白藜芦醇抑制HeLa细胞肿瘤活性的自由基机理

白藜芦醇是一种植物抗毒素 ,属多元酚类。虽然迄今的研究表明 ,白藜芦醇能有效抑制许多癌细胞的肿瘤活性 ,但均未从自由基生物学角度来阐明其抑制肿瘤活性的机理。该研究以离体HeLa细胞为材料 ,利用细胞培养法研究了白藜芦醇抗肿瘤活性的功效 ,以及产生这种功效的自由基途径 ,旨在从自由基生物学的角度进一步揭示白藜芦醇抗肿瘤活性的机理。噻唑蓝法及流式细胞仪分析结果表明 ,白藜芦醇能强烈抑制HeLa细胞增殖并阻断HeLa细胞由S期向G2期转变。HeLa细胞内源性活性氧 (ROS)及HeLa细胞内部氧化还原态的实验结果表明 ,白藜芦醇对细胞自分泌的总ROS有一定的抑制作用 ,它抑制HeLa细胞自分泌的O- 2 浓度与抑制HeLa细胞增殖之间有明显的相关关系 ;同时 ,白藜芦醇可明显增高HeLa细胞内源SOD的活性以及GSH的含量 ,但可使CAT的活性显著下降 ,提示白藜芦醇能显著改变细胞内部的氧化还原态。以上结果为白藜芦醇抗癌机制提供了自由基生物学方面的实验依据。

两组浓度的蛋白酶体抑制剂MG132诱导人宫颈癌细胞Hela凋亡

为了探讨不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132在诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡过程中作用,分别以两组浓度的蛋白酶体抑制剂MG132处理人宫颈癌细胞Hela,通过MTT法检测Hela细胞活力,应用AnnexinⅤ和PI双染的细胞流式法检测Hela细胞凋亡率,应用Western blotting和酶标仪法检测Hela细胞内Caspase-3活性变化的情况.结果表明:低浓度MG132诱导Hela细胞凋亡不明显,高浓度MG132诱导Hela细胞凋亡明显;不同浓度蛋白酶体抑制剂MG132诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的程度存在明显差异.

宫颈永生化细胞和癌细胞的胞质蛋白双向电泳图谱的建立及初步分析

目的:建立HPV-16阳性的宫颈上皮永生化细胞(H8细胞株)和宫颈癌细胞(CaSKi细胞株)胞质蛋白双向电泳图谱,并初步分析找出特征性的差异蛋白点。方法:分别培养H8和CaSki细胞,用亚细胞结构蛋白质提取试剂盒提取胞质蛋白进行双向电泳,用ImageMaster 2D V2002.1图像分析软件分析电泳图谱,筛选差异蛋白点。结果:获得了分辨率和重复性均较好的宫颈永生化细胞和癌细胞胞质蛋白2-DE图谱,并分析找出了显著的差异蛋白点8个,其中3种蛋白质在宫颈癌细胞株表达上调,1种蛋白质表达明显下调,2种蛋白质在宫颈癌细胞株表达缺失,2种蛋白质在永生化细胞株表达缺失。结论:应用亚细胞蛋白双向凝胶电泳技术对HPV-16阳性的宫颈癌前和癌变的胞质蛋白分析,能有效找出蛋白质表达差异点,为进一步确定宫颈癌前病变和癌细胞的关键性差异蛋白质的结构和功能奠定了基础。

傅里叶红外光谱研究光敏剂5-氨基酮戊酸的光动力作用机制

本文测定了光敏剂5-氨基酮戊酸对人宫颈癌细胞HeLa光敏作用后的傅里叶红外光谱。结果显示:光敏作用后,HeLa细胞磷酸二酯基团的对称伸缩振动峰1085cm-1和不对称伸缩振动峰1246cm-1蓝移,强度下降;蛋白质酰胺I带1656cm-1发生蓝移,酰胺Ⅱ带1546cm-1出现红移;CH2对称伸缩振动峰2858cm-1,峰位蓝移2cm-1,峰值明显减弱。结果表明:DNA、蛋白质和磷脂是5-氨墓酮戊酸光敏作用的主要靶分子。

栅列藻蛋白质提取液促进人子宫颈癌细胞的生长研究

本文采用ＭＴＴ［３（４，５ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ－２ｙｌ）－２，５ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ］快速微量比色技术发现斜生栅列藻（Ｓｃｅｎｅｄｅｓｍｕｓｏｂｌｉｑｕｕｓ）蛋白质提取液可促进动物细胞的生长．在０．５％胎牛血清（ＦＢＳ）的ＲＰＭＩ１６４０培养液中，加入９５μｇ／ｍｌ栅列藻提取液可使人子宫颈癌细胞（ＨｅＬａｃｅｌ）比对照组细胞增殖３倍左右．这种刺激动物细胞生长的活性物质分子量在３５００－８０００道尔顿（ｄａｌｔｏｎｓ）之间。

应用双向凝胶电泳分析顺铂对人宫颈癌细胞系HCE_1蛋白质表达谱的影响

目的 :分析顺铂对人宫颈癌细胞系HCE1蛋白表达谱的影响。方法 :MTT比色分析确立顺铂处理HCE1细胞的浓度。利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离顺铂处理前后人宫颈癌HCE1细胞的总蛋白质 ,凝胶银染显色 ,用Imagemaster软件行图像分析。结果 :顺铂处理HCE1细胞 30h的IC5 0值为 1.2 μg/ml。获得分辨率和重复性均较好的顺铂处理前后人宫颈癌细胞系HCE1双向凝胶电泳图谱 ,处理组和未处理组各 3块凝胶的平均蛋白质点数分别为 1136± 33和 96 3± 2 6 ,平均匹配率分别为 88.4 %和 87.3%。未处理组和处理组的 3块不同的胶间蛋白质点在IEF方向的偏差是 0 .6 76± 0 .15 5mm和 0 .86 5±0 .10 7mm ,在SDS PAGE方向上的偏差为 1.2 0± 0 .2 1mm和 1.38± 0 .2 36mm。制得未处理组和顺铂处理组平均胶 ,以平均胶进行匹配 ,匹配率为 81.2 %。筛选出差异蛋白质点 98个 ,其中 36个表达上调 ,37个表达下调 ,12个仅在HCE1未处理组表达 ,13个仅在顺铂处理组表达。结论 :建立了分辨率高且重复性较好的顺铂处理前后的人宫颈癌HCE1细胞系双向凝胶电泳图谱 ,识别到 98个差异蛋白质点 ,对这些差异蛋白质点进一步鉴定将为在蛋白质水平阐明顺铂的抗宫颈癌机制提供实验依据。

人乳头瘤病毒DNA阳性的外阴、宫颈组织病理学表现

目的 探讨外阴、宫颈人乳头瘤病毒 (HPV)感染与局部组织病理学改变的关系 ,评价组织病理学检查在HPV感染诊断中的意义。方法 采用原位杂交和聚合酶链反应 (PCR)方法 ,对 112例外阴、宫颈病变进行了HPV6B/ 11、16、18型DNA检测 ,并对HPVDNA阳性的病变进行组织病理诊断。结果 HPVDNA阳性者 82例 ,占73 .2 1% ,82例中 ,组织病理诊断为尖锐湿疣者 2 2例 ,其余 60例组织病理学均无明显尖锐湿疣病变 ,而为宫颈腺性糜烂、化生、上皮内瘤变 (CIN1～CIN3)以及外阴、宫颈鳞状细胞癌 ,甚至是正常宫颈。结论 HPV感染不仅与尖锐湿疣有关 ,还与上皮内瘤变及癌有关。因此 ,对外阴、宫颈病变除了常规的组织检查外 ,还应检测HPVDNA。

用光谱法研究光敏剂血卟啉单甲醚对肿瘤细胞光动力作用的分子机制

测定了光敏剂血卟啉单甲醚对人宫颈癌细胞HeLa光敏作用后的傅里叶红外光谱。结果显示:光敏作用后,HeLa细胞磷酸二酯基团的对称伸缩振动峰1085cm^(-1)和不对称伸缩振动峰1246cm^(-1)蓝移,强度下降:蛋白质酰胺Ⅰ带1656cm^(-1)发生蓝移,酰胺Ⅱ带1546cm^(-1)出现红移;CH_2对称伸缩振动峰2858cm^(-1),峰位蓝移2cm^(-1),峰值明显减弱:细胞的蛋白质和核酸谱峰面积比值D1085/D1546降低。提示细胞中的DNA、蛋白质和磷脂结构受到损伤。结果表明:DNA、蛋白质和磷脂是血卟啉单甲醚光敏作用的主要靶分子。

光动力作用诱导人宫颈癌细胞HeLa凋亡的红外光谱分析

研究光动力作用诱导人宫颈癌细胞HeLa凋亡的分子机制。利用傅里叶变换红外光谱(FTIR),分析光动力作用后,细胞中的核酸、蛋白质、脂类的谱图变化。结果显示,与对照组相比,表征核酸的3条谱线972,1083和1241 cm-1,峰强减小,峰位发生位移;表征脂质的2923 cm-1和2957 cm-1峰,波数增加,峰强度明显减弱;蛋白质二级结构中,无规卷曲和β转角的含量大幅上升,α螺旋和β折叠含量减少。实验结果表明,光动力作用使核酸、蛋白质、脂类受到损伤,从而诱导肿瘤细胞凋亡。

血管扩张刺激磷蛋白与微管蛋白的结合

目的探讨血管扩张刺激磷蛋白(VASP)及其丝氨酸157(p-VASP S157)和239(p-VASP S239)位点磷酸化与α-微管蛋白(α-Tubulin)之间的关系,明确VASP是一个新的微管相关蛋白。方法采用免疫荧光染色观察p-VASP S157、p-VASP S239和α-Tubulin在人宫颈癌上皮细胞HeLa的共定位;利用免疫共沉淀、微管沉淀和Western blot方法明确VASP及其不同位点磷酸化与α-Tubulin的结合情况。结果 VASP和p-VASP S157能够与α-Tubulin结合;p-VASP S239在细胞周期各个时期与α-Tubulin均无共定位关系。结论 VASP是一个新的微管相关蛋白,其丝氨酸157磷酸化与二者的结合相关。

CaSki细胞内HPV L1蛋白的表达

目的了解含人乳头瘤病毒(HPV)基因组的宫颈癌Ca Ski细胞中HPV晚期衣壳蛋白1(L1)的表达。方法以多价HPV L1小鼠单克隆抗体做探针,采用ELISA、免疫组化、Western blotting等方法,检测Ca Ski细胞内L1蛋白的表达;采用RT-PCR法检测细胞内L1 mRNA的表达。结果 Ca Ski细胞呈HPV L1阳性反应,显示细胞内有HPV L1蛋白存在;Ca Ski细胞内有L1 mRNA存在。结论包含HPV16混合基因组的Ca Ski细胞可以表达L1蛋白。