠ水平均高于早期肾病患者和前期肾病患者,且早期肾病患者高于前期肾病患者,临床肾病患者MMP-13水平低于早期肾病患者和前期肾病患者,且早期肾病患者低于前期肾病患者,差异有统计学意义(P<0.05);经ROC曲线分析结果显示,NGAL、hs-cTnⅠ、MMP-13单项及联合诊断GDM肾病的曲线下面积分别为0.791、0.725、0.803、0.861,且联合检测诊断价值最高。结论:血清NGAL、hs-cTnⅠ、MMP-13水平联合检测诊断GDM肾病的效能高于三者单项检测诊断。

人心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化

目的:研究人cTnI基因在大肠杆菌中的融合表达和纯化。方法:以pCOMb3-cTnI为模板,用PCR方法得到了编码该蛋白的基因,进一步将该基因克隆到中间载体pUCm-T,再酶切得到cTnI基因插入到pKL载体中,构建成表达质粒pKL-cTnI。在BL21细胞中经IPTG诱导表达,利用载体携带6×His纯化标签,以HisTrap Kit纯化重组蛋白,并进行免疫活性测定。结果:融合蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并用HisTrap Kit成功纯化目的蛋白。ELISA分析证实该重组蛋白具有与天然心肌肌钙蛋白相似的免疫活性。结论:本研究为建立急性心肌梗死早期诊断试剂奠定了基础。

血清hs-CRP、CK-MB、cTnI在急性心肌梗塞早期诊断中的临床价值

目的探讨血清hs-CRP、CK-MB与cTnI在急性心肌梗塞(AMI)早期中的临床价值。方法对36例AMI胸痛发作在3￣4h患者,50例AMI胸痛发作4￣12h患者,采用定时免疫散射比浊法检测其血清hs-CRP,免疫抑制法测定血清CK-MB,化学发光法检测血清cTnI,并与40例健康对照作比较,探讨三者在AMI早期中的变化情况。结果AMI胸痛发作3￣4h组、4￣12h组hs-CRP含量分别为(7.42±3.27)mg/L、(25.26±18.15)mg/L,均明显高于对照组(0.84±0.73)mg/L(P<0.01);CK-MB含量AMI胸痛发作3￣4h组(25.4±14.6)U/L与4￣12h组(64.6±53.2)U/L均较对照组(5.6±3.4)U/L有显著性差异(P<0.05);而AMI胸痛发作3￣4h组cTnI含量(0.08±0.06)μg/L与对照组(0.06±0.04)μg/L无显著性差异(P>0.05),4￣12h组的cTnI含量(28.9±37.6)μg/L与其它两组比较均有显著性差异(P<0.05)。AMI患者胸痛发作4h内,以hs-CRP(91.7%)最敏感,CK-MB(55.6%)次之,阳性检出率均明显高于cTnI(25%);胸痛发作4￣12h,hs-CRP(100%)、CK-MB(92%)、cTnI(84%)均具有较高的阳性检出率。结论联合检测hs-CRP、CK-MB、cTnI对于AMI早期诊断具有很高的灵敏度与特异性,可将诊断与治疗提前到4h以内,并能作为AMI的预后监测及疗效观察的指标。

抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体制备中免疫抗原的选取

目的 获得与人骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ没有交叉反应的抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ (HcTnⅠ )特殊位点的单克隆抗体。方法 选择了包括牛心肌肌钙蛋白Ⅰ (BcTnⅠ )、根据HcTnⅠ氨基酸序列的亲水性设计的 4个钥孔虫戚血蓝蛋白 (KLH)偶联肽段和一个八倍体多肽分子 (MAP)等 6种代用抗原 ,通过免疫、杂交和筛选 ,获得了能分泌抗 (HcTnⅠ )的IgG型抗体的杂交瘤细胞株 ,并对得到的抗体进行了特异性鉴定。结果 用其中 4种抗原免疫得到了抗HcTnⅠ的IgG型单抗的细胞株 ,其中的 3种合成肽可以得到分泌抗HcTnⅠ特殊位点的IgG型单抗细胞株。结论 为临床上检测cTnⅠ以诊断急性心肌梗塞 。

急性心肌梗死患者血清同型半胱氨酸水平与内皮细胞功能、纤溶活性及炎症因子的关系

目的探讨急性心肌梗死(AM I)患者血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平与纤溶活性,内皮细胞功能,炎症因子的关系及其临床意义。方法分别测定AM I患者(162例)及健康对照组(90例)血中Hcy水平以及纤溶酶原激活抑制物-1(PAI-1)活性,血管性血友病因子(vWF),心肌肌钙蛋白I(cTnI),D-二聚体(DD),C反应蛋白(CRP)及血脂各项指标,用统计学方法分析Hcy与它们的关系。结果AM I组Hcy水平较对照组明显升高(P<0.01),AM I患者PAI-1活性增强,vWF及DD水平明显高于对照组(P<0.01),CRP及CTnI在AM I组呈阳性反应。多因素相关性分析结果显示Hcy与PAI-I、vWF、CRP、cTnI、DD均有良好相关性,但与血脂无关。结论Hcy是AM I独立危险因素。Hcy可能通过损伤血管内皮细胞,引起血管壁炎症反应,抑制纤溶系统,促进AM I的发生、发展。

人心肌肌钙蛋白I的原核表达与纯化

目的构建人心肌肌钙蛋白I(human cardiac troponin I,hcTnI)原核表达载体并表达、分离纯化重组蛋白。方法RT-PCR从人心肌组织中克隆出hcTnI的cDNA序列构建到原核表达载体pQE30,获得重组表达质粒pQE30-hcTnI,并在大肠杆菌M15中诱导表达。镍凝胶亲和层析纯化目的蛋白,Western Blot杂交鉴定重组蛋白。结果经测序证实,获得的目的基因与(GeneBank M64247)公布的hcTnI基因序列一致。pQE30-hcTnI在大肠杆菌M15中经IPTG诱导后表达出相对分子量约为29 kD的目的蛋白,镍柱纯化后经抗hcTnI单克隆抗体进行Western印记,在相对分子量约29kD处可见特异性着色带。结论体外成功诱导了重组hcTnI蛋白表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的hcTnI蛋白,为进一步获得hcTnI的抗体及建立相应的临床快速检测方法奠定了实验基础。

人心肌肌钙蛋白I基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达

目的从人心肌组织中克隆出心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)的cDNA,构建成表达重组体导入特定宿主菌,以期大量表达并获得高纯度的心肌肌钙蛋白I,为临床检测心肌损伤及预后提供诊断试剂材料。方法利用RT-PCR方法从人心肌细胞的总RNA中克隆出编码人心肌肌钙蛋白I的cDNA片段,将其插入原核表达载体形成重组体并导入宿主菌BL21(DE3)中,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,表达出带6个组氨酸标签的融合蛋白,Ni-NTA树脂纯化后行Western blot进行鉴定。结果成功获取了人cTnI的cDNA,并在大肠埃希菌中高效表达。经Ni-NTA树脂纯化后获得的产物可与其特异性单克隆抗体反应。结论成功克隆了cTnI基因,构建的重组体能够在大肠埃希菌中高效表达,经纯化可获得电泳单点纯的cTnI蛋白。

用合成多肽免疫制备抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的研究

介绍一种用合成的多抗原肽免疫动物来制备与天然人心肌肌钙蛋白Ⅰ特异反应的单克隆抗体新方法。从人心肌肌钙蛋白ⅠＮ端，根据多肽分子氨基酸的亲水性值选出了ＰＡＰＡＰＩＡＡＡＳＳ１１个氨基酸片段。将它用有八位点的赖氨酸核连接成多抗原肽后，以它为抗原用Ｒｉｂｉ佐剂进行免疫。将小鼠脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，获１１株抗此多肽的杂交瘤细胞株。对其中７株属于ＩｇＧ亚类的细胞进行了ＥＬＩＳＡ分析，发现这７株细胞均与天然的人心肌肌钙蛋白Ⅰ呈特异性反应，而不与人骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ发生交叉反应。利用３Ａ２细胞株所分泌的单克隆抗体对急性心肌梗塞患者、手术患者和正常人的血样进行了ＥＬＩＳＡ检测，证明它只对心肌梗塞患者血清发生阳性反应。获得了较为满意的结果。此细胞株所分泌的抗体有望用于心肌梗塞临床检测。