加热法人心肌钙蛋白T的提取与纯化

目的以加热法从人左心室肌组织中提取并纯化心肌肌钙蛋白Ｔ（ＣＴｎＴ）。方法取新鲜人左心室肌经捣碎、淬取、加热、透析后提取ＣＴｎＴ，以ＤＥＡＥ５２柱层析纯化。结果经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳初步鉴定，每１００ｇ左心室肌经此法可得１１．７９ｍｇＣＴｎＴ纯品，纯化后的ｃＴｎＴ为单一条带，分子量为３７ＫＤ。结论本法提取ＣＴｎＴ步骤简单，纯度尚可，可做抗原使用。

人心肌特异性肌钙蛋白T单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人心肌肌钙蛋白T的单克隆抗体。方法 利用纯化的人心肌肌钙蛋白T免疫BALB/C小鼠 ,常规方法制备抗人心肌肌钙蛋白的单克隆抗体 2株N15C和N16D。结果 利用普通ELISA方法检测 2株单抗 ,小鼠腹水N16D滴度可达 1/ 32 0 0 0 ,N15C滴度达 1/ 80 0 0 ;斑点酶联免疫吸附试验证明N16D对急性心肌梗塞患者血清中出现的肌钙蛋白T有较好的亲和性。

人心肌肌钙蛋白T单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

目的 :建立抗人心肌肌钙蛋白T(cTnT)单克隆抗体 (McAb)的杂交瘤细胞株。方法 :从人心肌组织中提取纯化人cTnT ,免疫BALB/C小鼠 ,采用杂交瘤技术 ,间接ELISA法选择能稳定分泌抗cTnTMcAb的杂交瘤细胞株。结果 :建立了 2株稳定分泌抗cTnTMcAb的杂交瘤细胞株N15C和N16D ,其染色体数目为 90～ 10 6 ,McAbIg亚类均为IgG1,间接ELISA法测定McAb腹水效价分别为 1 80 0 0和 1 32 0 0 0。免疫印迹结果显示 2株McAb均可识别cTnT中Mr 为 370 0 0的单一区带 ,不识别人骨骼肌提取物。间接ELISA法测定N15C和N16DMcAb与cTnT反应的最低浓度分别为 4 7μg/L和 2 3μg/L。相加试验表明 2株McAb能识别不同的抗原表位。 结论 :获得

人心肌肌钙蛋白T亚型的克隆及表达

目的 构建人心肌肌钙蛋白T(cTnT)亚型的重组载体。 方法 应用RT-PCR技术，从人胚胎心肌组织中扩增cTnT1及cTnT2基因，连接到T Easy vector载体上，筛选重组子。结果 成功地扩增出cTnT1（764 bp）及cTnT2(124)基因片段，经测序证实，构建pExSecI-cTnT1表达载体并获得表达。结论 获得单一亚型的cTnT1及cTnT2基因片段，为研究心力衰竭时的胚胎型基因重构与发病关系提供了依据。

心脏型脂肪酸结合蛋白和D-二聚体及高敏肌钙蛋白T在急性冠状动脉综合征早期诊断中的应用

目的探讨心脏型脂肪酸结合蛋白（human heart-type fatty acid-binding protein,h-FABP）、D-二聚体（D-dimer）及超敏肌钙蛋白T（high-sensitive cardiac troponin T,hs-c Tn T）对急性冠脉综合征（acute coronary syndrome,ACS）的早期诊断价值。方法收集2014年3月至2015年5月东莞市常平医院急诊科157例胸痛患者、50名健康体检者（健康对照组）的静脉血,分离得血清及血浆。测定所有研究标本的h-FABP、D-二聚体和hs-c Tn T。所有实验数据均通过SPSS13.0软件进行统计学处理。结果 ACS患者中的不稳定性心绞痛（unstable angina,UA）组、非ST段抬高心肌梗死（non-ST-elevation myocardial infarction,NSTEMI）组、ST段抬高心肌梗死（ST-elevation myocardial infarction,STEMI）组血清h-FABP水平、血浆D-二聚体水平、血清hs-c Tn T水平均高于非缺血性胸痛（non-ischemic chest pain,NICP）组和健康对照组,差异具有统计学意义（P=0.002）。胸痛3 h以内组和3~6 h组ACS患者血清h-FABP水平均高于健康对照组,差异具有统计学意义（P=0.003）。胸痛3~6 h组ACS患者血浆D-二聚体、血清hs-c Tn T水平均高于健康对照组,差异具有统计学意义（P=0.005）。单独应用h-FABP诊断ACS（胸痛3~6 h）的敏感度为87.07%,特异度为73.62%,准确性为82.03%。h-FABP、D-二聚体及hs-c Tn T联合应用诊断ACS（胸痛3~6 h）的敏感度为97.41%,特异度为59.22%,准确性为87.65%。结论血清h-FABP是ACS发病早期心肌缺血的敏感指标,优于hs-c Tn T和血浆D-二聚体对ACS发病早期的心肌缺血诊断作用。联合检测h-FABP、D-二聚体及hs-c Tn T可提高诊断的敏感性和准确性,对指导临床早期诊断ACS有一定价值。

人心肌特异性肌钙蛋白的提取与鉴定

目的从人心肌组织中提取和纯化心肌特异性肌钙蛋白，为建立心肌梗塞病人免疫诊断试剂准备抗原。方法取新鲜人心室肌组织经捣碎离心提取，ＤＥＡＥ５２柱层析纯化，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳鉴定。结果１００ｇ心室肌可提取３７ｍｇ纯品肌钙蛋白。结论本次提取的心肌特异性肌钙蛋白纯度较高，能作抗原使用。

miR-148a促进人诱导性多能干细胞向心肌样细胞的分化

背景:研究发现,miR-148a可以促进人骨髓间充质干细胞定向分化为成熟心肌样细胞,但关于miR-148a对人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化的影响则未见报道。目的:探讨miR-148a对人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化的影响。方法:将人诱导性多能干细胞分为3组向心肌样细胞诱导分化,对照组细胞不做处理,低表达组细胞用miR-148a抑制物处理28 d,高表达组细胞用miR-148a模拟物处理28 d;另取常规培养28 d的人诱导性多能干细胞为空白对照组。CCK-8检测细胞增殖活力,qRT-PCR检测miR-148a mRNA的表达,免疫荧光染色和Western blot检测MHC和cTnT蛋白的表达。结果与结论:①低表达组细胞内miR-148a mRNA表达、细胞增殖活力低于空白对照组和对照组,高表达组高于其他3组(P<0.01);②空白对照组无MHC和cTnT的阳性表达,对照组、低表达组和高表达组均有MHC和cTnT的阳性表达;③低表达组细胞MHC和cTnT蛋白表达低于对照组,高表达组高于其他3组(P<0.01);④以上结果提示,miR-148a可促进人诱导性多能干细胞向心肌样细胞分化。

人心肌肌钙蛋白纯化方法的对比研究

目的比较两种心肌肌钙蛋白纯化方法。方法取意外死亡者心脏，分别采用醇、醚处理和加热处理两种不同方法进行人心肌肌钙蛋白（ＣＴｎＴ）的提取纯化。结果醇醚处理法提取周期较长、步骤繁琐，但经初步纯化后，杂蛋白含量较低，１００ｇ人心室肌组织可提取３５．３ｍｇＣＴｎＴ；加热法步骤简单，提取时间较短，但得率较低，１００ｇ人心室肌组织可提取１１．７９ｍｇＣＴｎＴ，而且粗品内含较多杂蛋白成分。结论两种方法各有优缺点。

不同酶标反应板在人心肌特异性肌钙蛋白抗体检测中的性能分析

目的 考察不同种类的酶标反应板对酶联免疫吸附试验 (ELISA)的结果影响。方法 以 10 0 μl人心肌肌钙蛋白T(CTnT)为抗原 ,分别包被不同酶标反应板 ,运用普通酶联免疫吸附试验方法比较不同酶标反应板的性能。结果 96孔硬脂进口反应板的CTnT抗体OD值 (P <0 .0 5 )和阴性血清OD值 (P <0 .0 1)高于国产 40孔硬板。结论 96孔进口硬板的吸附能力最强 ,灵敏度高 。

重组人尿激酶原联合尼可地尔靶血管灌注对接受PCI治疗的急性心肌梗死患者的影响

目的观察重组人尿激酶原(rhPro-UK)联合尼可地尔靶血管灌注对接受经皮冠状动脉介入术(PCI)治疗的急性心肌梗死(AMI)患者的影响。方法使用随机双盲法将2019年1月至2021年1月在商水县人民医院行PCI治疗的90例AMI患者分为对照组(n=45)和观察组(n=45)。两组均行PCI治疗,给予对照组rhPro-UK靶血管灌注,给予观察组rhPro-UK联合尼可地尔靶血管灌注。比较两组手术前后心肌梗死溶栓试验(TIMI)血流分级、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室射血分数(LVEF)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,统计两组术后主要不良心血管事件(MACE)发生率。结果观察组术后TIMI血流分级改善情况优于对照组(P<0.05);观察组术后7d、1个月时的LVEDD水平低于对照组,而LVEF水平高于对照组(P<0.05);观察组术后1、7d时的cTnT、CK-MB水平低于对照组(P<0.05);观察组术后1、7d时的MDA水平低于对照组,而SOD水平高于对照组(P<0.05);观察组术后6个月内MACE发生率(4.44%)较对照组(17.78%)低(P<0.05)。结论rhPro-UK联合尼可地尔靶血管灌注可有效改善行PCI治疗的AMI患者的TIMI血流分级和心功能,且能减轻术后心肌损伤和氧化应激损伤,能有效降低术后MACE发生风险。

5项心肌标志物联合检测对先兆子痫心肌损伤的诊断价值研究

目的探讨超敏肌钙蛋白-T(hs-cTnT)、人心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)、B型尿钠肽(BNP)、缺血修饰清蛋白(IMA)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)对先兆子痫心肌损伤的诊断价值。方法正常妊娠50例纳入妊娠组,诊断为先兆子痫167例为先兆子痫组,分为心肌损伤组42例和无心肌损伤组125例。另选择50例健康非妊娠女性为对照组。采用ELISA一步法测定血清中H-FABP,微粒子化学发光免疫法检测hs-cTnT和BNP,清蛋白-钴结合试验测定IMA,以及免疫抑制法测定CK-MB。结果先兆子痫组中心肌损伤组的CK-MB、H-FABP、IMA、hs-cTnT和BNP水平明显高于对照组、妊娠组和无心肌损伤组,差异有统计学意义[(t=8.521、7.489、7.256;7.561、6.897、6.235;12.314、9.236、10.251;13.657、11.023、12.031;11.301、10.364、15.567),(P=0.008,0.030,0.035;0.027,0.031,0.033;0.002,0.005,0.003;0.002,0.004,0.003;0.003,0.004,0.001)]。先兆子痫组中无心肌损伤组的CK-MB和hs-cTnT与对照组、妊娠组比较,差异无统计学意义[(t=1.678、1.401;1.887、1.784),(P=0.339、0.401;0.289、0.398)]。无心肌损伤组和妊娠组的IMA、H-FABP和BNP明显高于对照组[(t=4.784、4.021;3.894、3.784;5.801、5.215),(P=0.024、0.032;0.037、0.041;0.021、0.029)]。无心肌损伤组的IMA、H-FABP和BNP与妊娠组比较,差异无统计学意义[(t=1.325、1.257、1.241);(P=0.451、0.329、0.378)]。5项标志物联合检测灵敏度明显高于单个标志物(χ2=3.021、3.561、4.215、4.496、5.249;P=0.027、0.024、0.019、0.015、0.009)。结论采用心肌标志物判断孕妇心肌损伤时,应考虑到妊娠这一特殊的生理周期,5项心肌标志物联合检测,有利于早期诊断先兆子痫的缺血性心肌损伤。

重组人脑利钠肽对慢性心力衰竭患者心功能和心肌损伤的影响

目的探讨重组人脑利钠肽对慢性心力衰竭(心衰)患者心功能和心肌损伤的影响。方法 70例慢性心衰患者,随机分为重组人脑利钠肽组(36例)和对照组(34例)。对照组采用常规抗心衰药物治疗,重组人脑利钠肽组在对照组基础上加用重组人脑利钠肽治疗。治疗后评价两组临床疗效,并于治疗前后检测两组心肌肌钙蛋白T(cTnT)、N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)水平以及左室射血分数(LVEF)、每搏心输出量(SV)、左室收缩末期内径(LVESD)。结果经过48 h治疗后,重组人脑利钠肽组总有效率为91.67%,对照组总有效率为70.59%,比较差异有统计学意义(P<0.05)。经过治疗后,两组患者cTnT及NT-proBNP水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05)。重组人脑利钠肽组cTnT及NT-proBNP水平较对照组下降明显,差异有统计学意义(P<0.05)。经过治疗后,两组患者的LVEF及SV水平较治疗前均有所增加,差异有统计学意义(P<0.05)。重组人脑利钠肽组SV为(76.32±15.37)ml,较对照组的(65.45±13.58)ml明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在传统药物基础上加用重组人脑利钠肽治疗慢性心衰患者能够显著改善心脏收缩能力,减轻心肌损伤,疗效显著,值得积极推广。

不同加热温度对人心肌肌钙蛋白提取的影响

目的探讨人心肌肌钙蛋白提取过程中合适的热处理温度。方法取意外死亡２ｈ以内的人心室肌组织，经高速捣碎、缓冲液洗涤，并经１ｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ提取后，用不同加热温度、不同加热时间和不同饱和度硫酸铵分级沉淀提取人心肌肌钙蛋白（ＣＴｎＴ）。结果６０℃１５ｍｉｎ～３０ｍｉｎ处理杂蛋白含量较多；８０℃３０ｍｉｎ处理，ＣＴｎＴ损失较大，较为合适的热处理方法为７０℃１５ｍｉｎ～３０ｍｉｎ。结论以７０℃１５ｍｉｎ～３０ｍｉｎ的处理温度，可获得较好的纯化效果。

rhBNP对重症心力衰竭患者血清NT-proBNP和cTnT的影响

目的探讨重组人脑利钠肽(rhBNP)对重症心力衰竭患者血清氨基末端脑利钠肽前体(NT-proBNP)和心肌钙蛋白T(cTnT)的影响。方法 21例重症心力衰竭患者行rhBNP治疗,观察治疗前后心率、血压、24-h尿量、血清NT-proBNP和cTnT含量的变化。结果与治疗前相比,治疗后24-h尿量增多(P<0.01),心率、收缩压及血清cTnT水平下降(P<0.01或P<0.05),NT-proBNP水平无明显改变(P>0.05)。血清NT-proBNP与cTnT水平呈正相关(r=0.735,P<0.01)。结论rhBNP对重症心力衰竭患者有治疗作用,可在一定程度上改善心肌损伤程度。