人表皮生长因子(hEGF)基因的合成、鉴定及植物表达质粒的构建

用 PCR方法合成了人表皮生长因子 ( h EGF)基因 ,构建了原核表达质粒 p2 0 T-h EGF,研究了原核表达的重组蛋白 h EGF的生物学活性 ,并构建了植物表达质粒 .研究表明 :无论是融合蛋白 GST-h EGF或纯化的h EGF蛋白 ,都有相当高的生物活性 ,h EGF蛋白对 Hela细胞的增殖有很好的促进作用 ,免疫小鼠亦能产生很高的免疫应答反应 .

TAT-hEGF融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效自我表达

为了获得TAT-hEGF融合蛋白在E.coliBL21(DE3)中高效表达,构建了原核表达载体pRSET-tat-hegf,将其转化E.coliBL21(DE3)得到重组工程菌BL21(DE3)/pRSET-tat-hegf。工程菌在无IPTG的诱导下实现了高效表达,TAT-hEGF融合蛋白的表达量占总菌体蛋白的45.6%,主要以包涵体形式存在。

人表皮生长因子及其在化妆品中的应用

通过文献调研 ,综述了新型生物功能性化妆品添加剂———人表皮生长因子 (humanEpidermalGrowthFactor,简称 :hEGF)的发现史、来源、结构与生物活性 ,以及hEGF与EGFR的作用机理 ;还综述了hEGF的 3种生产方法 ,重点介绍了物美价廉的基因重组hEGF的生产和表达特点。同时 ,引入从细胞层次营养肌肤的生物美容理念 ,展望了hEGF在化妆品中的广阔应用前景和含hEGF化妆品独特的生物美肤功能。旨在进一步指导实践 ,开发系列hEGF功能性化妆品。

家蚕表达人表皮生长因子gp67信号肽融合蛋白及生物活性的研究

人表皮生长因子（hEGF），一种由53个氨基酸残基组成的单链多肽，具有广阔的应用前景。本文主要探讨家蚕表达人表皮生长因子gp67信号肽融合蛋白的生物活性。采用家蚕杆状病毒表达系统来表达该信号肽融合蛋白。构建了重组质粒pBacPAKS—hEGF，将该重组质粒与线性化病毒Bm．BacPAK6DNA共转染家蚕细胞，筛选获得重组病毒vBacPAK—sEGR用vBacPAK—sEGF感染家蚕BmN细胞和五龄蚕，Westernblot检测表明在家蚕细胞、五岭幼虫的血淋巴和蛹中均有约12kD的目的蛋白表达。ELISA检测发现在家蚕细胞中的表达量为23gg／100细胞，五龄幼虫中的表达量可达到82μg／mL血淋巴。利用小鼠成纤维细胞Balb／c3T3分析家蚕表达的hEGF信号肽融合蛋白的生物活性．结果表明表达产物能显著促进Balb／c3T3细胞的增值。另外，研究还发现hEGF信号肽融合蛋白可使新生ICR小鼠体重增加，睁眼和萌齿时间提前。本研究为进一步开发利用家蚕表达的hEGF提供理论基础。

人表皮生长因子融合蛋白在大肠杆菌表达的研究

在大肠杆菌中高效表达人表皮生长因子(hEGF)。根据大肠杆菌对密码的偏爱性,构建高效表达EGF融合蛋白的菌株,经离子交换层析和凝胶过滤层析两个步骤使产物得到纯化。融合蛋白表达产量为27%,EGF融合蛋白纯化产物纯度为95%以上,促3T3细胞增殖的活性测定为ED50为4.2ng/mL。在pET 3c:BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中,以融合蛋白方式表达人表皮生长因子,表达效率高,纯化路线简单,产量较高,适合产业化生产。

人表皮生长因子在烟草中的表达及其重组蛋白的初步鉴定

目的:运用Dot-ELISA方法对转基因烟草中所表达的重组hEGF蛋白进行初步检测,以确定是否表达出具有免疫功能的蛋白质。方法:将所合成的hEGF基因置于CAMV35S启动子的驱动下,用农杆菌介导的方法转入烟草中,经过抗性筛选和PCR鉴定出阳性转化子后,提取转化子的总蛋白。总蛋白提取物经透析后,取适当浓度蛋白质点在尼龙膜上,用Dot-ELISA方法对所提取的蛋白质进行测定。结果:结果表明,转基因烟草中的重组蛋白能与抗体发生特异性结合,Dot-ELISA反应后的膜上显示出清晰的棕色斑点。结论:通过实验证明Dot-ELISA方法是一种简便快捷的检测方法,适用于植物基因工程中大规模重组蛋白生产的初步检测。

化妆品用人表皮生长因子的离子交换法纯化和脱色工艺研究

开发一套应用离子交换技术、以生产满足化妆品使用要求为目的的人表皮生长因子纯化和脱色工艺,脱色用离子交换树脂为D314.纯化条件:流速为150.0 mL/h,进样体积为80.0 mL,床高为10.0 cm;脱色条件:流速为60.0 mL/h,pH=5.0和床高为7.5 cm.总收率超过53%,产品纯度高于32%,色泽呈白色或浅黄色,能够满足化妆品行业的使用要求.

人工合成人表皮生长因子在大肠杆菌中的表达

目的 :在大肠杆菌中高效表达人表皮生长因子 (hEGF) ,并探索提高外源基因在pET - 3c :BL(DE3)表达系统的表达水平的途径。方法 :根据大肠杆菌对密码的偏爱性 ,合成编码 5 3个氨基酸的hEGF基因 ,分别以非融合蛋白和融合蛋白两种方式表达。计算机分析两者mRNA的翻译起始区 (translationinitiationregion ,TIR)的结构。结果 :融合蛋白表达产量为 2 7%,非融合蛋白的表达用SDS -PAGE检测不到 ,两者均具有促细胞增殖的活性。融合蛋白mRNA的TIR的ΔG值较非融合蛋白的高。结论 :在pET - 3c :BL2 1(DE3)大肠杆菌表达系统中 ,以融合蛋白方式表达人表皮生长因子 ,表达效率高且不影响其活性。此外 ,mRNA的TIR的结构可能是影响外源基因在本研究的表达系统的表达效率的一个重要因素。

人表皮细胞生长因子及其研究进展

表皮细胞生长因子是人体内一种重要自分泌/旁分泌的生长因子。人表皮细胞生长因子及其受体调控细胞增殖、分化、迁移、生存等与细胞命运密切相关的过程,在细胞发育、伤口愈合、器官发生中发挥重要作用。本文将对人表皮细胞生长因子的合成、分泌、生化特性、分子结构、家族、受体、信号通路、生物学活性、生理功能、应用及制备方法等方面进行综述。

产人表皮生长因子的重组大肠杆菌的发酵动力学

对产人表皮生长因子的重组大肠杆菌Escherichia coli(E.Coli)的发酵动力学进行了研究,采用了发酵体系中含质粒的工程菌与不含质粒的非工程菌的共处模型,分析了细胞生长、底物消耗、基因工程产物生成的过程,由模型计算的结果与实验结果基本吻合.

孕妇尿液表皮生长因子的分离、纯化及活性检测

孕妇尿液蛋白丙团粉粗提液经Ｂｉｏ－ｇｅｌＰ－１０凝胶层析获得五个组分，经免疫点印渍分析后，证明其中组分Ⅲ的活性最高，该组分再经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—１５凝胶层析，又得到Ａ、Ｂ、Ｃ和Ｄ四个组分，ｈＥＧＦ活性主要分布在组分Ａ中。ＨＰＬＣ的分析结果表明组分Ａ的分子量在６，０００左右。生物活性研究证明，样品可以促进初生幼鼠的睁眼和萌牙。本文建立了免疫点印渍方法并应用于ｈＥＧＦ的活性检测。

透皮增强肽介导的表皮生长因子调控小鼠毛发生长的研究

TD1是一个具有11个氨基酸的短肽(ACSSSPSKHCG),能够促进蛋白药物的透皮转运进而发挥其生物学效应.前期研究显示,利用分子生物学方法得到的TD1-hEGF(T-E)融合蛋白与普通的hEGF相比,其透过完整动物皮肤的效率可提高16倍;基于蛋白的透皮效率具有TD1浓度依赖性的特点设计合成的二代TD1-hEGF:TD1-hEGF-TD1 (T-E-T)及TD1-TD1-hEGF (2T-E),具有更强的透皮效率.为进一步检测TD1介导的透皮hEGF的生物学效应,我们进行了小鼠毛发生长实验.研究发现T-E,T-E-T和2T-E这三种融合蛋白均可不同程度地诱导小鼠毛囊由休止期转为生长期,调控小鼠毛发的生长.以上结果为透皮增强肽在医学及美容等领域的应用提供了理论基础.

细胞穿膜肽与人表皮生长因子在大肠杆菌中的重组融合表达

该研究构建了细胞穿膜肽Pep-1和人表皮生长因子hEGF融合基因(epEGF)的重组表达质粒PGEX-4T-1-epEGF,并成功转化大肠杆菌BL21(DE3)得到重组大肠杆菌株BL21(DE3)/PGEX-4T1-epEGF。通过IPTG诱导发酵,制备重组融合人表皮生长因子蛋白,并初步尝试建立纯化研究,有效实现了人表皮生长因子(hEGF)在大肠杆菌中的可溶性表达。该研究通过发酵条件优化,发现发酵过程中温度、诱导剂浓度、诱导时间、培养基都是影响蛋白表达量的关键因素;温度在20℃、IPTG浓度0.4 mmol/L、诱导时间8 h、培养基为TB液体培养基,目的蛋白占总蛋白的量达到21.58%,蛋白浓度为0.13 mg/mL。菌体破碎液上清经过GST亲和层析融合蛋白纯度达到66.82%,阴离子交换层析后融合蛋白纯度达到92.57%。该研究成功在大肠杆菌中表达出可溶形式的hEGF,且纯化工艺较简单,为hEGF的进一步开发利用提供了参考。

人表皮生长因子融合蛋白的表达及纯化工艺的优化

探讨了在大肠杆菌中生产小分子泛素样修饰蛋白与人表皮生长因子(SUMO-hEGF)的最佳表达及纯化条件。将重组表达载体pET3c-SUMO-hEGF转化到大肠杆菌BL21(AI)中,以阿拉伯糖为诱导剂,对诱导表达参数进行优化,并进一步通过离子交换层析,Ni-NTA亲和层析及分子筛层析等进行纯化分析。结果表明:SUMO-hEGF在BL21(AI)中的最佳诱导表达温度为37℃,诱导剂阿拉伯糖的最佳浓度为5.0g/L,最佳诱导表达时间为4h,表达量约为20.2%,Western blot分析证实,纯化后的蛋白是hEGF,为进一步开发hEGF基因工程药物奠定了基础。

慢性浅表性胃炎和消化性溃疡患者人表皮生长因子含量的检测意义初探

目的 :了解人类表皮生长因子 (hEGF)与胃粘膜完整性的关系。方法 :用放免法检测正常人、慢性浅表性胃炎 (活动期 )、消化性溃疡 (活动期 )、消化性溃疡 (愈合期 )等四组病人血、尿、胃液中的hEGF含量。结果 :慢性浅表性胃炎 (活动期 )和消化性溃疡 (活动期 )病人上述三种体液中的hEGF含量明显低于正常人和消化性溃疡 (愈合期 )病人 (P <0 .0 5 ) ,而正常人与消化性溃疡 (愈合期 )病人的hEGF含量无明显差别 (P >0 .0 5 )。结论 :说明hEGF与胃肠道粘膜的完整性有密切关系。