自杀基因系统HSV1-TK/GCV对MEC-1细胞的体外杀伤及诱导凋亡作用

目的 :探讨HSV TK/GCV系统对MEC 1细胞的体外作用。方法 :用脂质体介导将含有HSV 1 TK全长cDNA的真核表达质粒G1NATK转染人黏液表皮样癌细胞系MEC 1,经G418筛选 ,挑选阳性克隆 ,用PCR及RT PCR检测目的基因的整合及mRNA转录 ;分别用MTT及细胞记数法检测TK阳性细胞对GCV的体外敏感性及旁观者效应 ;用倒置显微镜、HE染色、活细胞荧光染色及TUNNEL染色观察GCV作用下MEC 1/TK的形态学变化。结果 :PCR及RT PCR分别从G418阳性克隆中成功扩增出 40 4bp的特异性基因片段 ,将此G418抗性克隆命名为MEC 1/TK ;IC50 MEC 1/TK为 0 .7μg/ml,而MEC 1为 10 0 0 μg/ml以上 ;当将TK阳性细胞和TK阴性细胞以不同比例混合 ,TK阳性细胞只占 10 %时 ,即有 90 %的细胞被杀死 ;形态学观察表明 ,经GCV作用 ,MEC 1/TK细胞变圆、脱壁、漂浮 ,部分细胞呈现核浓缩、核碎裂等特征 ,TUNNEL染色核阳性着色细胞明显增多。结论 :HSV TK/GCV系统在体外能明显杀伤MEC 1细胞 ,对GCV的敏感性比未转染的亲本细胞提高 10 0 0倍以上 ,并显示较强的旁观者效应 ;GCV可诱导部分MEC

As_2O_3对人ACC细胞系作用机制的初步研究

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M、ACC-2的体外生物学作用及其作用机制。方法:采用形态学观察、MTT法检测As2O3对人唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M、ACC-2增殖的影响,应用原位末端标记法(TUNEL)及流式细胞仪检测As2O3对ACC-M、ACC-2细胞凋亡作用。结果:As2O3可显著地抑制ACC-M、ACC-2细胞的生长,并且具有时间和剂量依赖性,通过倒置显微镜可明显观察到细胞的形态学改变;通过TUNEL法、流式细胞仪检测显示As2O3可以诱导ACC-M、ACC-2细胞凋亡;并在G2-M期阻滞。结论:As2O3能显著抑制人唾液腺腺样囊性癌细胞的体外生长,其主要作用是诱导细胞凋亡。

重组人肿瘤坏死因子-α诱导黏液表皮样癌细胞凋亡

目的 :探讨重组人肿瘤坏死因子 α(rhTNF α)作用于人黏液表皮样癌细胞 (MEC 1 )的效应与机制 .方法 :应用细胞记数、DNA降解片段琼脂糖凝胶电泳观察、电镜观察和细胞周期测定rhTNF α作用后MEC 1细胞的凋亡状况 .结果 :rhTNF α作用于MEC 1细胞后 ,导致细胞存活数目减少 ,大量细胞发生凋亡 ;基因组DNA分解成寡聚核苷酸片段 ,DNA琼脂糖凝胶电泳有梯形条带 ;细胞周期发生改变 ,形态学观察细胞核皱缩 ,染色质边集 .结论 :rhTNF α是通过MEC

人粘液表皮样癌诱导分化过程中染色体改变的研究

用平面极性化合物环组乙酰胺（ｃＡＨＢ）作为分化诱导剂，对粘液表皮样癌细胞系ＭＥＣ－１细胞进行体外诱导，观察其染色体变化，结果发现诱导后ＭＥＣ－１细胞染色体数目和畸变率均下降，并出现二倍体细胞。

艰难梭菌A毒素诱导人黏液表皮样癌MEC-1细胞DNA双链损伤研究

研究了艰难梭菌A毒素(Clostridium difficile toxin A,TcdA)诱导人黏液表皮样癌细胞(MEC-1)DNA双链损伤的机制。采用MTT法、中性彗星电泳法与免疫荧光法三联实验,分别检测TcdA对MEC-1细胞增殖抑制的影响、TcdA对MEC-1细胞造成DNA双链损伤程度以及TcdA引起MEC-1细胞DNA双链断裂相关蛋白γH_(2)AX、pATM表达的影响。结果表明:TcdA(50~800μmol·L^(-1))抑制了MEC-1细胞的生长且存在时间和浓度依赖特点;TcdA作用MEC-1细胞24 h、100~400μmol·L^(-1)浓度曲线组和TcdA浓度为800μmol·L^(-1)、作用MEC-1细胞3~24 h时间曲线组,MEC-1彗星细胞的尾长、尾部DNA、尾矩和Olive尾矩呈增加趋势,头部DNA百分比减少,800μmol·L^(-1) TcdA作用MEC-1细胞24 h,上述参数均有统计学意义;100~800μmol·L^(-1) TcdA作用MEC-1细胞24 h浓度曲线组和TcdA浓度为800μmol·L^(-1)、作用MEC-1细胞3~48 h时间曲线组、γH_(2)AX、pATM阳性细胞率基本呈增加趋势。艰难梭菌A毒素杀伤肿瘤细胞的机制是诱导肿瘤细胞的DNA双链断裂损伤,其可能与抑制MEC-1细胞增殖,影响细胞γH_(2)AX、pATM的表达水平有关。

九节龙皂苷Ⅰ对口腔黏液表皮样癌Mc3细胞的增殖抑制作用

目的:研究九节龙皂苷Ⅰ(ardipusilloside Ⅰ)对口腔黏液表皮样癌Mc3细胞的增殖抑制与促细胞凋亡作用,以探讨九节龙皂苷Ⅰ的抗肿瘤作用机制。方法:利用MTT法检测九节龙皂苷Ⅰ对Mc3细胞生长抑制率的影响;采用FCM观察细胞周期并检测细胞凋亡率。结果:九节龙皂苷Ⅰ作用于Mc3细胞,在小剂量情况下对细胞杀伤作用较轻,随着药物浓度的增加,细胞生长抑制,其作用特点表现为明显的浓度依赖性,九节龙皂苷Ⅰ对Mc3细胞作用的IC50值为9.98μg/ml。10μg/ml和20μg/ml的九节龙皂苷Ⅰ组的凋亡率分别为24.83%±0.08%和42.63%±0.07%,与对照组7.63%±0.14%相比,凋亡率明显增高。结论:九节龙皂苷Ⅰ可抑制口腔黏液表皮样癌Mc3细胞的增殖并诱导细胞凋亡。

醋酸棉酚诱导人粘液表皮样癌MEC-1细胞DNA双链断裂

本文研究醋酸棉酚(gossypol acetic acid,GAA)对人粘液表皮样癌细胞MEC-1体外增殖的影响,并初步探讨其抑制肿瘤细胞增殖的机制。体外培养人粘液表皮样癌细胞系MEC-1细胞,用MTT法检测GAA对MEC-1细胞增殖的影响;用中性彗星实验检测GAA对MEC-1细胞的DNA双链断裂;用免疫荧光染色法检测GAA诱导的磷酸化组蛋白γH2AX焦点形成。结果显示,5～40μmol/L的GAA以时间和浓度依赖方式抑制MEC-1细胞的生长;2.5～40μmol/L的GAA作用24h,或20μmol/L的GAA作用3～48h,CASP软件分析显示MEC-1彗星细胞的头部DNA百分含量减少,尾长、彗星长度、尾部DNA百分含量、尾矩和Olive尾矩增加;2.5～20μmol/L的GAA作用24h,或20μmol/L的GAA作用3～48h,γH2AX阳性细胞率随着浓度和时间的增加而增加。上述结果表明GAA抑制MEC-1细胞增殖,诱导DNA双链断裂是其抑制肿瘤细胞增殖的机制之一。