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题名人白细胞介素23受体基因的克隆和原核表达
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作者
车昌燕
张国华
赵燕
张蕾
张云
王树惠
刘力
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机构
北京协和医学院基础学院中国医学科学院基础医学研究所
山西医科大学汾阳学院
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出处
《现代肿瘤医学》
CAS
2008年第6期877-880,共4页
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基金
国家自然科学基金资助项目(编号:30671944)
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文摘
目的:从外周血单个核细胞(PBMC)中克隆人白细胞介素23受体(hIL-23R)编码区序列,构建原核表达载体并在大肠杆菌中进行表达。方法:分离人外周血单个核细胞(PBMC),提取PBMC的总RNA,应用RT-PCR技术,以PBMC的cDNA为模版,扩增出hIL-23R的编码区(1890bp),将其克隆至pMD 19-T载体,经酶切和测序鉴定后,亚克隆于pGEX-4T-1中构建原核表达载体pGEX-4T-1-hIL-23R,转化大肠杆菌感受态细胞BL-21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白,经Western-blot对融合蛋白进行鉴定。结果:获得了hIL-23R编码区序列,构建原核表达载体并在大肠杆菌中表达,表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,其相对分子质量Mr为97KDa。结论:成功构建hIL-23R原核表达载体并在大肠杆菌中表达hIL-23R融合蛋白。
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关键词
白细胞介素23受体(il-23r)
克隆和表达
融合蛋白
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Keywords
human interleukin - 23 receptor( il - 23 r)
cloning and expressing
fusion protein
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分类号
R73-3
[医药卫生—肿瘤]
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