人巨细胞病毒pp150-pp65蛋白的表达与应用

目的构建并表达人巨细胞病毒(HCMV)pp150-pp65蛋白,将纯化的重组蛋白制备成胶体金试剂盒对其抗原性进行评价。方法采用PCR方法扩增HCMV pp150-pp65基因片段,连接到原核表达载体pET28a进行表达并纯化,采用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,并与北京英诺特生物技术有限公司合作研制出巨细胞IgG/IgM抗体联合检测试剂盒(胶体金法),与进口试剂盒(酶免法)进行临床标本比对试验。结果成功构建了HCMV的高效表达载体pET28a-pp150-pp65,并得到分子量在45kd的高表达蛋白,具有良好的抗原性。将该蛋白制备成胶体金试剂盒,经600份血清标本的检测,与进口CMV-IgG试剂盒进行比对,本试剂盒的阳性符合率和阴性符合率分别为92.7%和83.1%,总的符合率为90.2%;与进口CMV-IgM试剂盒进行比对,本试剂盒的阳性符合率和阴性符合率分别为88.1%和89.2%,总的符合率为88.5%,稳定性良好。结论高效表达纯化的pp150-pp65重组蛋白抗原性强,利用其建立的胶体金试剂盒与国产已上市试剂盒和进口试剂盒比对,不仅具有较高的灵敏度和特异性,而且经初步临床应用,表明该试剂盒能检测不同临床感染阶段的患者,具有较好的市场前景。

胶体金免疫斑点法检测人巨细胞病毒pp150抗体

目的 建立一种简便、快速的检测血清中人巨细胞病毒 (HCMV)抗 pp15 0抗体的胶体金免疫斑点法。 方法 采用Frens法制备胶体金颗粒 ,标记葡萄球菌A蛋白 (SPA) ,将本所利用基因工程技术生产的 pp15 0抗原固定于 0 45 μm孔径的硝酸纤维素膜上 ,制成免疫斑点检测装置。血清中抗pp15 0IgG与硝酸纤维素膜上的抗原结合 ,然后滴加胶体金标记的SPA ,在膜上可形成肉眼可见的红色斑点。结果 胶体金免疫斑点法与ELISA试剂盒对比检测了 2 0 0份临床确诊血清标本中抗 pp15 0IgG抗体 ,胶体金法的特异性和敏感性分别为 92 %和 90 %。 结论 胶体金免疫斑点法检测血清中的抗 pp15 0抗体特异性、灵敏度较高 ,简便快速 。