Follistatin表达抑制促进BMP-2诱导人类骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究

目的探讨Follistatin表达抑制对人类骨髓间充质干细胞(BMSC)细胞活性及骨形态发生蛋白(BMP)-2诱导人类BMSC成骨分化的影响。方法采用Follistatin特异性siRNA转染人类BMSC,检测线粒体脱氢酶活性、细胞DNA含量及蛋白含量。采用定量逆转录-聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测成骨相关基因表达,采用碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色检测Follistatin对BMP-2诱导人类BMSC成骨分化的影响。结果转染后3、7 d,人类BMSC代谢、DNA含量显著升高;转染后14 d,总蛋白含量增加。Follistatin表达抑制后成骨相关基因如ALP、OCN、OSX、OC、OPN、RUNX2等表达升高,且ALP活性及钙沉积量显著增加。结论抑制Follistatin表达可促进人类BMSC细胞活性和BMP-2诱导人类BMSC成骨分化能力,Follistatin可抑制人类BMSC成骨分化。

表达人卵泡抑素的毕赤氏巴斯德酵母工程菌的构建

目的在P .pastoris中分泌表达人卵泡抑素基因。方法采用PCR法扩增目的基因FS2 88片段 ,将其亚克隆入pPIC9,构建pPIC9 FS2 88,DNA序列测定验证后 ,将pPIC9 FS2 88采用BamHⅠ和SalⅠ双酶切 ,回收小片段 ,连接pPIC9K ,构建重组分泌型表达载体pPIC9K FS2 88,电穿孔法转化SMD116 8,G4 18筛选多拷贝转化子 ,转化子发酵后 ,取上清液进行SDS PAGE和Westernblot检测重组蛋白表达。结果成功构建了重组分泌型表达载体pPIC9K FS2 88和工程菌株SMD116 8 FS2 88,SDS PGAE显示工程菌发酵上清液在 5 0 0 0 0 ～6 0 0 0 0处有弥散条带 ,并且与Westernblot结果相符。结论工程菌SMD116 8 FS2

早期自然流产中卵泡休止素的变化及与HCG的相关研究

目的:探讨早期自然流产中卵泡休止素(FS)的变化,比较其与人绒毛膜促性腺激素(HCG)有无相关性以及FS的高低与妊娠结局有无关系.方法:应用酶联免疫法对早期自然流产孕妇、正常早期妊娠孕妇血清FS进行测定,用放射免疫法对上述2组妊娠42～43 d的孕妇进行HCG测定.结果:早期自然流产孕妇组血清FS和HCG水平明显低于正常早期妊娠孕妇组(P＜0.01),保胎失败孕妇组血清FS水平明显低于保胎成功孕妇组(P＜0.01),FS与HCG的变化在早期自然流产及正常早期妊娠中均呈正相关.结论:血清FS水平的变化参与了早期妊娠的维持,FS减少容易引起早期自然流产,FS值的高低决定了早期自然流产的妊娠结局.

早期胚胎死亡中FS的变化及与HCG的相关研究

目的:探讨早期胚胎死亡中卵泡休止素(FS)的变化及与HCG有无相关性。方法:应用酶联免疫法对早期胚胎兄亡孕妇、正常早期妊娠孕妇血清FS进行测定,用放免法对上述两组妊娠天数为42～43天的孕妇进行HCG测定。结果:早期胚胎死亡孕妇组血清FS水平明显低于正常早期妊娠孕妇组(P<0.01),早期胚胎死亡孕妇组血清HCG水平明显低于正常早期妊娠孕妇(P<0.01).FS与HCG的变化在早期胚胎死亡中均呈正相关。结论:血清FS水平的变化参与了早期妊娠的维持,FS减少引起早期胚胎死亡原因之一。

卵泡抑素样蛋白1促进肺动脉内皮细胞增生、黏附与血管生成

目的探究卵泡抑素样蛋白1(follistatin-like 1,FSTL1)对人肺动脉内皮细胞(human pulmonary artery endothelial cells,HPAECs)的影响,完善FSTL1在肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH)中的作用。方法以人肺动脉内皮细胞为对象,使用qRT-PCR和Western blotting法测定低氧刺激下HPAECs中FSTL1的表达水平。通过给予外源性FSTL1蛋白或小干扰RNA,MTT法观察FSTL1对细胞增生活性的影响。分别借助纤连蛋白、Matrigel基质胶观察FSTL1对内皮细胞黏附与血管形成能力的影响。结果低氧刺激HPAECs 12 h和24 h后,FSTL1的mRNA及蛋白质的表达量均提高(P<0.01)。常氧下外源给予FSTL1,250μg/L、500μg/L组的细胞增生活性与对照组相比明显增高(P<0.01);低氧条件下siRNA干扰组HPAECs增生活性与对照组相比明显降低(P<0.001)。常氧下外源给予250μg/L的FSTL1刺激24 h后HPAECs黏附数量增多(P<0.001),生成血管总长度及新生血管数目均增加(P<0.001)。结论FSTL1促进HPAECs增生、黏附与血管生成。

血清HE4、FS及CA125在卵巢癌患者中的表达及其诊断价值

目的:研究人附睾分泌蛋白4(HE4)、软泡抑素(FS)、糖链抗原125(CA125)在卵巢癌患者血清中的表达情况,探讨其在卵巢癌中的诊断价值。方法:选择因盆腔包块拟行手术治疗的患者90例作为研究对象,根据术后病理证实分为卵巢癌组(28例)和良性包块组(62例),并选择同期健康体检者20例作为对照组,检测并对比分析三组受试者血清中HE4、FS及CA125水平。结果:卵巢癌组HE4、FS及CA125明显高于良性包块组和健康对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);以HE4>150pmol/L、FS>1.51μg/L以及CA125>35U/mL作为阳性参考值,三项联合诊断为卵巢癌的敏感度为92.9%,特异度为78.6%。结论:血清HE4、FS及CA125在卵巢癌患者中显著升高,联合三项检测可提高鉴别卵巢癌诊断的敏感度。

高危HPV载量与血清FSTL1、TGF-β1水平联合检测对宫颈病变的预测价值

目的检测宫颈病变患者血清卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平及高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)载量,探讨三者联合检测对宫颈病变的预测价值。方法选取2019年4月—2022年6月于本院接受治疗的164例宫颈病变患者为研究对象,根据病理检查结果将其分为宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级患者82例、CINⅡ级患者36例、CINⅢ级患者24例及宫颈癌患者22例。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清FSTL1、TGF-β1水平;采用第二代杂交捕获法检测HR-HPV载量;分析HR-HPV载量、血清FSTL1、TGF-β1及三者联合检测对CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈癌诊断的阳性符合率,并采用卡方检验比较其差异。结果CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈癌患者年龄、婚姻状况、初次性生活年龄、文化程度、孕次、产次比较,差异无统计学意义(P>0.05)。以病理结果作为金标准,HR-HPV载量、血清FSTL1、TGF-β1及三者联合检测对CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈癌诊断的阳性符合率分别为77.44%(127/164)、64.63%(106/164)、63.41%(104/164)、86.59%(142/164)。HR-HPV载量、血清FSTL1、TGF-β1联合检测对CINⅠ级、CINⅡ级、CINⅢ级及宫颈癌诊断的阳性符合率高于三者单独检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HR-HPV载量及血清中FSTL1、TGF-β1水平与宫颈病变的发生密切相关,三项指标联合检测可预测宫颈病变。

卵泡抑素样蛋白1在增生型糖尿病视网膜病变进程中的潜在作用机制初步探讨

目的观察增生型糖尿病视网膜病变(PDR)患者血清中卵泡抑素样蛋白1(FSTL1)的变化。方法临床检查确诊的PDR患者(PDR组)20例及正常人20名(正常组)纳入研究。人视网膜血管内皮细胞(HRCEC)分为HRCEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组;人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为HUVEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组。应用实时定量PCR(RT-PCR)及ELISA测定所有受检者外周血和各组细胞中FSTL1、TGF-β、VEGF、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白表达。受检者血清中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA和蛋白比较行独立样本t检验;HRCEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组,HUVEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞生存力、mRNA表达比较行单因素方差分析。结果PDR组患者血清中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA表达分别为1.79±0.58、0.97±0.21、1.85±0.69、1.38±0.44;FSTL1、TGF-β1蛋白表达分别为(1.19±0.50)、(0.71±0.24)ng/ml和(734.03±116.45)、(649.36±44.23)ng/L。与正常组比较,差异均有统计学意义(tmRNA=0.90、0.21、2.85、1.77,P=0.00、0.00、0.04、0.02;t蛋白=1.88、7.68,P=0.00、0.02)。HRCEC缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞生存力分别为0.66±0.05、0.64±0.04;与空白对照组比较,差异有统计学意义(F=13.02,P=0.00)。HUVEC缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞生存力分别为0.63±0.06、0.68±0.06;与空白对照组比较,差异有统计学意义(F=26.52,P=0.00)。HRCEC空白对照组、缺氧3 h组细胞中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA表达比较,差异有统计学意义(F=14.75、44.93、85.54、6.23,P=0.01、0.00、0.00、0.03);与HRCEC空白对照组上清液中FSTL1、TGF-β1蛋白表达比较,缺氧3 h组,蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05);缺氧6 h组,TGF-β1蛋白表达差异有统计学意义(P=0.03),FSTL1蛋白表达差异无统计学意义(P=0.68)。HUVEC空白对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF mRNA表达比较,差异均有统计学意义(F=19.08、25.12、22.89、13.07,P=0.00、0.00、0.00、0.01)。免疫荧光染色结果显示,缺氧3 h组、缺氧6 h组细胞中FSTL1、TGF-β1、CTGF、VEGF蛋白均呈阳性表达。结论PDR患者血清中FSTL1基因及蛋白表达较正常人显著升高。

血清HE4、FS、SMRP及CA125在卵巢癌患者中的表达及临床意义

目的:探讨血清人附睾蛋白4(HE4)、卵泡抑素(FS)、可溶性间皮素相关蛋白(SMRP)、糖类抗原125(CA125)在卵巢癌患者中的表达水平及临床意义。方法:选取2014年6月-2017年9月我院收治的卵巢癌患者60例作为卵巢癌组,另选取同期收治的卵巢良性肿瘤患者32例作为良性组,选取同期健康体检妇女40例作为对照组,检测三组受试者血清HE4、FS、SMRP、CA125水平,对比三组HE4、FS、SMRP、CA125阳性表达率,并分析血清HE4、FS、SMRP、CA125对卵巢癌的诊断价值。结果:三组受试者的HE4、FS、SMRP、CA125水平整体对比有统计学意义(P<0.05),其中卵巢癌组与良性组HE4、FS、SMRP、CA125水平高于对照组,且卵巢癌组高于良性组,差异有统计学意义(P<0.05)。三组受试者的HE4、FS、SMRP、CA125阳性表达率整体对比有统计学意义(P<0.05),卵巢癌组与良性组HE4、FS、SMRP、CA125阳性表达率高于对照组,且卵巢癌组高于良性组,差异有统计学意义(P<0.05)。联合检测的灵敏度高于FS、SMRP单项检测,差异有统计学意义(P<0.05),联合检测的特异度高于HE4、FS、SMRP、CA125单项检测,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:卵巢癌患者血清HE4、FS、SMRP、CA125水平及阳性表达率均较高,四项指标联合检测可提高诊断卵巢癌的灵敏度及特异度。