Functional expression of opioid receptor-like receptorand its endogenous specific agonist nociceptin/orphanin FQ during mouse embryogenesis

Expression of opioid receptor-like receptor (ORL1)and its endogenous peptide agonist nociceptin/orphaninFo (N/OFQ) during mouse embryogenesis have been investigated. Transcripts of ORL1 and N/OFQ were detected by RT-PCR in mouse brain of day 8 embryo (E8)and the expression continued afterwards. Northern blotanalysis revealed abundant expression of ORL1 at postnatal day 1 (P1) and N/OFQ at E17 and P1 in the brain butnone was detected in other embryonic tissues. The presence of functional ORL1 in mouse embryonic brain wasalso confirmed by specific binding of [3H] N/OFQ (kd=1.3±0.5 nM and Bmax = 72±9 fmol/mg protein) as wellas by N/OFQ-stimulated G protein activation.

大鼠μ阿片受体及人咪唑啉-1受体在CHO细胞中的共同稳定表达

目的 :建立共同稳定表达大鼠 μ阿片受体及人咪唑啉 1受体的哺乳动物细胞表达系统。 方法 :采用脂质体介导的方法 ,将编码大鼠 μ阿片受体和人咪唑啉 1受体的基因导入CHO细胞中 ,以放射配体 受体结合试验分析受体的表达水平 ,用cAMP积累试验分析表达受体的功能。结果 :在共同稳定表达大鼠 μ阿片受体及人咪唑啉 1受体的CHO细胞中 ,表达的 μ阿片受体对3 H 二丙诺啡 (diprenorphine)的Kd 和Bmax值分别为 (0 .2 4± 0 .0 2 )nmol/L和 (1.83±0 .13)pmol/mg蛋白 ;表达的咪唑啉 1受体对3 H 可乐定的Kd 和Bmax值分别为 (3.72± 0 .2 5 )nmol/L和 (4 3.5 9± 6 .83)fmol/10 6细胞。表达的 μ阿片受体抑制福司科林 (forskolin)刺激下cAMP的积累 ,表达的咪唑啉 1受体抑制吗啡慢性处理、纳洛酮催促引起的cAMP超射。结论 :首次建立了共同稳定表达 μ阿片受体和咪唑啉 1受体的细胞模型。

人重组阿片受体样受体在CHO细胞稳定表达系统的建立

目的:在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞上稳定转染人重组阿片受体样受体(hORL1),为体外高通量筛选hORL1受体作用药物及相关药物分子机制研究奠定基础。方法:用脂质体介导法将pcDNA3.1(+)-hORL1重组质粒稳定转染到缺乏hORL1的CHO细胞中,然后用含G418的选择性培养液进行筛选,挑取耐药克隆;用放射性配体-受体结合实验进一步筛选阳性克隆,对阳性克隆受体亲和力和表达量进行分析,用[35S]GTPγS结合实验分析表达受体的功能。结果与结论:在稳定转染hORL1的克隆细胞中,[3H]伤害感受肽的Kd和Bmax值分别为(0.44±0.21)nmol/L和(0.35±0.06)pmol/mg蛋白。伤害感受肽刺激受体结合[35S]GTPγS的EC50值为3.45nmol/L。以上结果与文献报道的天然hORL1受体的特性相似,说明该细胞株表达的hORL1受体与天然的hORL1受体具有基本一致的生物学特性,证实成功建立了稳定表达人阿片受体样受体的细胞模型。