HPV核酸检测及基因分型试剂盒的性能验证及评价

目的对某公司生产的人乳头瘤病毒(HPV)核酸检测及基因分型检测试剂盒(PCR毛细电泳片段分析法)进行性能验证。方法用PCR-反向点杂交技术对待应用的检测HPV亚型试剂盒的准确性、重复性、最低检出限、交叉特异性及抗干扰能力等性能指标进行性能验证及评价。结果该试剂盒采用的PCR毛细电泳片段分析法检测的30例HPV样本中有6例结果不一致,经一代测序验证,与PCR毛细电泳片段分析法检测的结果一致,符合率为100%;重复性和最低检出限均符合要求;解脲支原体、沙眼衣原体、淋球菌和白色念珠菌与该HPV核酸检测及分型试剂盒不存在交叉反应;抗干扰物质对其检测结果无明显影响;与PCR-反向点杂交技术对比,该HPV试剂盒检测对HPV总体阳性率无显著性差异,而对HPV单一感染及多重感染的检出率有差异。结论HPV核酸检测及基因分型试剂盒(PCR毛细电泳片段分析法)性能参数评估合格,可以满足临床样本的检测需求。

人乳头瘤病毒假病毒中和试验血清起始稀释倍数的研究

目的对人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)假病毒中和试验起始稀释倍数进行研究,确定该系统中合适的起始稀释倍数。方法为了排除血清中HPV抗体以及母传抗体的干扰,选取50份15~18月龄的儿童血清作为验证样本。血清以不同的稀释倍数,与适量的假病毒中和。以光学显微镜观察接种细胞的形态,来判定不同稀释度的血清对细胞生长状况的影响;观察感染细胞表达的绿色荧光蛋白的强度及数量,以此考察血清对假病毒感染过程的影响。结果血清稀释度1∶40对细胞生长状况影响较小;该稀释倍数的病毒进入细胞表达的荧光强度与不加血清的阳性对照类似;假病毒感染细胞导致的荧光斑点数与真实病毒对照相比减少了10%,远低于中和试验判定阈值(相对抑制率50%)。结论在该实验系统中,HPV假病毒中和试验的血清起始稀释度以1∶40较为合适。