静注人免疫球蛋白(pH 4)中IgA残留量的不确定度分析

目的:紫外-可见分光光度法测定静注人免疫球蛋白中IgA残留量,并对其进行不确定度评定。方法:采用紫外-可见分光光度法,测定波长340 nm,比色皿狭缝1 nm,依据操作过程及测定环节引入的影响因素,对各个分量进行评估。结果:静注人免疫球蛋白(pH 4)中的IgA残留量结果为103μg·mL^(-1),扩展不确定度为10μg·mL^(-1)(k=2)。结论:本实验首次对静注人免疫球蛋白(pH 4)中的IgA残留量不确定度分量进行分析和评定,为血液制品检验提供了影响因素来源分析,为提高检验结果准确性提供了数据分析。

Anti-Thyroglobulin IgG in Therapeutic Immunoglobulins: A Reactivity Bias in IgG4 Subclass

Therapeutic immunoglobulins are used in the treatment of immunodeficiencies as well as several autoimmune and inflammatory diseases. These intravenous immunoglobulins (IVIg) represent the healthy human IgG repertoire, which can be reactive for both self and non-self antigens. A better characterization of IVIg’s repertoire is an important aspect to enable its effective utilization as an immunomodulatory treatment. In this study we have investigated the reactivity of IgG1, IgG2, IgG3 and IgG4 present in IVIg for a small selection of antigens, including actin, DNA, ferritin and thyroglobulin. We observed that two commercial preparations of therapeutic immunoglobulins contain very high reactivity for thyroglobulin, which was predominantly detected by IgG4. Since IgG4 antibodies can have immunomodulatory properties, these result suggest that these anti-thyroglobulin may have a role in the IVIg treatment of autoimmune disease characterized by high avidity for anti-thyroglobulin antibodies such as Hashimoto’s disease.

低pH孵放病毒灭活效果回顾性验证评价

目的回顾和评价连续2次低pH病毒灭活工艺验证效果,为静注人免疫球蛋白制品病毒灭活工艺提供进一步技术支持。方法将一定量指示病毒加入IVIG中,在pH4.1±0.3,24±1℃条件下孵放24 d,并在灭活过程中的不同时间节点取样进行残余病毒滴度检测。结果低pH孵放法可有效灭活VSV、Sindbis、HIV指示病毒,3种指示病毒滴度下降均大于4个Logs,符合国药监注[2002]160号文件要求。结论低pH孵放病毒灭活工艺能有效地增加静注人免疫球蛋白的安全性。

巴氏法结合低pH孵放法在IVIG制备中的应用

目的 :进一步提高IVIG的安全性和稳定性。方法 :在Cohn’s低温乙醇法分离制备IVIG的基础上 ,引入液态及无保护剂状态下的巴氏法结合低pH孵放法的两次病毒灭活工艺 ,并对该工艺制备的IVIG的IgG纯度、SephadexG 2 0 0层析、SDS PAGE及圆二色谱分析 ,对病毒灭活有效性、制品稳定性及其它生物学活性检测。 结果 :制品的所有质量指标均符合《中国生物制品规程》要求。结论 :巴氏法结合低 pH孵放法病毒灭活效果优于单一的巴氏灭活法或低 pH孵放法以及其它方法 ,IVIG制品在液体状态下具有良好的稳定性。

静注人免疫球蛋白(pH 4)工艺优化后产品的稳定性

目的评价静注人免疫球蛋白(pH 4)[human immunoglobulin(pH 4)for intravenous injection,IGIV,简称静丙]工艺优化后产品的稳定性。方法在多批次规模化生产中,采用A滤板和B滤膜分别对不同分离阶段蛋白组分进行过滤,以降低产品中免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)残留量。对成品进行物理(外观、可见异物、不溶性微粒检查及热稳定性试验)、化学检定[蛋白质含量、纯度、分子大小分布、抗-HBs、白喉抗体、激肽释放酶原激活剂(prokallikrein activator,PKA)、抗补体活性(anti-complement activity,ACA)及抗-A和抗-B血凝素抗体效价、IgA残留量]及加速和长期稳定性试验。结果采用优化工艺生产的静丙关键质量指标与正常工艺生产批次相比,均无明显差异,IgA残留量明显下降(t分别为3.992和11.215,P均<0.05)。加速稳定性和长期稳定性试验工艺优化后的静丙各项检测结果均合格,符合《中国药典》三部(2020版)中相关规定。结论工艺优化后的静丙在有效降低IgA残留量的基础上,稳定性良好,对于血液制品生产企业提升静丙产品质量具有重要意义。

静注人免疫球蛋白(pH4)中未知组分的生物质谱分析

采用分子排阻色谱(SEC)法测定静注人免疫球蛋白(pH 4)分子大小分布时,在Ig G二聚体和多聚体峰之间发现一未知组分。本研究采用质谱技术分析该未知组分的蛋白质信息。以SEC法分离收集来自4个厂家样品中的该未知组分,经除盐、浓缩和酶解,将获得的肽段采用nano-LC-MS/MS法鉴定蛋白质。结果显示,3个企业样品中的未知组分除含有Ig G外还含有其他杂蛋白,另1企业样品中的未知组分主要为Ig G亚类。将nano-LC-MS/MS获得的未知组分蛋白质信息建立杂蛋白谱数据库,可为药品监管服务。

静注人免疫球蛋白(pH 4)中人肠道病毒71型中和抗体效价分析

目的对目前市售静注人免疫球蛋白(p H 4)(human intravenous immunoglobulin,IVIG)中的人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)中和抗体效价进行筛查,为EV71相关疾病的被动免疫治疗提供参考。方法采用微量细胞病变法检测24批IVIG制品中的EV71中和抗体效价,并分组进行比较。结果 24批IVIG制品中的EV71中和抗体效价为841.6~1 024.3 U/m L,比活为16 832~20 486 U/g Ig G。4个季度生产的IVIG中EV71中和抗体效价差异无统计学意义(P>0.05),病毒高发季与非高发季采浆生产的IVIG中EV71中和抗体效价差异也无统计学意义(P>0.05)。结论 IVIG制品中EV71中和抗体效价可达50 000 U/瓶(蛋白浓度5%,50 m L/瓶),本研究为EV71相关疾病的被动治疗提供了临床参考依据。

静注犬免疫球蛋白(pH 4)滴注速度的确定及安全性观察

目的确定静注犬免疫球蛋白(pH 4)的滴注速度(简称滴速),并观察其安全性。方法以泰迪幼犬和比格幼犬为研究对象,采用不同的滴速(30、60、120和240 mL/h)滴注静注犬免疫球蛋白(pH 4),观察实验犬的临床症状,以滴注1 h内无副反应的滴速速度为推荐滴速。再以比格幼犬为研究对象,分别滴注临床推荐剂量(5 mL/kg)、3倍临床推荐剂量(15 mL/kg)和5倍临床推荐剂量(25 mL/kg)的静注犬免疫球蛋白(pH 4),通过实验犬的临床症状、生理指标和组织病理学变化观察产品的安全性。结果确定幼犬注射静注犬免疫球蛋白(pH 4)的滴速为60 mL/h,先用30 mL/h的滴速滴注15~30 min后,换成60 mL/h的滴速继续滴注。按临床推荐剂量的1、3、5倍剂量使用静注犬免疫球蛋白(pH 4)对比格幼犬具有良好的安全性。结论静注犬免疫球蛋白(pH 4)按确定的滴速进行静脉注射是安全的。

静注人免疫球蛋白生产工艺对活化凝血因子Ⅺ残留水平的影响研究

目的评估本公司静注人免疫球蛋白（IVIG）的生产工艺对活化凝血因子Ⅺ（FⅪa）的去除能力,以期确保产品的安全性。方法采用基团显色法,对9个投浆批次制品低温乙醇血浆蛋白分离纯化阶段,和对应3个批次制品组分Ⅱ（FⅡ）沉淀合并精制,以及制剂阶段的各工艺步骤中,在制品的FⅪa含量进行了研究。结果低温乙醇分离工艺过程中,FⅠ＋Ⅲ过滤步骤将FⅪa含量由（8.1±1.3）mU/mL（FⅠ＋Ⅱ＋Ⅲ沉淀溶解液）,降到低于2.0 mU/mL的检测下限（FⅠ＋Ⅲ上清液）;制剂阶段中低pH孵放步骤,则将原液和半成品的FⅪa含量由（15.4±1.7）mU/mL（原液超滤配制前）,分别降至（2.9±0.9）mU/mL和（2.8±0.6）mU/mL。结论本公司IVIG制品中FⅪa含量较低,现有的生产工艺可以有效确保FⅪa的去除,从而进一步降低了IVIG潜在的致血栓风险。

静注人免疫球蛋白生产工艺中活化凝血因子Ⅺ的形成与去除

目的调查活化凝血因子Ⅺ(activated coagulation factorⅪ,FⅪa)在静注人免疫球蛋白各个生产环节中的分布及含量,分析其在生产过程中的主要形成过程、去除过程及其影响因素。方法采用底物显色法对合并血浆、组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ(fractionⅠ+Ⅱ+Ⅲ,FⅠ+Ⅱ+Ⅲ)上清液、FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀溶解液、FⅠ+Ⅲ沉淀溶解液、FⅠ+Ⅲ上清液、FⅡ沉淀溶解液、FⅡ精制滤过液以及超滤配制后、低pH孵放后制品的FⅪa含量进行检测。添加硅藻土对合并血浆的FⅪ进行激活,将FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀溶解液采用双层滤纸过滤或离心进行FⅪa去除。结果FⅠ+Ⅱ+Ⅲ分离阶段合并血浆FⅪ被激活形成FⅪa,其激活量为合并血浆的2500倍。FⅠ+Ⅲ分离阶段可去除合并血浆FⅪ活化后形成的约99.8%的FⅪa。结论FⅠ+Ⅱ+Ⅲ分离阶段为FⅪa形成的主要阶段,该阶段硅藻土启动内源性凝血途径形成FⅪa;FⅠ+Ⅲ分离阶段为FⅪa去除的主要阶段,该阶段废弃吸附了FⅪa的硅藻土以去除工艺中形成的FⅪa;硅藻土为FⅪa形成与去除的主要影响因素。

人免疫球蛋白联合更昔洛韦治疗小儿腺病毒肺炎的临床研究

目的探讨静注人免疫球蛋白(pH 4)联合注射用更昔洛韦治疗小儿腺病毒肺炎的临床疗效。方法选择2014年6月—2016年12月华中科技大学同济医学院附属武汉儿童医院收治的腺病毒肺炎患儿90例,所有患儿按随机数字表法随机分为对照组和治疗组,每组各45例。对照组静脉滴注注射用更昔洛韦,5 mg/kg,滴注时间>1 h,2次/d。治疗组在对照组基础上静脉滴注静注人免疫球蛋白(pH 4),400 mg/kg,1次/d。两组患儿均连续治疗14 d。观察两组的临床疗效,比较两组的临床症状、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、分泌型磷脂酶A2(sPLA2)、克拉拉细胞分泌蛋白(CCSP)和白细胞介素-1(IL-1)水平情况。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为71.11%、95.56%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组退热时间、咳嗽停止时间、咽痛消失时间、肺部湿啰音消失时间和住院时间均明显短于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组血清TNF-α、sPLA2、CCSP和IL-1水平均明显降低,同组治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组这些观察指标明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论静注人免疫球蛋白(pH 4)联合注射用更昔洛韦治疗小儿腺病毒肺炎具有较好的临床疗效,可改善临床症状,降低TNF-α、sPLA2、CCSP和IL-1水平,具有一定临床推广应用价值。

血必净注射液联合人免疫球蛋白治疗重症病毒性肺炎的临床研究

目的观察血必净注射液联合人免疫球蛋白治疗重症病毒性肺炎的临床疗效。方法选取2012年1月—2015年12月在南京市第一医院住院治疗的重症病毒性肺炎患者92例,随机分为对照组和治疗组,每组各46例。对照组患者静脉注射静注人免疫球蛋白(p H 4),10 g/次,1次/d;治疗组在对照组的基础上静脉注射血必净注射液,50 m L/次,2次/d。两组患者均连续治疗7 d。治疗后,比较两组患者临床疗效、临床症状体征改善及高敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平改变。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为82.61%和91.30%,两组总有效率比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组患者退热时间、咳嗽和气喘消退时间明显短于对照组,两组临床症状体征改善情况比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者hs-CRP、IL-6、TNF-α水平均明显降低,同组治疗前后比较具有统计学意义(P<0.05);且治疗组上述炎症因子降低程度更明显,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论血必净注射液联合人免疫球蛋白治疗重症病毒性肺炎临床疗效显著,能有效改善患者的症状体征和炎症因子,具有一定的临床推广应用价值。

人免疫球蛋白联合哌拉西林钠他唑巴坦钠治疗重症肺部感染的临床研究

目的探讨人免疫球蛋白联合哌拉西林钠他唑巴坦钠治疗重症肺部感染的临床效果。方法选取2016年6月—2017年10月北京市昌平区医院收治的60例重症肺部感染患者,随机分为对照组(30例)和治疗组(30例)。对照组患者静脉滴注注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠3.75 g/次,12次/h,30~40 min滴完;治疗组患者在对照组的基础上静脉滴注静注人免疫球蛋白(pH4),400 mg/kg,1次/d,两组患者均治疗7 d。观察两组患者的临床疗效,比较治疗前后两组患者临床指标改善时间、肺功能、血清学指标和病情严重程度标志物水平。结果治疗后,对照组临床有效率为86.67%,显著低于治疗组的93.33%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组咳嗽消失时间、体温恢复正常时间、肺部啰音消失时间、白细胞恢复时间、住院时间均显著短于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组血清C反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平均显著降低,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.01);且治疗后治疗组血清指标水平均显著低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。两组血清血管紧张素转换酶(ACE)、一氧化氮(NO)水均显著降低,胆碱酯酶(ChE)水平显著升高,同组治疗前后比较差异具有统计学意义(P<0.01);且治疗后治疗组病情严重程度标志物水平显著优于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论人免疫球蛋白联合哌拉西林钠他唑巴坦钠治疗重症肺部感染效果显著,在改善肺功能、抑制炎症反应、抑制病情促进因子等方面均有积极作用,具有一定的临床推广应用价值。

静注人免疫球蛋白质量控制要求的比较

静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)p H 4目前已广泛用于治疗各种免疫缺陷疾病及自身免疫性疾病。严格的质量控制是确保IVIG临床疗效的重要保障,欧美及我国药典均对IVIG的质控作出了严格规定。但IVIG成分复杂,随着其作用机制逐渐明确以及新的临床适应症不断增加,现有的规定可能需实时补充、完善和改进。本文比较了目前国际主流药典关于IVIG制品质量控制要求的差异,以及现有文献资料中对于IVIG制品质量控制新方法的探索,以期对相关人员研究及血液制品企业生产质控有所启发。

静脉注射人免疫球蛋白酸性孵放法灭活艾滋病病毒的效果研究

目的研究静脉注射人免疫球蛋白在生产过程中酸性孵放法灭活艾滋病病毒的效果。方法采用细胞培养法,对含有艾滋病病毒的静脉注射人免疫球蛋酸性孵化法灭活效果进行了实验室检测。结果将含有艾滋病病毒的静脉注射人免疫球蛋白酸度调整为pH4,于21～25℃条件下放置4d,其中艾滋病病毒的滴度(TCID50)由9.50log下降至2.00log以下,下降值达到7.00log以上。相同的样品在pH值7.0条件下放置14d,其中艾滋病病毒滴度仍在3.3log以上;经放置21d,所有样品中艾滋病病毒滴度均在2.0log以下。经过对3批样品重复测定,均未出现细胞病变;经过将样品盲传三代仍未出现细胞病变。结论采用酸性孵放法常温下放置21d,可使静脉注射人免疫球蛋白中艾滋病病毒完全失去活性。

免疫球蛋白联合吗替麦考酚酯胶囊治疗重症系统性红斑狼疮的疗效观察

目的探讨免疫球蛋白联合吗替麦考酚酯胶囊治疗重症系统性红斑狼疮的临床疗效。方法选择2013年12月—2014年12月上海国际医学中心收治的重症系统性红斑狼疮的患者80例,随机分为对照组和治疗组,每组各40例。对照组口服吗替麦考酚酯胶囊,起始剂量为3粒/次,2次/d;3个月后为2粒/次,2次/d;6个月后根据患者的病情用量为2～3粒/d,同时不使用其他免疫抑制剂。治疗组患者在对照组的基础上静脉注射静注人免疫球蛋白（p H 4）0.4 g/kg,1次/d,连续使用3 d,每月重复1次。两组治疗时间为6～12个月。观察两组治疗前后系统性红斑狼疮疾病活动指数（SLEDAI）、血清白蛋白、24 h尿蛋白、Ig G、血肌酐（Scr）的变化情况。比较两组ANA阳性例数、A-ds DNA阳性例数、贫血例数的变化情况。结果治疗后,两组SLEDAI评分、24 h尿蛋白、Ig G、Scr水平均显著降低,血清白蛋白升高,同组治疗前后差异有统计学意义（P〈0.05）;治疗后治疗组SLEDAI评分、24 h尿蛋白、Ig G、Scr低于对照组,血清白蛋白高于对照组,两组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。治疗后,两组ANA阳性例数、A-ds DNA阳性例数、贫血例数均显著减少,同组治疗前后差异有统计学意义（P〈0.05）;治疗组治疗后ANA阳性例数、A-ds DNA阳性例数、贫血例数少于对照组,两组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）。对照组和治疗组不良反应发生率分别为82.5%、47.5%,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论免疫球蛋白联合吗替麦考酚酯胶囊治疗重症系统性红斑狼疮具有良好的效果,能够改善患者的病情,具有一定的临床推广应用价值。

实验设计法优化高浓度静注人免疫球蛋白制剂的处方

目的通过实验设计法优化高浓度(10%)静注人免疫球蛋白(human immunoglobulin for intravenous injection,IVIG)的制剂处方。方法采用单因素试验(包括等电点、二级结构、分子大小分布,转变中点温度4个指标)确定IVIG(10%)的pH范围,同时经国外相关数据和产品质量指标选择IVIG的稳定剂甘氨酸和聚山梨酯80的浓度范围,再采用实验设计法优化IVIG的pH及稳定剂浓度。以转变中点温度为指标,通过单因素试验优化IVIG(10%)的离子强度。结果最佳IVIG(10%)制剂处方为聚山梨酯80:80 mg/L,pH:4. 5,甘氨酸:0. 25 mol/L。最适离子强度为0 mmol/L氯化钠。结论成功优化了IVIG(10%)的制剂处方,可确保制剂的稳定性,提高临床用药安全性。

静注人免疫球蛋白新生产工艺病毒灭活/去除效果的验证及评估

目的对静注人免疫球蛋白(intravenous human immunoglobulin,IVIG)新生产工艺的病毒灭活/去除效果进行验证及评估。方法选择4种脂包膜病毒[人免疫缺陷综合征病毒(human immunodeficiency virus,HIV)、伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)、辛德毕斯病毒(Sindbis virus,SV)和水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)]及非脂包膜病毒[猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)]作为验证病毒,在缩小的生产规模条件下考察辛酸钠沉淀/深层过滤、低pH孵放和纳米膜过滤步骤对一种或几种指示病毒的灭活/去除能力。结果辛酸钠沉淀/深层过滤步骤可灭活/去除PPV 1.88 Log;低pH孵放对HIV、PRV、SV和VSV的灭活效果最低分别为≥5.22、≥4.26、≥6.56和≥5.69 Log;Bio EX纳米膜可去除PPV达4 Log以上。结论 IVIG新生产工艺的病毒灭活/去除效果合格,可有效灭活/去除未知的、新出现的病原体。

静注人免疫球蛋白质量评价与研究

目的评价国内上市不同企业生产的静注人免疫球蛋白(pH4)的质量状况及发现存在的问题。方法对20家生产企业115批次静注人免疫球蛋白(pH4)依据法定质量标准进行检验。同时开展了不良反应影响因素(IgA残留量、促凝血物质残留)、病毒残留风险及Fc段生物学活性等3个方面的探索性研究。对检验及探索性研究所得的结果进行统计分析,综合评价静注人免疫球蛋白(pH4)的质量现状。结果 115批样品合格率为100.0%。IgA含量分布为(1~571)μg·mL;,活化的人凝血因子Ⅺ(FⅪa)活性分布为(0.4~120.7) mIU·mL;,不同企业产品的IgA含量与FⅪa活性差异较大。59批样品Fc活性结果分布78%~319%,均高于药典要求的60%的限度。115批样品均无艾滋病毒、乙肝病毒、丙肝病毒及人细小病毒B19残留。结论本品的总体质量状况较好。但不同企业间产品的IgA残留量、FⅪa活性、抗补体活性及Fc段生物活性等指标上有较大差异,不同企业间产品质量仍有一定的差距。质量标准可进一步完善,可增订IgA含量项。企业应定期对产品开展Fc段生物学活性检测。

甘露聚糖肽口服液联合人免疫球蛋白治疗特发性血小板减少性紫癜的临床研究

目的探讨甘露聚糖肽口服液联合人免疫球蛋白治疗特发性血小板减少性紫癜的临床疗效。方法选取2014年8月—2015年8月在上海市浦东医院接受治疗的特发性血小板减少性紫癜患者74例,随机分为对照组和治疗组,每组各37例。对照组iv静注人免疫球蛋白(pH4),0.4 g/kg,1次/d。治疗组在对照基础上口服甘露聚糖肽口服液,1支/次,3次/d。两组患者均治疗4周。观察两组的临床疗效,比较治疗前后两组T淋巴细胞亚群、血小板相关抗体、血小板计数(PLT)、白细胞介素-4(IL-4)、止血时间和血小板数量达正常时间的情况。结果治疗后,对照组和治疗组的总有效率分别为78.38%、94.59%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者CD^(3+)和CD^(4+)的水平及CD^(4+)/CD^(8+)的比值均显著升高,而CD^(8+)的水平显著下降,同组治疗前后差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组这些观察指标的改善程度优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者血小板相关免疫球蛋白G(PA IgG)、血小板相关免疫球蛋白A(PA IgA)和血小板相关免疫球蛋白M(PA IgM)的水平均明显降低,同组治疗前后差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组这些观察指标的改善程度优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者PLT及IL-4水平均明显升高,同组治疗前后差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组这些观察指标的改善程度优于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组止血时间和血小板数量达正常时间均早于对照组,两组比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论甘露聚糖肽口服液联合人免疫球蛋白治疗特发性血小板减少性紫癜具有较好的临床疗效,可提高患者机体免疫功能,加快止血,具有一定的临床推广应用价值。