宫颈癌患者癌组织c-Met mRNA与NF-κB mRNA表达的关系及其对预后的影响

目的分析肝细胞生长因子受体原癌基因c-Met mRNA与核因子-κB(NF-κB)mRNA在宫颈癌发病中的关系及对宫颈癌患者预后的影响。方法选取本院宫颈癌患者89例作为癌变组,宫颈癌前病变患者89例作为癌前病变组,因子宫肌瘤行全子宫切除患者89例作为正常宫颈组。采用RT-PCR检测3组宫颈组织中c-Met、NF-κB mRNA相对表达量。采用Spearman/Pearson分析c-Met mRNA与NF-κB mRNA在宫颈癌发病中的关系。采用Kaplan-Meier曲线分析不同c-Met mRNA、NF-κB mRNA表达水平患者的3年生存率。结果宫颈组织中c-Met、NF-κB mRNA相对表达量,癌变组>癌前病变组>正常宫颈组(P<0.05)。癌前病变组、癌变组c-Met mRNA与NF-κB mRNA呈正相关(P<0.001)。c-Met高表达与NF-κB mRNA高表达在宫颈癌发病中呈正向交互作用(P<0.05)。c-Met、NF-κB mRNA与宫颈癌临床分期、淋巴结转移、脉管浸润呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05)。癌变组c-Met、NF-κB mRNA高表达患者3年生存率低于低表达患者(P<0.05)。结论c-Met mRNA与NF-κB mRNA高表达在宫颈癌发病中呈正向交互作用,与临床分期、淋巴结转移、脉管浸润呈正相关,且宫颈癌患者3年生存率显著降低。

HCCR和HPV16/18在宫颈脱落细胞中的表达及意义

研究HCCR在宫颈脱落细胞(来自宫颈液基细胞学残液)中的表达及其与HPV16/18感染的关系,探讨其对宫颈上皮内瘤变和宫颈癌诊断的意义。选取570例宫颈上皮内瘤变和宫颈癌液基细胞学残液标本中具有相应组织学标本者31例,并随机选取10例正常标本作对照,采用免疫组化法和原位杂交法检测HCCR和HPV16/18。结果可见,HCCR在正常宫颈细胞及组织中呈现低表达,在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌细胞和组织中阳性率随着病变的升级而升高;HPV16/18 DNA的检出率随着宫颈病变的升级而升高;HCCR和HPV16/18在宫颈病变中的表达呈正相关(rs=1,P<0.005);无论是HCCR还是HPV16/18,在宫颈液基细胞学残液和相应宫颈组织中的检出率都是一致的。结论利用宫颈液基细胞学残液检测HCCR和HPV16/18对认识二者之间的关系及对宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的筛查诊断具有重要意义。

宫颈脱落细胞中HCCR的表达及意义

目的研究人宫颈癌基因(HCCR)在宫颈脱落细胞中的表达情况,探讨其对宫颈癌及癌前病变诊断的意义。方法采用Western blot及免疫组化SP法对79例宫颈脱落细胞中HCCR蛋白进行检测,其中正常宫颈上皮脱落细胞11例、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)53例、宫颈癌(CCa)15例。所有标本均来自中国医科大学附属第一医院。结果HCCR基因在正常宫颈脱落细胞中不表达或阳性率较低,在宫颈上皮内瘤变及宫颈癌中表达阳性率随病变加重而逐级升高。结论HCCR与宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的发生密切相关,检测宫颈脱落细胞中HCCR蛋白的水平对宫颈癌的筛查和诊断可能具有重要意义。

人子宫颈癌基因HCCR-2反义真核表达载体的构建及鉴定

目的克隆人子宫癌基因HCCR-2并构建其反义真核表达载体。方法从人肝癌细胞株HepG2提取RNA,利用RT-PCR方法,克隆出一包括HCCR-2编码区的长约1kb的片段,并将其与T载体连接,测序证实无误后,用SalⅠ、SacⅡ双酶切重组T载体,然后将该片段反向插入真核表达载体pIRES2-EGFP的多克隆位点,最后对重组真核表达载体进行双酶切鉴定。结果RT-PCR扩增出一长约1kb的HCCR-2片段,琼脂糖凝胶电泳显示目的片段成功反向连接到pIRES2-EGFP载体上。结论成功克隆了HCCR-2基因并构建了其反义真核表达载体pIRES2-EGFP/HCCR-2(-)。

HCCR-2反义真核表达载体对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响

目的构建HCCR-2反义真核表达载体,研究其对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响。方法通过MTT实验、流式细胞技术、平皿克隆形成实验、Millicell迁移实验分别检测HepG2肝癌细胞经HCCR-2反义真核表达载体转染前后细胞生长速度、单个细胞形成克隆能力、迁移能力的变化。结果MTT实验表明反义转染组细胞HepG2-H增殖能力明显低于HepG2组和HepG2-P组;流式细胞生长周期实验表明,与HepG2和HepG2-P细胞相比,HepG2-H组细胞增殖指数下降,细胞阻滞于G0/G1期,HepG2-H组单个细胞形成克隆的能力与HepG2组和HepG2-P组相比显著降低;Millicell迁移实验表明,HepG2-H细胞较HepG2和HepG2-P细胞迁移明显减少。结论HCCR-2反义真核表达载体可以明显抑制HepG2肝癌细胞增殖速度、单个细胞形成克隆能力、体外迁移能力。

HCCR mRNA在原发性肝细胞癌患者中的表达及临床意义

目的探讨人宫颈癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)m RNA在原发性肝细胞癌(primary hepatocellular carcinoma,PHC)患者中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR检测PHC癌组织、癌旁肝组织和肝硬化组织及各组外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的HCCR m RNA表达水平,并进行分析。结果 HCCR m RNA在PHC组织中的相对表达强度为0.83±0.10,癌旁肝组织中的相对表达强度为0.12±0.07,肝硬化组织中的相对表达强度为0.57±0.12,三组均数间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。PBMC中,肝癌患者HCCR m RNA的表达强度为0.55±0.06,肝硬化患者HCCR m RNA的表达强度为0.34±0.04,而正常人未检测出,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 PHC和肝硬化患者的组织和PBMC中HCCR表达明显增高,HCCR基因可能参与了PHC的发生与发展,其与PHC的恶变演进有一定的相关性。

上调HCCR-2基因表达对乳腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的利用细胞转基因技术探讨人宫颈癌癌基因-2(HCCR-2)对人乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其可能的分子机制。方法经脂质体介导将含有HCCR-2真核表达质粒转染人乳腺癌MCF-7细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆及Western blot鉴定;Western blot检测阳性细胞克隆Bcl-2、Bax蛋白表达改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率;噻唑盐(MTT)比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性。结果成功建立高表达HCCR-2的阳性MCF-7细胞克隆(M-23),并证实其Bcl-2蛋白表达与细胞增殖活性均显著增高,而Bax蛋白表达与细胞凋亡显著降低。结论上调MCF-7细胞HCCR-2基因后,细胞增殖活性增加,细胞凋亡降低,其作用机制与Bcl-2表达增加而Bax表达降低。

缺氧对人肝癌细胞株SMMC7721中HCCR表达的影响及其调控机制

背景：缺氧是实体瘤微环境的基本特征之一。人宫颈癌基因（HCCR）是新近发现的一种癌基因．在多种人类肿瘤中过表达。然而，尚缺乏HCCR在肿瘤缺氧环境中的表达及其调控机制的研究。目的：探讨缺氧对人肝癌细胞株SMMC7721中HCCR表达的影响及其调控机制。方法：SMMC7721细胞分别接受缺氧培养以及LY294002（P13K特异性抑制剂）和PD98059（MEK1特异性抑制剂）预处理＋缺氧培养，以蛋白质印迹法检测HCCR表达：将含HCCR启动子片段的荧光素酶报告基因质粒转染SMMC7721细胞，检测缺氧对HCCR启动子转录活性的影响。结果：缺氧环境下SMMC7721细胞中HCCR蛋白表达和转录活性均较常氧环境中升高，LY294002和PD98059可抑制缺氧环境下HCCR蛋白表达。结论：缺氧状态下人肝癌细胞株SMMC7721中HCCR蛋白表达和启动子转录活性增高。可能是肿瘤细胞在缺氧实体瘤组织中存活和快速增殖的重要机制之一。缺氧状态下HCCR蛋白表达受P13K／Akt和MAPK这两条信号通路的调节。

DCE-MRI、DWI联合血清c-Met、MACC1对宫颈癌盆腔淋巴结转移的诊断价值

目的探讨磁共振动态增强扫描成像(DCE-MRI)、磁共振弥散加权成像(DWI)联合血清人原癌基因编码蛋白(c-Met)、结肠癌转移相关基因1(MACC1)对宫颈癌盆腔淋巴结转移的诊断价值。方法回顾性分析2021年1月至2022年12月在新乡市中心医院诊治的100例宫颈癌患者的临床资料,按照是否出现盆腔淋巴结转移将患者分为转移组31例和未转移组69例,所有患者均做DCE-MRI、DWI检查和血清c-Met、MACC1检测。比较两组患者的DCE-MRI定量参数[血管外细胞外间隙容积分数(Ve)、容量转移常数(K_(trans))与速率常数(K_(ep))]、平均表观扩散系数(ADC)值及血清c-Met、MACC1水平,计算并比较DCE-MRI、DWI与血清c-Met、MACC1单独及联合诊断宫颈癌盆腔淋巴结转移的准确度、特异度、灵敏度。结果两组患者的Ve比较差异无统计学意义(P>0.05);转移组患者的K_(trans)、K_(ep)分别为(0.30±0.07)/min、(0.47±0.06)/min,明显高于未转移组的(0.22±0.05)/min、(0.43±0.07)/min,平均ADC值为0.82±0.15,明显低于未转移组的1.33±0.24,差异均有统计学意义(P<0.05);转移组患者的c-Met、MACC1水平分别为(127.53±27.48)μg/L、(9.24±3.01)ng/mL,明显高于未转移组的(81.25±18.75)μg/L、(5.21±1.37)ng/mL,差异均具有统计学意义(P<0.05);DCE-MRI、DWI与血清c-Met、MACC1四者联合诊断宫颈癌盆腔淋巴结转移的准确度、特异度、灵敏度均明显高于四者单独诊断,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论DCE-MRI、DWI联合血清c-Met、MACC1对宫颈癌盆腔淋巴结转移的诊断价值较高。

北京地区宫颈癌HPV16上游调控序列、E6、E7癌基因序列初步分析

为检测HPV16上游调控序列(Upstream regulatory region,URR)、E6、E7癌基因变异在北京地区宫颈癌患者癌组织中的分布特征,探讨该地区宫颈癌发生同HPV16变异株间的相关性,文章以提取的31例HPV16检测阳性宫颈癌组织DNA为模板,设计针对性引物扩增URR、E6、E73个目的片段,PCR产物直接测序并通过GenBank对比分析变异和分支鉴定情况。在所分析的宫颈癌组织中,URR是突变频率最高的片段,其次为E7,最保守的序列为E6。共发现热突变位点8个,分别为URR序列上G7521A(100%)、C7435G(96.77%)、C24T(45.16%)、A7729C(45.16%)、G7839A(45.16%);E6序列上T178G(41.94%);E7序列上A647G(45.16%)、T846C(45.16%)。HPV16分支分布频率最广的是As型(54.84%),其次为E型(45.16%)。研究结果提示,HPV16URR序列上G7521A、A7729C、G7839A,E6序列上T178G、T350G,E7序列上A647G、G658A等位点的变异可能与病毒致癌潜能及宫颈癌的发生相关。北京地区宫颈癌患者中As和E型可能是两种最主要的HPV16分支,这有可能会为HPV疫苗的研制和感染治疗提供有价值的信息。As型和E型病毒在不同年龄组和不同肿瘤分期组的患者中分布频率有差异,这可能会为揭示宫颈癌年轻化趋势提供新的线索。

人宫颈癌基因反义核酸抑制肝癌细胞生长作用的实验研究

目的探讨针对人宫颈癌基因(HCCR)反义核苷酸影响肝癌细胞增殖、凋亡的作用。方法构建pcD-NA3.1-HCCR反义真核表达质粒,转染HepG2细胞,实时定量PCR检测HCCR mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白表达水平,流式细胞仪观察HepG2细胞凋亡和细胞周期的变化,MTT法检测细胞的增殖活性。结果HCCR反义核酸可有效抑制HepG2细胞HCCR的表达,与转染前相比,转染后24小时HCCR mRNA水平下降到16%,其蛋白表达水平在24小时也明显降低。对细胞的增殖与凋亡活性检测显示:转染HCCR反义质粒后,HepG2细胞增殖受到抑制,转染后24小时抑制率为47.62%(P<0.05),细胞凋亡率为14.34%±0.91%,较对照组明显增多(t=21.799,P<0.05),细胞分裂多停止在G0G1期。结论HCCR反义核酸可以抑制HepG2细胞中HCCR的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,使细胞停滞于G1期。HCCR反义核酸用于肝癌细胞的基因治疗具有一定的潜在意义。

人巨细胞病毒感染与宫颈癌关系的研究

采用聚合酶链反应 (PCR)检测 30例宫颈癌、 30例宫颈炎、 8例正常宫颈组织标本中 HCMV早期 (IE)、晚期 (L)基因片段、 HCMV79- aa ORF癌基因及 HPV16、 18、 32、 5 2 b、 5 8型 DNA。结果表明 :除 HCMV L 基因外 ,以上各基因在宫颈癌组之检出率均显著高于宫颈炎组 ,且宫颈癌组 IE和 L 基因、HPV高危型和 HCMV同时感染的比值比 (OR)分别高于 IE或 L 基因、HPV高危型或 HCMV单独感染的 OR值之和。提示人巨细胞病毒与宫颈癌的发生有关 ,可通过其 IE基因启动、激活 HPV的致癌作用 ,HCMV79- aa

肝癌组织中人宫颈癌癌基因mRNA的表达及意义

目的观察人宫颈癌癌基因(HCCR)mRNA在肝癌和癌旁正常组织以及肝癌患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平。方法TRIZOL法提取肝癌组织和癌旁正常肝组织以及肝癌患者和正常人的PBMC的RNA,用RT-PCR技术分析HCCR基因在不同样品中的mRNA表达水平。结果在肝癌组织中,HCCR的mRNA相对表达强度为0.776±0.101,癌旁正常组织中的相对表达强度0.470±0.154,两者相比,P<0.05。在PBMC中,肝癌患者HCCR mRNA的表达强度为0.256±0.069,而正常人未检测出,两者相比,P<0.05。结论HCCR基因可能参与了肝癌的发生与发展,与肝癌的病理过程有一定的相关性。

深圳市妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E6、E7致癌基因的序列分析

目的检测深圳市宫颈癌患者癌组织中HPV16型E6、E7致癌基因的序列。方法采用PCR技术扩增1例在深圳生活17年宫颈癌HPV16型阳性患者组织中HPV16E6、E7基因,对其进行克隆、构建重组质粒并进行核酸限制性内切酶鉴定及DNA测序分析。结果成功地克隆了HPV16E6、E7基因,测序分析表明克隆的HPV16E6、E7基因与GenBank收录的德国标准株相比完全一致。结论深圳市妇女宫颈癌组织中HPV16型E6、E7致癌基因的序列与德国标准株相同。

宫颈病变中应用FISH技术检测C-MYC基因及HC2技术、SPR技术检测HPV结果的相关性

目的研究宫颈病变中人髓细胞增生原癌基因(C-MYC)和高危型人乳头瘤病毒及其之间的关系。方法选取同时行LCT和HC2-HPV检测的患者。C-MYC基因用FISH法检测,HPV分型用SPR法检测,任一结果阳性者行宫颈活检,最后按病检结果分组。结果在正常组、CINⅠ、CINⅡ-CINⅢ、ICC组,HC2-HPV的阳性率分别为31.25%、65.79%、90.90%、92.86%,差异有统计学意义(P <0.05)。在正常组、CINⅠ、CINⅡ-CINⅢ、ICC组,SPR-HPV的阳性率分别为18.75%、44.73%、68.18%、92.86%,差异有统计学意义(P <0.05)。C-MYC基因表达在正常组、CINⅠ、CINⅡ-CINⅢ、ICC组的阳性率分别为3.12%、47.37%、56.06%、92.86%,差异有统计学意义(P <0.05)。结论在宫颈病变中C-MYC基因异常扩增,且该基因高表达和HPV感染关系密切,C-MYC未来可能成为宫颈癌早期筛查标志物。

高危型HPV感染与C-MYC基因检测在宫颈病变诊断中的价值

目的检测人髓细胞增生原癌基因(myelocytomatosis oncogene,C-MYC)表达及高危型人乳头瘤病毒(High-Risk human papilloma virus,HR-HPV)的感染情况,探讨它们在宫颈病变筛查和诊断中的应用价值。方法选取2010年10月-2011年12月在昆明市妇幼保健院门诊就诊或入院自愿做宫颈癌筛查的患者1 200例,每位患者均行LCT和HC2-HPV检测。LCT剩余标本用荧光原位杂交(FISH)方法检测宫颈脱落细胞中C-MYC基因表达。任一结果阳性者取宫颈活检,最终取宫颈活检患者150例。以病理组织学结果为诊断金标准,将患者分为正常组32例、低度宫颈上皮内瘤变(CINⅠ)组38例、高度宫颈上皮内瘤变(CINⅡ/CINⅢ)组66例、宫颈浸润癌(ICC)组14例。结果 1在正常组,CINⅠ,CINⅡ/CINⅢ,ICC组,C-MYC基因的表达率分别为3.12%、47.37%、56.06%、92.86%,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。2在正常组,CINⅠ,CINⅡ/CINⅢ,ICC组,HR-HPV的检出率分别为31.25%、65.79%、90.90%、92.86%,正常组与宫颈病变各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。CINⅡ/CINⅢ,ICC组HR-HPV的检出率明显高于CINⅠ组(P<0.05)。3 C-MYC基因检测特异度高,但灵敏度低;而HR-HPV感染检测灵敏度高,但特异度低。4随着病理组织学病变程度加重,C-MYC基因阳性扩增和HC2-HPV阳性率均有不同程度的上升,且二者呈正相关(r=0.456,P=0.000)。结论 1C-MYC基因在CINⅠ,CINⅡ/CINⅢ,ICC组异常表达,且随着病变程度的增加阳性率也增加,特异度高,可能成为宫颈癌癌前病变的生物遗传学检测指标,并有望成为宫颈癌早期筛查方法;2HC2检测HR-HPV是一种有效的宫颈病变的管理手段,可以提高宫颈病变筛查的灵敏度,但是特异度有所降低;3C-MYC基因异常扩增和HPV感染在宫颈癌的发生发展过程中有着密切的关系。

hTERC基因和C-MYC基因在宫颈病变筛查和诊断中的应用

目的检测宫颈脱落细胞中人类染色体端粒酶基因(telomerase human gene,hTERC)和人髓细胞增生原癌基因(myelocytomatosis oncogene,C-MYC)的表达,探讨在宫颈病变的筛查和诊断中其所具有的实用价值。方法宫颈癌筛查患者均行宫颈脱落细胞中hTERC基因和C-MYC基因阳性表达的检测。结果(1)在正常组,低度宫颈上皮内瘤变组,高度宫颈上皮内瘤变组,宫颈浸润癌组,hTERC基因异常表达,且各组间差异比较有统计学意义(P<0.05);(2)在正常组,低度宫颈上皮内瘤变组,高度宫颈上皮内瘤变组,宫颈浸润癌组,各组间C-MYC基因的表达率比较存在差异,且有统计学意义(P<0.05)。结论(1)hTERC基因在正常组及不同级别的宫颈病变组均异常表达,且阳性率随着病变程度的增加而上升,可作为检测子宫颈癌癌前病变的生物遗传学指标,可期望成为筛查早期宫颈癌的方法之一;(2)C-MYC基因在正常组及不同级别的宫颈病变组异常表达,且阳性率随着病变程度的增加而增加,可作为检测子宫颈癌癌前病变的指标,且可期望成为早期宫颈癌筛查中一种新的检测手段。

乳腺癌组织中人宫颈癌基因的表达与预后的相关性

[目的]观察人宫颈癌基因(HCCR)的过度表达对评估乳腺癌患者预后的意义.[方法]选择105例因浸润性导管癌而行手术患者的肿瘤组织标本,采用免疫组织化学染色方法观察标本中HCCR、雌激素受体(ER)及孕酮受体(PR)的表达情况,分析HCCR表达与各组织学等级的关系、与ER,PR的相关性及与患者生存时间和生存率的相关性.[结果]105例乳腺癌患者中HCCR阳性表达率为26.7%.HCCR表达与临床分期、核异型性等级、核分裂、组织学等级及ER,PR表达均无相关关系.尽管呈HCCR的染色范围越广,患者的10年生存率越高的趋势,但无统计学意义.[结论]尚不能确定HCCR是乳腺癌的预后因子.

人宫颈癌基因表达载体的构建及其在肝癌相关研究中的价值

目的为人宫颈癌基因(HCCR)在肝癌发生、发展中的生物学效应及机制研究提供理想工具。方法培养人HepG2细胞,RT-PCR扩增出HCCR基因片段,将其连接到pCR T7 TOPO TA/NT克隆载体中,命名为pCRT7 TOPO TA/NT-HCCR。运用交叉引物PCR筛选正确连接的克隆。再用EcoR I和BamHI限制性内切酶酶切鉴定和测序验证。将其转化BL21细菌,用IPTG诱导其表达相应的蛋白质,并用Western blotting验证。结果pCR T7TOPO TA/NT-HCCR原核表达载体构建成功。酶切鉴定和测序均与预期一致。用IPTG诱导转化此质粒后的BL21细菌,得到相应大小的蛋白质。结论pCR T7 TOPO TA/NT-HCCR原核表达载体构建成功;其可作为HCCR基因功能研究及其与肝癌相关性研究的理想工具。

人宫颈癌基因在消化系肿瘤中的表达及其临床意义

背景:人宫颈癌基因(HCCR)是在宫颈癌中发现的一个新的癌基因,可能通过负向调节p53而促进肿瘤发生。目的:检测HCCR在人胃癌、结肠癌、肝癌中的表达,探讨其与肿瘤临床病理特征的关系。方法:以免疫共沉淀法检测HCCR在消化系肿瘤患者外周血中的表达,以细胞免疫荧光和免疫细胞化学染色检测HCCR在消化系肿瘤细胞株中的定位和表达,以免疫组化方法检测HCCR在肿瘤组织中的表达,并分析其与肿瘤临床病理特征的关系。结果:HCCR在消化系肿瘤患者外周血中有表达,肿瘤细胞株中其表达定位于细胞膜和细胞质。HCCR在人胃癌、结肠癌、肝癌组织中的阳性表达率显著高于相应正常或癌旁组织(P<0.05)。HCCR的阳性表达率与胃癌部位和肝癌组织学分级显著相关(P<0.05),与其他肿瘤临床病理特征均不相关。结论:HCCR在人消化系肿瘤细胞和组织中表达较强,可能与肿瘤的发生、发展有关,有望成为消化系肿瘤诊断的标记物。