Eag1钾离子通道在卵巢癌组织中的表达及意义

目的检测Etheràgo-go 1(Eag1)钾离子通道在人卵巢癌中的表达,对人卵巢癌细胞株SKOV3的影响及与卵巢癌患者临床特征的关系。方法用实时定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测卵巢癌细胞SKOV3中Eag1的表达;用噻唑蓝比色法(MTT)检测Eag1钾离子通道抑制剂阿司咪唑(Astemizole)对SKOV3细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测阿司咪唑对对SKOV3细周期的影响;用蛋白印迹法(Western blot)和免疫组织化学的方法检测36例卵巢癌组织中Eag1蛋白的表达并结合临床病例资料进行分析。结果阿司咪唑可明显抑制SKOV3细胞增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期。在卵巢癌标本中,Eag1蛋白的阳性表达率明显高于正常卵巢组织。其在不同的临床分期方面差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Eag1钾离子通道异常表达于人卵巢癌组织中,并可能成为卵巢癌诊断和治疗的靶点。

HERG1在非小细胞肺癌中的表达及其对NF-κB信号通路的影响

目的探讨人类ether-a-go-go相关基因1(HERG1)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其对转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法用免疫组织化学染色法检测84例NSCLC患者癌组织及其配对癌旁组织标本中HERG1的表达,根据染色结果将患者分为高表达组和低表达组,比较2组临床病理特征和生存预后。采用Western-blot检测人NSCLC细胞系H460、H1229、A549、H358和人支气管上皮细胞Beas-2b中HERG1的表达;采用HERG1 si-RNA(沉默组)和si-control(对照组)分别转染A549细胞,克隆形成实验和CCK8实验检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞侵袭,细胞划痕实验检测细胞迁移,Western-blot检测IκBα、p-IκBα、NF-κB-p65、p-NF-κB-p65蛋白表达。结果NSCLC癌组织HERG1高表达率为71.43%(60/84),明显高于癌旁组织的19.05%(16/84)(P<0.05)。高表达组TNM分期为Ⅲ—Ⅳ的比例和淋巴结转移率均显著高于低表达组(P<0.05),5年总体生存率和5年无进展生存率均显著低于低表达组(P<0.05)。Beas-2b的HERG1蛋白相对表达量均显著低于H460、H1229、A549和H358(P<0.05)。沉默组细胞增殖力、侵袭力、迁移力及p-IκBα、p-NF-κB-p65蛋白相对表达量均显著低于对照组(P<0.05)。结论NSCLC患者癌组织中HERG1多呈高表达,且与生存预后有关,其机制可能与NF-κB信号通路相关。

Eag1基因和MTA-1蛋白在宫颈良恶性病变中的表达及意义

目的:分析Etheràgo-go1(Eag1)基因和肿瘤转移相关因子-1(MTA-1)蛋白在宫颈良恶性病变中的表达及意义。方法:回顾性分析2015年9月至2020年10月于该院手术切除宫颈组织的138例患者的临床资料,按确诊疾病不同分为慢性宫颈炎组35例、宫颈上皮内瘤变(CIN)组62例和宫颈癌组41例。比较三组Eag1基因、MTA-1蛋白阳性表达率,以及不同国际妇产科联盟(FIGO)分期宫颈癌患者宫颈癌组织Eag1基因、MTA-1蛋白的阳性表达率。结果:宫颈癌组Eag1基因阳性表达率高于慢性宫颈炎组和CIN组,差异均有统计学意义(P<0.05);FIGO分期为Ⅲ、Ⅳ期宫颈癌患者宫颈癌组织中Eag1基因阳性表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组MTA-1蛋白阳性表达率高于慢性宫颈炎组和CIN组,差异均有统计学意义(P<0.05);FIGO分期为Ⅲ、Ⅳ期宫颈癌患者宫颈癌组织中MTA-1蛋白阳性表达率高于Ⅰ、Ⅱ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Eag1基因和MTA-1蛋白在宫颈癌组织中的阳性表达率高于慢性宫颈炎组织和CIN组织,且FIGO分期越晚宫颈癌患者宫颈癌组织Eag1基因和MTA-1蛋白阳性表达率越高。

沉默Ether à go-go 1基因调控VEGF/PI3K/AKT抑制骨肉瘤增殖和血管生成的研究

目的:检测沉默Ether à go-go 1(Eag1)基因对骨肉瘤增殖和血管生成的影响及其可能的调控机制。方法:构建抑制Eag1表达的短发卡RNA(short hair RNA,shRNA)重组腺病毒载体Ad5-Eag1-shRNA并感染骨肉瘤细胞株。采用实时定量聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)和蛋白印迹技术(Western blot analysis,WB)检测Ad5-Eag1-shRNA的感染效能。采用CCK-8法和裸鼠成瘤实验检测感染前后骨肉瘤细胞增殖和裸鼠骨肉瘤体积的变化。采用免疫组化技术和WB技术分别检测感染前后裸鼠肿瘤组织中微血管密度(microvessel density,MVD)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的变化。采用WB技术检测感染前后骨肉瘤细胞中VEGF、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)和蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)的表达变化。结果:构建的重组腺病毒载体Ad5-Eag1-shRNA具有良好的感染效能。感染Ad5-Eag1-shRNA可沉默骨肉瘤中Eag1的表达并能有效地抑制骨肉瘤细胞增殖和裸鼠骨肉瘤生长(均P<0.001),同时下调裸鼠骨肉瘤组织中MVD密度和VEGF的表达(均P<0.001)。感染Ad5-Eag1-shRNA可下调骨肉瘤细胞中VEGF的表达(P<0.05)并抑制PI3K和AKT的磷酸化(均P<0.001)。结论:沉默Eag1可能通过调控VEGF/PI3K/AKT信号通路抑制骨肉瘤增殖和血管生成。

Effect of Matrine on Human Ether à go-go Related Gene (HERG) Channels Expressed in Chinese Hamster Ovary Cells

Objective： To observe the effect of matrine on human ether à go-go related gene （HERG） potassium channels expressed in Chinese hamster ovary （CHO） cells and investigate whether HERG channel is a new target of the pharmacological effect of matrine on arrhythmia and tumor. Methods： HERG channel potassium current in CHO cell was recorded using whole-cell patch-clamp technique, and the influence of matrine on the current was explored. Results： Matrine inhibited HERG potassium current in a dose-dependent manner, and the 50% inhibitory concentration （IC50） was 411±23 μmol/L. Matrine had no significant effect on the activation kinetics, and mainly blocked HERG channels in their closed state. Conclusions： The blocking effect of matrine on HERG channels might be one of the mechanisms against arrythmias and tumors. Unlike most other blockers exerting blocking effect at the intracellular sites by entering the cell with the opening of HERG channel, matrine blocked HERG channels at the extracellular sites.

Expression of Ether à go-go 1 and its molecular mechamism of regulating the malignant phenotype of osteosarcoma

Objective To explore the expression of etheràgo-go1(Eag1)in human osteosarcoma and its molecular mechanisms of regulating the malignant phenotype of osteosarcoma.Methods The expression levels of Eag1 in osteosarcoma cell lines and human osteosarcoma tissues were detected by reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR),western blot analysis and immunohistochemistry.The small interfering RNA(siRNA)was

Ether à go－go 1在人骨肉瘤细胞和组织中的表达及其调控骨肉瘤恶性表型的分子机制

目的探讨Ether à go－go 1 （Eag1）在人骨肉瘤细胞和组织中的表达及其调控骨肉瘤恶性表型的分子机制。方法采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）、Western blot和免疫组化检测骨肉瘤细胞和组织中Eag1的表达。采用小干扰RNA （siRNA）抑制Eag1的表达，并采用CCK－8法、克隆形成实验、Transwell体外侵袭实验和划痕实验检测Eag1 siRNA转染后骨肉瘤细胞增殖和侵袭能力的变化。建立裸鼠骨肉瘤异种移植模型，绘制肿瘤生长曲线，Western blot检测骨肉瘤细胞中血管内皮生长因子（VEGF）和信号转导和转录激活因子3 （STAT3）的表达水平。结果Eag1在MG－63、Saos－2细胞及骨肉瘤组织中异常高表达。CCK－8法检测显示，MG－63和Saos－2细胞中，对照组、Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组的细胞存活率分别为（100.00±4.65）%、（63.57±3.89）%、（54.13±3.70）%和（100.00±5.46）%、（56.70±5.34）%、（40.27±5.28）%，与对照组比较，差异均有统计学意义（均P〈0.001）。克隆形成实验显示，MG－63和Saos－2细胞中，对照组、Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组的克隆形成率分别为（92.00±3.46）%、（60.00±3.06）%、（53.67±2.40）%和（92.00±5.57）%、（52.33±5.13）%、（41.67±2.73）%，与对照组比较，差异均有统计学意义（均P〈0.001）。裸鼠骨肉瘤生长结果显示，从治疗后第10天起，Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组裸鼠的骨肉瘤体积小于对照组，差异有统计学意义（均P〈0.01）。侵袭实验显示，MG－63和Saos－2细胞中，对照组、Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组的侵袭细胞数分别为（134.00±3.61）个、（105.20±2.52）个、（91.00±3.01）个和（132.30±3.23）个、（114.30±3.48）个、（82.67±6.33）个，与对照组比较，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。划痕实验显示，MG－63和Saos－2细胞中，对照组、Eag1 siRNA1组和Eag1 siRNA2组的细胞迁移率分别为（62.48±1.83）%、（35.98±1.23）%、（32.30±1.20）%和（70.15±1.42）%、（41.38±1.34）%、（32.40±1.92）%，与对照组比较，差异均有统计学意义（均P〈0.001）。沉默Eag1基因可明显下调骨肉瘤中VEGF及STAT3蛋白的表达。结论Eag1可能通过调控STAT3－VEGF信号通路参与骨肉瘤细胞的增殖和侵袭过程，可作为骨肉瘤潜在的治疗靶点。