辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL对肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用

目的:研究携带可溶性人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(shTRAIL)基因的辐射诱导表达载体pshuttle-Egr1-shTRAIL在人肝癌细胞株中的表达及其促凋亡作用。方法:体外通过脂质体转染SMMC7721细胞。转染细胞分别接受0(假照组)、2、5和10Gy X线照射,ELISA法检测sTRAIL的表达;细胞分为正常SMMC7721组,分别接受0(假照组)、2和5Gy X线照射的转染空质粒pshuttle-Egr1组及转染重组质粒pshutlle-Eyr1-shTRAIL组,采用AnnexinV-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率;分别取SMMC772细胞、转染STRAIL细胞、转染空载体及照射组细胞,采用克隆形成实验检测细胞存活率。结果:不同剂量X射线照射SMMC7721-shTRAIL细胞上清中可溶性TRAIL表达量明显高于假照组(P<0.001);与假照组比较,照射转染后SMMC7721细胞的凋亡细胞百分数明显增加(P<0.05或P<0.001),细胞存活率明显下降(P<0.05或P<0.001)。结论:pshuttle-Egr1-shTRAIL载体联合放射治疗能够显著抑制肝癌细胞SMMC7721细胞的生长,并促进其凋亡。

新城疫病毒HN基因诱导肝癌细胞SMMC7721凋亡的作用机制

目的探索含新城疫病毒(NDV)HN基因的质粒pVHN诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的作用及其机制。方法以脂质体介导方法在体外转染pVHN于SMMC7721细胞24h后,通过MTT方法检测细胞活性状态;采用流式细胞仪(FCM)检测法,通过碘化丙啶(PI)染色测定细胞死亡率;以罗丹明123染色测定线粒体跨膜电位(△Ψ)的改变;提取细胞基因组DNA进行电泳,检测DNA有无断裂;用底物颜色反应检测Caspase3活性。结果细胞SMMC7721在体外转染pVHN后,死亡率达50.0%(转染空载体质粒对照组为5.2%);细胞基因组DNA呈梯状谱带;线粒体△Ψ下降,Caspase3活性明显升高。结论新城疫病毒HN基因在体外转染细胞SMMC7721,能明显诱导细胞SMMC7721凋亡,其发生机制可能是由于HN基因的导入引起线粒体△Ψ下降,进而激活Caspase3使细胞凋亡。

复方苦参注射液对人肝癌SMMC7721细胞增殖的抑制作用

目的:研究复方苦参注射液对人肝癌SMMC7721细胞增殖的抑制作用。方法:体外传代培养SMMC7721细胞。10、20、40、80、160μl/ml复方苦参注射液培养细胞24、48、72 h后,采用MTT法测定细胞活力并计算抑制率。0(阴性对照)、10、20、40、80、160μl/ml复方苦参注射液培养细胞48 h后采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,并分析细胞周期分布百分比。结果:10、20、40、80、160μl/ml复方苦参注射液培养细胞24、48、72 h对细胞具有明显的抑制作用,且具有时间和剂量依赖性。与阴性对照比较,40、80、160μl/ml复方苦参注射液培养细胞48 h后,G0/G1期细胞比例明显升高(P<0.05),S期细胞比例明显降低(P<0.05),细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。结论:复方苦参注射液对SMMC7721细胞的增殖具有抑制作用,其机制可能是诱导细胞凋亡、阻滞细胞于G0/G1期。