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GENOTOXIC EFFECT OF CIGARETTE SMOKE CONDENSATE (CSC) ON HUMAN DIPLOID CELL 2BS STRAIN
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作者 谷梅 胡国刚 罗贤懋 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1992年第2期42-45,共4页
A series of bioassays such as sister chromatid exchange frequencies ( SCE.), chromosomal aberration ( CA ), micronuclel rate (MN) and cell-cycle delay have been used to detecting the genotoxic effect of cigarette smok... A series of bioassays such as sister chromatid exchange frequencies ( SCE.), chromosomal aberration ( CA ), micronuclel rate (MN) and cell-cycle delay have been used to detecting the genotoxic effect of cigarette smoke condensate (CSC) on human diploid cell 2BS strain. The results suggested that a higher SCE, ( 17. 0/ cell) was observed In 2BS cells treated with CSC at 100 μg/ml, as compared with 6. 9/cell of the background (P<0. 001). CA rate was significantly increased from 4% to 36% In cells treated with 10 μg/ml CSC (P< 0.001). MN rate varied from 9 -26‰ In cells treated with CSC compared to that of control (6‰). Meanwhile, the cell-cycle of cells was markedly delayed by CSC. The survival rate of 2BS cells declined to 59. 6% for treatment with CSC at 200 μg/ ml. There was a dose-effect response In SCE., CA, MN rate. We proposed that active oxygen might responsible for genotoxiclty of CSC on cells. 展开更多
关键词 CSC cell GENOTOXIC EFFECT OF CIGARETTE SMOKE CONDENSATE ON human diploid cell 2bs strain
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^(99)Tc^m-N(NOEt)_2在KMB17人胚肺二倍体细胞与不同种类肺癌细胞中的摄取动力学比较 被引量:3
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作者 马铁昆 曹剑鸣 贾伟 《中国肺癌杂志》 CAS 2010年第4期307-310,共4页
背景与目的PET/CT显像价格昂贵,因此研究适合SPECT/CT的肿瘤显像剂显得尤为重要。99Tcm-N(NOEt)2[99Tcm-氮-二(N-乙基-N-乙氧基二硫代氨基甲酸盐)]可被肺肿瘤细胞等摄取。本文旨在细胞水平对比研究其在KMB17人胚肺二倍体成纤维细胞与多... 背景与目的PET/CT显像价格昂贵,因此研究适合SPECT/CT的肿瘤显像剂显得尤为重要。99Tcm-N(NOEt)2[99Tcm-氮-二(N-乙基-N-乙氧基二硫代氨基甲酸盐)]可被肺肿瘤细胞等摄取。本文旨在细胞水平对比研究其在KMB17人胚肺二倍体成纤维细胞与多种肺癌细胞中的摄取动力学差异,探讨99Tcm-N(NOEt)2显像对肺肿瘤的鉴别诊断价值。方法在等体积且细胞浓度为1×106/mL的YTMLC个旧人肺鳞癌细胞、SPC-A1人肺腺癌细胞、AGZY低转移人肺腺癌细胞、973人高转移肺腺癌细胞、GLC-82个旧人肺腺癌细胞以及KMB17人胚肺二倍体成纤维细胞的混悬培养液中分别加入等量99Tcm-N(NOEt)2,按300μL精确取样分装于试管中,37oC恒温培养,均分别于5min、15min、30min、45min、60min、75min、90min离心沉淀,测定细胞内放射性计数,计算各时间点各种细胞对99Tcm-N(NOEt)2的摄取百分率。结果6种细胞除SPC-A1细胞与973细胞之间的差异无统计学意义外(LSD-t检验,P=0.838),其余两两之间的差异均有统计学意义(P<0.001);细胞的摄取率大小关系为:973与SPC-A1>YTMLC>GLC-8->AGZY>KMB17;30min-45min时摄取率逐渐趋于平稳,45min摄取率均大于其摄取峰值的96.6%。结论99Tcm-N(NOEt)2显像在肺肿瘤的鉴别诊断中有一定的临床应用价值,且早期显像在30min左右是适合的。 展开更多
关键词 肺肿瘤 肺癌细胞 人胚肺二倍体细胞KMB17 N(NOET)2 药代动力学
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狂犬病病毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株的适应传代 被引量:4
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作者 何丽芳 陈敏 +8 位作者 张益丽 任正勇 胡超 高显专 赵振鑫 马万 李兵 白梅 马波 《微生物学免疫学进展》 2014年第5期1-4,共4页
目的:建立狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的传代适应株。方法用狂犬病病毒固定毒CTN-1V株经昆明小鼠鼠脑回传后的病毒接种Walvax-2细胞,连续传代,检测各代次病毒的滴度及免疫原性。结果CTN-1V株能较好地适应Wal... 目的:建立狂犬病病毒固定毒CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的传代适应株。方法用狂犬病病毒固定毒CTN-1V株经昆明小鼠鼠脑回传后的病毒接种Walvax-2细胞,连续传代,检测各代次病毒的滴度及免疫原性。结果CTN-1V株能较好地适应Walvax-2细胞,通过连续带毒传代至第7代,病毒滴度可达6.78lgLD50/mL,并在第10~15代内滴度维持在7.0lgLD50/mL以上,15~30代滴度稳定在7.0lgLD50/mL左右。以15代适应毒株CTN-1V-HDCP15制备的疫苗原液,各项指标均符合《中华人民共和国药典》三部(2010版)的要求,疫苗效力在6.0IU/剂以上。结论所获人胚肺二倍体细胞Walvax-2株传代适应狂犬病毒固定毒株CTN-1V-HDC可用于人用狂犬病疫苗的生产开发。 展开更多
关键词 狂犬病毒CTN-1V株 人胚肺二倍体细胞 适应 传代 狂犬病疫苗
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人二倍体细胞(2BS株)细胞库的建立及生物学特性鉴定 被引量:6
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作者 梁本 王佳凤 +9 位作者 侯良玉 麻广 李永忠 李立 哈秀杰 李开军 单玉杰 林崇健 刘晔 黄林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第11期1384-1387,共4页
目的建立人二倍体细胞(2BS株)主细胞库和工作细胞库。方法将人二倍体细胞(2BS株)扩大培养后冻存,建立主细胞库和工作细胞库,采用台盼蓝染色计数细胞,计算细胞活力,并进行染色体、外源病毒因子、微生物污染、致瘤性的检测及鉴别试验... 目的建立人二倍体细胞(2BS株)主细胞库和工作细胞库。方法将人二倍体细胞(2BS株)扩大培养后冻存,建立主细胞库和工作细胞库,采用台盼蓝染色计数细胞,计算细胞活力,并进行染色体、外源病毒因子、微生物污染、致瘤性的检测及鉴别试验。将全面检定合格的工作细胞库细胞分别接种至T75一次性培养瓶、3 L玻璃转瓶和10层细胞工厂,观察细胞形态;将水痘病毒分别按0.010 5、0.012 8、0.018 8 MOI接种至T75一次性培养瓶、3 L玻璃转瓶和10层细胞工厂上的单层细胞,收获病毒原液,检测病毒滴度。结果主细胞库细胞活力为94.1%,工作细胞库细胞活力为94.4%;1 000个处于分裂相时期的细胞的核型分析结果均在《中国药典》三部(2010版)人二倍体细胞染色体分析标准的规定范围内;细胞上清液和裂解液中人外源病毒因子检测结果均为阴性,符合《中国药典》三部(2010版)规程要求;细胞均贴壁,成纤维细胞形态,种属鉴别为人细胞B型;细胞库未被细菌、真菌、病毒及支原体污染,也未出现致瘤性。建立的细胞库在3种培养器皿中均可在工艺要求时间内生长为单层,单位面积活细胞浓度在(2.01~2.59)×105个/cm2之间,收获的病毒滴度在5.0~5.25 lg PFU/ml之间,符合成都生物制品研究所有限责任公司《水痘减毒活疫苗制造及检定规程》要求。结论建立了人二倍体细胞(2BS株)主细胞库和工作细胞库,为2BS细胞应用于水痘减毒活疫苗的研发和生产提供细胞资源和理论依据。 展开更多
关键词 人二倍体细胞(2bs株) 细胞库 生物学特性
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裙带菜多糖抗肿瘤作用的研究 被引量:29
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作者 王雪 邹向阳 +3 位作者 郭莲英 邢嵘 毕向东 侯林 《大连医科大学学报》 CAS 2006年第2期98-100,共3页
[目的]观察裙带菜多糖的体内、外抗肿瘤作用,并对其机制进行讨论。[方法]采用MTT法观察裙带菜多糖体外对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用;通过对615荷瘤小鼠瘤重及免疫器官脾脏的研究,观察了裙带菜多糖的体内抗肿瘤作用。[结果]与阴性对照... [目的]观察裙带菜多糖的体内、外抗肿瘤作用,并对其机制进行讨论。[方法]采用MTT法观察裙带菜多糖体外对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用;通过对615荷瘤小鼠瘤重及免疫器官脾脏的研究,观察了裙带菜多糖的体内抗肿瘤作用。[结果]与阴性对照组相比裙带菜多糖各浓度组体外对人肝癌细胞HepG-2均有很强的抑制作用(P<0.01),其中15、10 mg/mL组的抑制率分别为57.20%、51.79%,略低于5-FU组;在荷瘤小鼠实验中,与空白对照组相比裙带菜多糖各浓度组均有很强的肿瘤抑制作用,其中400、200 mg/kg组抑瘤率分别为69.13%、42.11%,与5-FU组相近。[结论]裙带菜多糖对人肝癌细胞HepG-2抑制效果显著,小鼠体内实验也证实了裙带菜多糖较强的抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 裙带菜多糖 HepG-2人肝癌细胞株 抗肿瘤活性
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病毒感染复数对狂犬病毒PM株增殖的影响 被引量:6
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作者 陈智 孙艳 +4 位作者 牟建超 刘莉娜 刘宇 刘辉 刘杰 《微生物学免疫学进展》 2016年第5期30-33,共4页
目的:探讨不同感染复数(Multiplicity of infection,MOI)的狂犬病毒PM株在人二倍体细胞(2BS株)中增殖的影响,确定感染复数。方法将狂犬病毒PM株按照MOI 0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20接种至2BS细胞中,用显微镜观察接种病毒... 目的:探讨不同感染复数(Multiplicity of infection,MOI)的狂犬病毒PM株在人二倍体细胞(2BS株)中增殖的影响,确定感染复数。方法将狂犬病毒PM株按照MOI 0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20接种至2BS细胞中,用显微镜观察接种病毒后细胞的形态变化;培养3-5d后,第一次收获病毒液;更换培养液继续培养3-4d后,进行第二次收获。采用小鼠脑内滴定法测定狂犬病毒滴度,通过NIH法测定灭活病毒液的效价。结果当MOI为0.05-0.10时,细胞圆缩30%-40%,细胞能维持较好的生长形态,可收获病毒,病毒收获液的滴度较高(〉5.0 lgLD50/mL),且灭活后病毒液的效价较高(〉4.0IU/mL)。结论确定狂犬病毒PM株在人二倍体2BS细胞增殖的适宜MOI,为人用狂犬病疫苗生产工艺的优化提供了依据。 展开更多
关键词 狂犬病毒(PM株) 2bs细胞 感染复数 病毒滴度 效价
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HRSV在人二倍体细胞上的生长动力学研究
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作者 谢忠平 龙润乡 +3 位作者 李华 杨蓉 蒋蕊鞠 陈思瑾 《昆明医学院学报》 2009年第8期138-141,共4页
目的研究人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)在人二倍体KMB17细胞上的增殖动力学,为病毒的体外细胞大量繁殖创造条件.方法将HRSVA2株接种到人二倍体KMB17细胞,采用微量细胞病变法在不同时间检测病毒的感染性滴度... 目的研究人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)在人二倍体KMB17细胞上的增殖动力学,为病毒的体外细胞大量繁殖创造条件.方法将HRSVA2株接种到人二倍体KMB17细胞,采用微量细胞病变法在不同时间检测病毒的感染性滴度,绘制一步生长曲线;同时,以不同剂量的病毒感染复数(MO)I感染细胞,分析细胞开始出现病变及所有接种孔全部病变的时间,并检测收获物的感染性滴度,确定最佳MOI.结果HRSV在KMB17细胞上的感染增殖一步生长曲线分析提示,该病毒在培养到2~4d后开始病变,第5~10天呈对数增长,其增殖高峰为10~11d,10d后增殖趋于平缓;接种MOI越大,开始出现病变时间及完全病变的时间都越早.接种100、10及1个MOI时,接种后2~3d均出现病变,第6天时三组细胞病变率均为100%,感染性滴度为7.37~7.50lgCCID50/mL,三组之间无明显的差异;接种在0.1、0.01及0.001个MOI时,接种后第4天有30%的细胞出现病变,第8~9天时细胞病变率也均达到100%,感染性滴度在6.50~7.0lgCCID50/mL之间;当接种在0.0001个MOI以下时,接种后第5~6天才出现病变,至第14天时细胞仍未能完全产生病变,发生病变的细胞收获物其感染性滴度仅为6.00~6.12lgCCID50/mL.结论HRSVA2株病毒在KMB17细胞内能良好增殖,其增殖高峰为10~11d,收获物感染性滴度最高可达7.50lgCCID50/mL,接种最佳MOI约为0.1~1.0. 展开更多
关键词 人呼吸道合胞病毒 人二倍体细胞 A2 生长曲线
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麻疹病毒长-47纯化株(2BS细胞)毒种库的建立 被引量:1
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作者 沈红杰 张宇 +4 位作者 黄果勇 李海燕 闫磊 王玮 郑晓丽 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第12期1339-1343,共5页
目的建立以人胚肺二倍体细胞(2BS)为基质的麻疹病毒长-47纯化株毒种库。方法将麻疹病毒长-47纯化株毒种(CEC)主代主种子批适应于2BS细胞,传至第4代和第8代,分别作为主种子批及工作种子批,对毒种进行鉴别试验、无菌试验、支原体检查... 目的建立以人胚肺二倍体细胞(2BS)为基质的麻疹病毒长-47纯化株毒种库。方法将麻疹病毒长-47纯化株毒种(CEC)主代主种子批适应于2BS细胞,传至第4代和第8代,分别作为主种子批及工作种子批,对毒种进行鉴别试验、无菌试验、支原体检查、外源因子检查和病毒滴度检测,并对主种子批毒种进行猴体神经毒力试验和猴体免疫原性检测。将毒种连续传代,观察各代次病毒的收获时间,并测定病毒滴度,分析毒种的传代稳定性;将主种子批和工作种子批分别置于-20和-70℃保存,不同时间取样,检测病毒滴度,分析毒种保存温度稳定性;选取4个代次毒种(D4、D8、D15、D19)提取病毒核酸,扩增H基因序列,分析H基因在传代过程中的遗传稳定性。结果主种子批和工作种子批毒种鉴别试验、无菌试验、支原体及外源因子检查均符合《中国药典》三部(2010版)要求,病毒滴度分别为5.88和6.00 log CCID50/ml,主种子批毒种具有良好的安全性及免疫原性。麻疹病毒长-47纯化株毒种适应于2BS细胞后,收获病毒时间一般在6-7 d,病毒滴度稳定在5.5-6.5 log CCID50/ml之间。主种子批和工作种子批病毒于-20和-70℃保存10个月,病毒滴度无明显变化。D4-D19代病毒无核苷酸发生改变,与麻疹病毒Chang-47(Gen Bank登录号:EF033071)比对结果显示,D4-D19代病毒核苷酸序列21 nt由G→C,属于同义突变,同源性达99.9%。结论建立了麻疹病毒长-47纯化株(2BS)毒种库,并按照《中国药典》三部(2010版)要求进行了全面检定,为制备以人胚肺二倍体细胞为基质的麻疹减毒活疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 麻疹病毒长-47纯化株 人二倍体细胞 毒种库 基因稳定性
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人二倍体细胞(2BS株)生产终末细胞特异性病毒检测
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作者 王红 潘明 +2 位作者 刘菊 李天舒 何树森 《预防医学情报杂志》 CAS 2011年第6期435-436,共2页
目的对人二倍体细胞(2BS株)生产终末细胞进行外源性特异性病毒检测。方法运用实时荧光PCR法检测人二倍体细胞(2BS株)的生产终末细胞的细胞样本—细胞裂解上清液的人鼻咽癌病毒、人巨细胞病毒、人逆转录病毒(H IV)、人乙型肝炎病毒、人... 目的对人二倍体细胞(2BS株)生产终末细胞进行外源性特异性病毒检测。方法运用实时荧光PCR法检测人二倍体细胞(2BS株)的生产终末细胞的细胞样本—细胞裂解上清液的人鼻咽癌病毒、人巨细胞病毒、人逆转录病毒(H IV)、人乙型肝炎病毒、人丙型肝炎病毒、人乳头瘤病毒、腺病毒及人单纯疱疹病毒核酸。结果人二倍体细胞(2BS株)生产终末细胞的细胞样本中未检测到8种外源性特异性病毒核酸。结论人二倍体细胞(2BS株)生产终末细胞的细胞样本的外源性特异性病毒检测项目合格。 展开更多
关键词 人二倍体细胞(2bs株) 生产终末细胞 实时荧光PCR法 特异性病毒
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人二倍体细胞乙型脑炎灭活疫苗毒种的质量评价
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作者 徐宏山 沈慧莉 +3 位作者 付瑞 刘欣玉 李玉华 叶强 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期542-546,共5页
目的:对人二倍体细胞(ZFB-3)乙型脑炎灭活疫苗毒种进行质量评价。方法:通过鉴别试验对毒种进行鉴别,以鉴别是否为乙脑病毒;通过脑内滴定法对毒种进行病毒滴度检测,以评估其在人二倍体细胞(ZFB-3)上的适应性和增殖能力;对毒种进行无菌检... 目的:对人二倍体细胞(ZFB-3)乙型脑炎灭活疫苗毒种进行质量评价。方法:通过鉴别试验对毒种进行鉴别,以鉴别是否为乙脑病毒;通过脑内滴定法对毒种进行病毒滴度检测,以评估其在人二倍体细胞(ZFB-3)上的适应性和增殖能力;对毒种进行无菌检查、支原体检查、外源病毒因子检查,以检测是否有外源性污染。结果:证明毒种为乙脑病毒,且具有较高的病毒滴度,在人二倍体细胞(ZFB-3)上已较好地适应,且无细菌、真菌、支原体、外源病毒因子污染。结论:人二倍体细胞(ZFB-3)乙型脑炎灭活疫苗毒种质量符合要求,可应用于疫苗的生产。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 灭活疫苗 人二倍体细胞 毒种 质量评价
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半夏生物碱对人肝癌细胞Bel-7402增殖的影响 被引量:9
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作者 陈芳 杨李 +1 位作者 王晓昆 张宜 《中国药房》 CAS CSCD 北大核心 2011年第43期4048-4050,共3页
目的:研究半夏生物碱对人肝癌细胞Bel-7402增殖的影响。方法:将Bel-7402与半夏生物碱(400、200、100μg·mL-1)共同培养,采用MTT比色法测定半夏生物碱对Bel-7402增殖的影响,TUNEL技术检测其对Bel-7402细胞凋亡的影响,免疫组化SABC... 目的:研究半夏生物碱对人肝癌细胞Bel-7402增殖的影响。方法:将Bel-7402与半夏生物碱(400、200、100μg·mL-1)共同培养,采用MTT比色法测定半夏生物碱对Bel-7402增殖的影响,TUNEL技术检测其对Bel-7402细胞凋亡的影响,免疫组化SABC染色法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达情况。结果:作用24h后,半夏生物碱高、中、低剂量(400、200、100μg·mL-1)对Bel-7402增殖有显著抑制作用,且抑制作用随着药物浓度增加而加强,最高抑制率可达到36.98%。TUNEL结果显示,半夏生物碱高、中、低剂量(400、200、100μg·mL-1)能有效诱导Bel-7402细胞凋亡,且呈量效关系。半夏生物碱高、中、低剂量(400、200、100μg·mL-1)可使Bax表达显著升高而Bcl-2表达显著下降。结论:半夏生物碱对Bel-7402生长有一定的抑制作用,可诱导其凋亡,其作用机制可能为上调Bax和下调Bcl-2。 展开更多
关键词 半夏生物碱 Bel-7402肿瘤细胞 细胞凋亡 B细胞淋巴瘤/白血病-2 B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白
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天佛参口服液诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡及机制探讨 被引量:2
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作者 党琦 杨国武 李新民 《肿瘤研究与临床》 CAS 2002年第1期15-17,共3页
目的 :探讨天佛参口服液诱导人喉癌 Hep- 2细胞凋亡及其机制。方法 :采用体外细胞培养实验方法。应用 MTT、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测、原位末端标记等技术 ,观察药物对细胞的抑制率及凋亡形态 ,检测凋亡率及胞内 [C... 目的 :探讨天佛参口服液诱导人喉癌 Hep- 2细胞凋亡及其机制。方法 :采用体外细胞培养实验方法。应用 MTT、透射电镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪检测、原位末端标记等技术 ,观察药物对细胞的抑制率及凋亡形态 ,检测凋亡率及胞内 [Ca2 +]变化。结果 :MTT测得细胞抑制率随时间、剂量而增大 ,透射电镜下见到凋亡细胞及凋亡小体形成 ,DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示清晰的 DNA梯状条带 ,原位末端标记检测出细胞凋亡率亦有时间、剂量依赖性 ,细胞内 [Ca2 +]随药物浓度的增加而升高 ,且具有统计学意义。结论 :天佛参口服液确有诱导 Hep- 2细胞凋亡的作用 ,其机制可能与胞内 [Ca2 +]变化有关。 展开更多
关键词 天佛参口服液 HEP-2细胞 细胞凋亡 喉癌 中药 抗癌药
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牵张应力对人牙周膜细胞MMP-2表达的影响及相关信号通路的研究 被引量:1
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作者 刘名燕 李燕 冯云霞 《临床口腔医学杂志》 2014年第5期286-289,共4页
目的:探讨NF-κB通路对牵张应力介导的人牙周膜细胞(HPDLCs)中MMP-2表达的影响。方法:按胶原酶消化法培养HPDLCs,分为5组:非加力对照组(A组);12%形变率,3 h组(B组);12%形变率,6h组(C组);12%形变率,12 h组(D组);12%形变率+PDTC干预,12h... 目的:探讨NF-κB通路对牵张应力介导的人牙周膜细胞(HPDLCs)中MMP-2表达的影响。方法:按胶原酶消化法培养HPDLCs,分为5组:非加力对照组(A组);12%形变率,3 h组(B组);12%形变率,6h组(C组);12%形变率,12 h组(D组);12%形变率+PDTC干预,12h组(E组),通过细胞牵张应力加载系统施加机械牵张应力,结束后收集细胞提取蛋白,用蛋白印迹法检测MMP-2蛋白表达的变化。结果:B、C、D组MMP-2表达大于A组,差异有统计学意义(P<0.05),且随着作用时间的延长蛋白表达增加;NF-κB通路抑制剂PDTC可抑制机械牵张应力作用下牙周膜细胞MMP-2表达的增加。结论:持续机械牵张应力可诱导人牙周膜细胞MMP-2表达的增加,从而影响牙周组织细胞外基质代谢,机械牵张应力可通过NF-κB通路影响MMP-2蛋白的表达。 展开更多
关键词 NF-ΚB通路 牵张应力 人牙周膜细胞 MMP-2
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狂犬CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的病毒收获液制备工艺研究 被引量:5
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作者 徐道俊 段清堂 +5 位作者 鲁卫东 杨燕羽 马波 李子财 李宛馀 刘馨 《药物生物技术》 CAS 2017年第5期381-385,共5页
采用狂犬病病毒株CTN-1V株接毒于人二倍体细胞Walvax-2株进行病毒收获液制备工艺研究。接毒时,采用不同的人二倍体细胞量、不同的接毒方式及不同的moi进行比较;接毒后,待带毒细胞长至致密单层即95%以上,采用直接换病毒维持液和带毒传一... 采用狂犬病病毒株CTN-1V株接毒于人二倍体细胞Walvax-2株进行病毒收获液制备工艺研究。接毒时,采用不同的人二倍体细胞量、不同的接毒方式及不同的moi进行比较;接毒后,待带毒细胞长至致密单层即95%以上,采用直接换病毒维持液和带毒传一代后再换维持液的方式进行比较;同时采用不同培养基维持液、不同pH值的维持液及对不同的病毒收获时间进行比较;通过测定病毒收获液的滴度来确定狂犬病病毒株CTN-1V株接毒于人二倍体细胞Walvax-2株上的病毒收获液最适制备工艺条件。接毒时,采用人二倍体细胞量≥2亿,37℃悬浮混合吸附30 min的方式及0.05 moi;接毒后采用美迪DMEM+0.3%人血白蛋白作为病毒维持液、pH为7.8~8.0的维持液及从换维持液d 3开始收获病毒液,并换上新的维持液,之后再进行5 d及7 d病毒液的收获,通过动物法和细胞法测定收获液的病毒滴度,3次收获液的病毒滴度均大于7.0 lg LD50/m L。建立起了稳定的狂犬病病毒株CTN-1V株在人二倍体细胞Walvax-2株上的病毒收获液制备工艺。 展开更多
关键词 人二倍体细胞Walvax-2 狂犬病病毒株CTN-1V株 病毒维持液 病毒收获液 病毒滴度 moi
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甲肝病毒YN5D株在人二倍体细胞系W2上的适应性 被引量:1
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作者 徐道俊 陆伟 +3 位作者 钱雯 段清堂 马波 刘馨 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第4期337-340,共4页
目的研究甲肝病毒YN5D株在人二倍体细胞Walvax-2(W2)上的传代适应性,并确定其在W2细胞上培养的最适条件。方法将甲肝病毒YN5株P23代采用混合吸附的方式接种于T225细胞培养瓶,连续传至30代,检测各代次YN5D株病毒的抗原滴度及感染性滴度;... 目的研究甲肝病毒YN5D株在人二倍体细胞Walvax-2(W2)上的传代适应性,并确定其在W2细胞上培养的最适条件。方法将甲肝病毒YN5株P23代采用混合吸附的方式接种于T225细胞培养瓶,连续传至30代,检测各代次YN5D株病毒的抗原滴度及感染性滴度;将甲肝病毒YN5D株P29代以不同的MOI接种W2细胞,以最佳MOI接种细胞,确定最佳收毒时间;建立甲肝病毒YN5D株三级种子库,并进行检定。结果甲肝病毒YN5株连续传至30代,抗原滴度及感染性滴度均保持在10 240 EU/mL和7.00 lgCCID_(50)/mL以上;当接毒比例为0.5 MOI时,抗原滴度及感染性滴度均达到最高;当培养至24~28 d时,抗原滴度及感染性滴度均达到最高,分别为2 560 EU/mL和7.24 lgCCID_(50)/mL。三级毒种库各项检定结果均符合《中国药典》三部(2015版)要求。结论确定了甲肝病毒YN5D株在人二倍体细胞系W2上的传代适应性,并优化了细胞工厂的培养条件,为人二倍体甲肝疫苗临床申报样品的制备工艺奠定了基础。 展开更多
关键词 甲型肝炎病毒 YN5D株 人二倍体细胞 适应性
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甲型肝炎病毒SYX1株在人二倍体细胞MRC-5上的适应性及遗传稳定性
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作者 李芳芳 廖辉 +1 位作者 杨文腰 周荔葆 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期43-47,共5页
目的探讨甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)SYX1株在人二倍体细胞MRC-5上的适应性及遗传稳定性。方法将来源于甲肝患者粪便的HAV SYX1株接种至MRC-5细胞,连续传代至第28代,检测第1~26代病毒的抗原含量和病毒滴度;镜下观察第6代病毒... 目的探讨甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)SYX1株在人二倍体细胞MRC-5上的适应性及遗传稳定性。方法将来源于甲肝患者粪便的HAV SYX1株接种至MRC-5细胞,连续传代至第28代,检测第1~26代病毒的抗原含量和病毒滴度;镜下观察第6代病毒的形态,并检测其理化性质。取第13~15代病毒进行病毒增殖动态研究,确定病毒增殖高峰期。选择第8、12、18、20、22、25、26和28代病毒,提取病毒基因组RNA进行序列测定,分析其遗传稳定性。建立HAV SYX1株主种子批和工作种子批,按照《中国药典》三部(2020版)要求进行检定。结果HAV SYX1株在MRC-5细胞上连续传至8代后,抗原含量稳定在160~320 EU/mL之间,病毒滴度维持在7.3~8.3 lgCCID_(50)/mL;病毒颗粒有空心和实心两种类型,直径为27~32 nm,呈球形,无包膜,表面无突起;可耐受低pH及乙醚。确定病毒增殖高峰期为10 d,抗原含量达160 EU/mL以上,病毒滴度达7.0 lgCCID_(50)/mL以上。HAV SYX1株为HAV IB亚型,传代过程中所有结构蛋白编码区基因序列未发生突变。HAV的主种子批和工作种子批的各项检定结果均符合相关要求。结论HAV SYX1株在MRC-5上传代具有良好的适应性及遗传稳定性,可用于甲肝灭活疫苗的研究及生产。 展开更多
关键词 甲型肝炎病毒SYX1株 人二倍体细胞MRC-5 适应性 遗传稳定性
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STR图谱用于生物制品生产用人源细胞鉴别的研究 被引量:10
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作者 孟淑芳 吴瑜 +3 位作者 冯建平 吴雪伶 王佑春 李德富 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期636-641,共6页
目的研究短串联重复序列(STR)图谱鉴别方法在生物制品生产用人源细胞质量控制中的应用。方法采用PCR一毛细管电泳分析方法,分别建立检测9个和16个人STIR位点的方法鉴别人源细胞,并对来自不同生物制品生产单位、不同传代水平的病毒... 目的研究短串联重复序列(STR)图谱鉴别方法在生物制品生产用人源细胞质量控制中的应用。方法采用PCR一毛细管电泳分析方法,分别建立检测9个和16个人STIR位点的方法鉴别人源细胞,并对来自不同生物制品生产单位、不同传代水平的病毒性疫苗生产用人二倍体细胞株及基因治疗制品生产用的293细胞进行STR图谱的检测和比较。结果建立人源细胞株的STR图谱分析方法。13个单位提供的病毒疫苗生产用21株人二倍体细胞中,除1株细胞并非MRC-5细胞外,其他细胞均可认定为本细胞,且未发现交叉污染现象。而8个单位提供的12株基因治疗用293细胞的STIR图谱则存在明显差异,提示该类细胞可能存在来源、基因修饰改造背景不清及传代过程中遗传特性不稳定的因素。结论STR图谱分析灵敏度高、特异性强,可用于生产用人源细胞株/系间的鉴别。 展开更多
关键词 细胞鉴别 STR图谱 人二倍体细胞 293细胞
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不同生产工艺制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)的比较 被引量:2
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作者 李立 侯良玉 +10 位作者 麻广 丁秀红 李永忠 哈秀杰 曾昊 李毅 邹蔚然 林崇建 单玉杰 刘晔 黄林 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第2期177-181,共5页
目的采用细胞工厂替代传统转瓶工艺制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)。方法分别用细胞工厂和3 L转瓶培养2BS细胞,制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)各6批,采用Countstar全自动细胞计数仪进行细胞计数,并以计数结果中的单位面积细胞数、成... 目的采用细胞工厂替代传统转瓶工艺制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)。方法分别用细胞工厂和3 L转瓶培养2BS细胞,制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)各6批,采用Countstar全自动细胞计数仪进行细胞计数,并以计数结果中的单位面积细胞数、成活率及消化后细胞的平均直径为指标,考察细胞质量,同时采用蚀斑法检测原液、成品及成品37℃放置7 d后(热稳定性)的病毒滴度。结果采用细胞工厂连续制备的6批2BS细胞的平均单位面积细胞数、细胞平均成活率均略优于3 L转瓶培养工艺,平均直径变动范围小于3 L转瓶;细胞工厂制备的6批疫苗,平均原液滴度为5.58 lg PFU/ml,平均成品滴度为4.78 lg PFU/0.5ml,37℃放置7 d后的平均病毒滴度为4.13 lg PFU/0.5ml,优于3 L转瓶。结论利用细胞工厂制备水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株),可获得更高滴度病毒液,降低疫苗生产过程中的劳动强度及污染风险,并提高了疫苗产量及质量的稳定性,适合于水痘减毒活疫苗(VZV 84-7株)的规模化生产。 展开更多
关键词 细胞工厂 人二倍体细胞(2bs株) 水痘减毒活疫苗
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狂犬病毒PM株在人用狂犬病疫苗中的研究及应用回顾 被引量:4
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作者 石磊泰(综述) 李玉华(审校) 俞永新(审校) 《微生物学免疫学进展》 CAS 2022年第5期53-59,共7页
PM株源于1882年巴斯德最初分离的狂犬病毒,经兔脑传代保存后,又历经人二倍体细胞、原代犬肾细胞、禽胚/细胞及Vero细胞等多种细胞适应传代,目前普遍应用的是人二倍体细胞适应株和Vero细胞适应株。PM株于2005年被WHO生物标准化专家委员... PM株源于1882年巴斯德最初分离的狂犬病毒,经兔脑传代保存后,又历经人二倍体细胞、原代犬肾细胞、禽胚/细胞及Vero细胞等多种细胞适应传代,目前普遍应用的是人二倍体细胞适应株和Vero细胞适应株。PM株于2005年被WHO生物标准化专家委员会纳入人用狂犬病疫苗生产用毒种库,在法国、美国、伊朗、瑞士、德国、印度和中国等100多个国家和地区用于生产人用狂犬病疫苗,为全球狂犬病疫情防控发挥了积极作用。现仅就狂犬病毒PM株的由来、适应和应用作一回顾。 展开更多
关键词 狂犬病毒 PM株 人二倍体细胞 原代犬肾细胞 禽胚/细胞 VERO细胞 人用狂犬病疫苗
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鞘氨醇调节人胰腺癌细胞株JF305生长和钙代谢 被引量:1
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作者 赵敏 王钢 姜若兰 《肿瘤研究与临床》 CAS 2001年第3期152-154,共3页
目的 :观察鞘氨醇对人胰腺癌细胞株 JF30 5的增殖作用 ;观察鞘氨醇对人胰腺细胞株 JF30 5内Ca2 + 浓度的影响 ,探讨鞘氨醇的细胞信使作用。方法 :细胞培养后 ,分别加入不同浓度的鞘氨醇 ,应用四甲基偶氮唑盐 MTT比色法来观察细胞增殖程... 目的 :观察鞘氨醇对人胰腺癌细胞株 JF30 5的增殖作用 ;观察鞘氨醇对人胰腺细胞株 JF30 5内Ca2 + 浓度的影响 ,探讨鞘氨醇的细胞信使作用。方法 :细胞培养后 ,分别加入不同浓度的鞘氨醇 ,应用四甲基偶氮唑盐 MTT比色法来观察细胞增殖程度 ;应用 Fura- 2 / AM荧光比色测定 [Ca2 + ]i 结果 :鞘氨醇促进人胰腺癌细胞株JF30 5的生长 ,促进 JF30 5内 Ca2 +的生成 ,3min内达峰值 ,并在 0 .5 μ m ol/ L~ 2 .0 μ mol/ L 时呈剂量依赖性。结论 :鞘氨醇能促进人胰腺癌细胞株 JF30 5增殖 ;鞘氨醇的信使作用是通过刺激 Ca2 +转运的和 Ca2 展开更多
关键词 鞘氨醇 [CA2+]I 人胰腺癌细胞株JF305
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