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The Effect of Connective Tissue Growth Factor on Human Renal Tubular Epithelial Cell Transdifferentiation 被引量:2
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作者 张春 朱忠华 邓安国 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2004年第4期350-353,共4页
To investigate the role of connective tissue growth factor (CTGF) in transdifferentiation of human renal tubular epithelial cell (HKC), in vitro cultured HKC cells were divided into 3 groups: negtive control, low dose... To investigate the role of connective tissue growth factor (CTGF) in transdifferentiation of human renal tubular epithelial cell (HKC), in vitro cultured HKC cells were divided into 3 groups: negtive control, low dose CTGF-treated group (rh CTGF, 2.5 ng/ml) and high dose CTGF-treated (rhCTGF, 5.0 ng/ml). Then the expression of α-smooth muscle actin (α-SMA) were assessed by indirect immuno-fluorescence, and the percentage of α-SMA positive cells were assessed by flow cytometry. RT-PCR were also performed to examine the mRNA level of α-SMA. Upon the stimulation of different concentrations of rhCTGF, the expression of α-SMA were markedly stronger than that in negative controls. The percentages of α-SMA positive cells were significantly higher in the stimulated groups than that of negative controls (38.9 %, 65.5 % vs 2.4 %, P<0.01) .α-SMA mRNA levels were also up-regulated by the stimulation of rhCTGF (P<0.01). These results suggest that CTGF can promote the transdifferentiation of human renal tubular epithelial cells towards myofibroblast (Myo-F). 展开更多
关键词 connective tissue growth factor human renal tubular epithelial cell TRANSDIFFERENTIATION
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槐杞黄通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻高糖诱导的HK-2细胞氧化应激
2
作者 马桂巧 王军伟 +2 位作者 张佩佩 邵婧 马婵娟 《海南医学院学报》 CAS 北大核心 2024年第11期843-849,共7页
目的:探讨槐杞黄(HQH)是否通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻高糖诱导的HK-2细胞氧化应激。方法:将HK-2细胞随机分为:正常组、渗透压对照组、高糖组、槐杞黄组和卡托普利组。采用CCK-8法检测细胞活力;荧光探针检测ROS水平;试剂盒检测SOD活... 目的:探讨槐杞黄(HQH)是否通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻高糖诱导的HK-2细胞氧化应激。方法:将HK-2细胞随机分为:正常组、渗透压对照组、高糖组、槐杞黄组和卡托普利组。采用CCK-8法检测细胞活力;荧光探针检测ROS水平;试剂盒检测SOD活性、MDA和GSH含量;免疫荧光法检测Nrf2的表达;qRT-PCR法检测IL-6、IL-1β和TNF-α以及Nrf2/HO-1 mRNA表达水平;Western blot法检测Nrf2/HO-1通路的表达。结果:与正常组比较,高糖组细胞存活率明显降低(P<0.0001);细胞中ROS、MDA含量升高(P<0.0001),SOD和GSH活性降低(P<0.0001);Nrf2的表达降低;IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA表达量均明显升高(P<0.001);Nrf2/HO-1蛋白和mRNA表达量明显减少(P<0.001);与高糖组相比,槐杞黄组细胞存活率明显升高(P<0.05);细胞中ROS、MDA含量明显降低(P<0.0001),SOD和GSH活性升高(P<0.01);Nrf2的表达增加;IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA表达量明显降低(P<0.01);Nrf2/HO-1蛋白和mRNA表达量均明显升高(P<0.01)。结论:槐杞黄可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路,提高机体抗氧化水平,改善高糖诱导的HK-2细胞氧化损伤。 展开更多
关键词 槐杞黄 人肾小管上皮细胞 氧化应激 核因子E2相关因子2 血红素加氧酶1
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右美托咪定通过SIRT3去乙酰化TFAM对HK-2细胞缺血再灌注损伤的影响
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作者 胡晨 刘玉丽 《医学理论与实践》 2024年第1期12-15,共4页
目的:探讨右美托咪定(Dex)通过沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)去乙酰化线粒体转录因子A(TFAM)对肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤(IRI)的影响。方法:人HK-2细胞株分为对照组、缺血再灌注(I/R)组、Dex组、SIRT3抑制剂(3-TYP)组及Dex... 目的:探讨右美托咪定(Dex)通过沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)去乙酰化线粒体转录因子A(TFAM)对肾小管上皮细胞(HK-2)缺血再灌注损伤(IRI)的影响。方法:人HK-2细胞株分为对照组、缺血再灌注(I/R)组、Dex组、SIRT3抑制剂(3-TYP)组及Dex+3-TYP组。除对照组外,其余各组均制备I/R模型,Dex组、3-TYP组及Dex+3-TYP组分别在I/R制备前分别给予Dex、3-TYP及Dex+3-TYP处理;I/R组及对照组在建模前加入等量生理盐水处理。观察各组细胞培养24h、48h的活性,检测细胞炎症因子[白介素细胞6(IL-6)、IL-8、IL-10]水平。提取线粒体,检测活性氧(ROS)、线粒体膜电位(MMP)、线粒体通透性转换孔(mPTP)开放程度及线粒体DNA(mtDNA)数量。免疫共沉淀(Co-IP)验证SIRT3与TFAM是否相互作用。结果:I/R模型建立后,IL-6、IL-8、ROS水平及TFAM乙酰化水平均升高,细胞活力(24/48h的OD值)、IL-10、MMP、mPTP、mtDNA水平及SIRT3表达均下降(P<0.05);I/R模型经3-TYP干预后上述变化加重(P<0.05);Dex干预I/R模型后,细胞活力增加,IL-10、MMP、mPTP、mtDNA水平及SIRT3表达均升高,IL-6、IL-8、ROS水平及TFAM乙酰化水平均下降(P<0.05);3-TYP与Dex共干预后Dex作用减弱(P<0.05);Co-IP验证结果显示SIRT3与TFAM均被沉淀,二者存在相互作用。结论:SIRT3去乙酰化TFAM参与Dex减轻HK-2细胞缺血再灌注损伤的过程。 展开更多
关键词 肾小管上皮细胞 缺血再灌注损伤 右美托咪定 沉默信息调节因子2相关酶3 线粒体转录因子A
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杨桃根DMDD对高糖诱导的肾小管上皮细胞HK-2内质网应激IRE1α通路及炎症反应的抑制作用 被引量:2
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作者 王誉湘 谢静晓 +6 位作者 张晓萍 庞川皓 王璐 陈秋燕 陈林倩 黄仁彬 韦晓洁 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1270-1275,共6页
目的研究杨桃根活性成分2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(DMDD)对高糖诱导肾小管上皮细胞HK-2内质网应激及炎症反应的抑制作用。方法体外培养HK-2细胞,并分为正常组、高糖组、内质网应激抑制剂4-PBA组(5 mmoL·L^(-1))和... 目的研究杨桃根活性成分2-十二烷基-6-甲氧基-2,5-二烯-1,4-环己二酮(DMDD)对高糖诱导肾小管上皮细胞HK-2内质网应激及炎症反应的抑制作用。方法体外培养HK-2细胞,并分为正常组、高糖组、内质网应激抑制剂4-PBA组(5 mmoL·L^(-1))和DMDD高、中、低浓度组(8、4、2μmol·L^(-1))。各组细胞培养结束后,采用CCK-8法检测细胞存活率;ELISA检测细胞上清液中TNF-α、IL-6的水平;AO/EB染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达水平、内质网应激标志蛋白GRP78、CHOP的表达水平以及IRE1α通路相关蛋白(IRE1α、JNK)的磷酸化水平。结果与高糖组比较,DMDD各浓度组细胞存活率明显升高;TNF-α、IL-6水平,Bax/Bcl-2、GRP78、CHOP蛋白表达水平和IRE1α、JNK蛋白磷酸化水平均明显降低,细胞中橙红色荧光明显减少。结论DMDD可能部分通过抑制内质网应激及IRE1α通路相关蛋白的表达,减少炎症反应,达到HK-2细胞的保护作用。 展开更多
关键词 2-十二烷基-6-甲氧基-2 5-二烯-1 4-环己二酮 糖尿病肾病 肾小管上皮细胞 内质网应激 凋亡 IRE1α通路
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二甲双胍对草酸钙诱导的人肾小管上皮细胞HK-2氧化应激及炎症反应调节作用观察 被引量:1
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作者 周吾溪 王海荣 +2 位作者 徐友胜 戚剑烽 陆顶进 《山东医药》 CAS 2023年第9期26-30,共5页
目的观察二甲双胍对草酸钙诱导的人肾小管上皮细胞HK-2氧化应激及炎症反应的调节作用。方法将HK-2细胞随机分成对照组、草酸钙组、二甲双胍组1、二甲双胍组2、PDTC组,其中对照组给予无血清DMEM培养基,草酸钙组加入浓度为100μg/mL的草... 目的观察二甲双胍对草酸钙诱导的人肾小管上皮细胞HK-2氧化应激及炎症反应的调节作用。方法将HK-2细胞随机分成对照组、草酸钙组、二甲双胍组1、二甲双胍组2、PDTC组,其中对照组给予无血清DMEM培养基,草酸钙组加入浓度为100μg/mL的草酸钙晶体悬浮液,二甲双胍组1加入浓度为100μg/mL的草酸钙晶体悬浮液和1.20 mmol/L的二甲双胍晶体悬浮液,二甲双胍组2加入浓度为100μg/mL的草酸钙晶体悬浮液和0.80 mmol/L的二甲双胍晶体悬浮液,PDTC组加入浓度为100μg/mL的草酸钙晶体悬浮液和100 mmol/L的NF-κB特异性抑制剂PDTC晶体悬浮液。各组细胞继续培养6 h,采用比色法检测细胞上清液中丙二醛(MDA),采用Elisa法检测细胞上清液中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)蛋白,采用RT-PCR法检测细胞中NF-κB、MCP-1 mRNA。结果对照组、草酸钙组、二甲双胍组1、二甲双胍组2、PDTC组细胞上清液中MDA含量分别为(0.21±0.02)、(1.62±0.09)、(1.04±0.01)、(1.27±0.12)、(0.83±0.02)mmol/mg,MCP-1蛋白含量分别为(8.25±0.62)、(66.31±3.78)、(31.54±2.15)、(42.26±2.10)、(20.36±1.92)pg/mL,组间相比,P均<0.05。对照组、草酸钙组、二甲双胍组1、二甲双胍组2、PDTC组细胞中NF-κB mRNA相对表达量分别为1.00±0.01、1.68±0.02、1.23±0.02、1.41±0.01、1.09±0.01,MCP-1 mRNA相对表达量分别为1.00±0.01、2.39±0.01、1.64±0.02、1.89±0.01、1.44±0.01,各组细胞中NF-κB、MCP-1 mRNA相对表达量组间相比,P均<0.05。结论1.20 mmol/L或0.80 mmol/L二甲双胍可抑制草酸钙诱导的HK-2细胞氧化应激,并通过抑制NF-κB通路进一步抑制下游炎症反应。 展开更多
关键词 二甲双胍 肾结石 草酸钙肾结石 人肾小管上皮细胞 丙二醛 单核细胞趋化蛋白-1
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人环状RNA_0114428对脂多糖诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用及其机制 被引量:2
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作者 王亚静 贾宝辉 +4 位作者 韩方方 韩迎东 赵兰兰 石莹 张华 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期101-109,共9页
目的:探讨人环状RNA_0114428(circ_0114428)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用,阐明circ_0114428通过调节微小RNA-139-5p(miR-139-5p)/转化生长因子β受体2(TGFBR2)轴改善HK-2细胞损伤的可能分子机制。方法:体外培养H... 目的:探讨人环状RNA_0114428(circ_0114428)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮HK-2细胞损伤的作用,阐明circ_0114428通过调节微小RNA-139-5p(miR-139-5p)/转化生长因子β受体2(TGFBR2)轴改善HK-2细胞损伤的可能分子机制。方法:体外培养HK-2细胞,双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与circ_0114428和TGFBR2的靶向调控关系,CCK-8法筛选合适的LPS干预浓度和时间。给予10 mg·L^(-1) LPS干预12 h构建HK-2细胞损伤模型,HK-2细胞分为对照组、LPS组、LPS+circ_0114428沉默对照(LPS+si-NC)组、LPS+circ_0114428沉默(LPS+si-circ_0114428)组、LPS+circ_0114428沉默+miR-139-5p抑制剂对照(LPS+si-circ_0114428+in-NC)组和LPS+circ_0114428沉默+miR-139-5p抑制剂(LPS+si-circ_0114428+in-miR-139-5p)组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中circ_0114428、miR-139-5p和TGFBR2 mRNA表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中TGFBR2、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL^(-1)β)水平。结果:双荧光素酶报告基因实验,miR-139-5p与circ_0114428和TGFBR2存在靶向调控关系(t=10.171,P<0.05;t=7.682,P<0.05)。CCK-8法检测LPS干预的最佳浓度为10 mg·L^(-1),最佳干预时间为12 h。与对照组比较,LPS组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显升高(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-circ_0114428组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显降低(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与LPS+si-circ_0114428+in-NC组比较,LPS+si-circ_0114428+in-miR-139-5p组HK-2细胞中circ_0114428表达水平、TGFBR2 mRNA和蛋白表达水平、Bax蛋白表达水平、细胞凋亡率及细胞上清液中IL-6、TNF-α和IL^(-1)β水平均明显升高(P<0.05),miR-139-5p表达水平和Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:circ_0114428能减轻LPS诱导的HK-2细胞损伤,其作用机制可能与调节miR-139-5p/TGFBR2轴有关。 展开更多
关键词 环状RNA_0114428 miR-139-5p 转化生长因子β受体2 脂多糖 人肾小管上皮细胞
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微小RNA-22-3p抑制人肾小管上皮细胞NLRP3活化
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作者 林莉 李菊霜 +2 位作者 朱戈丽 张艳霞 伍军 《微循环学杂志》 2024年第3期1-5,11,共6页
目的:探讨微小RNA-22-3p(miR-22-3p)对人肾小管上皮细胞NLRP3活化的影响。方法:将包含NLRP3基因3’-非编码区(3’-UTR)序列的野生型及突变型双荧光素酶报告基因质粒(psiCHECK2)分别与miR-22-3p mimic(模拟物)、miR-22-3p inhibitor(抑制... 目的:探讨微小RNA-22-3p(miR-22-3p)对人肾小管上皮细胞NLRP3活化的影响。方法:将包含NLRP3基因3’-非编码区(3’-UTR)序列的野生型及突变型双荧光素酶报告基因质粒(psiCHECK2)分别与miR-22-3p mimic(模拟物)、miR-22-3p inhibitor(抑制物)共转染人肾小管上皮细胞株(HK-2),检测细胞荧光素酶活性;HK-2细胞随机分组如下:(1)正常对照组;(2)miR-22-3p mimic+LPS+ATP组;(3)miR-22-3p control+LPS+ATP组;(4)miR-22-3p inhibitor+LPS+ATP组;(5)miR-22-3p mimic+LPS组;(6)miR-22-3p control+LPS组;(7)miR-22-3p inhibitor+LPS组,采用定量PCR(RT-PCR)、免疫印迹(WB)分别检测NLRP3 mRNA和蛋白的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测白介素-1β(IL-1β)水平及半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)活性。结果:NLRP3-3’UTR野生型分别与miR-22-3p mimic、miR-22-3p inhibitor共转染HK-2细胞后,与对照组比较,荧光素酶活性分别出现降低与升高(P<0.05)。此外,与miR-22-3p control+LPS组比较,miR-22-3p mimic+LPS组NLRP3 mRNA和蛋白表达、IL-1β水平及Caspase-1活性均下降(P<0.05),miR-22-3p inhibitor+LPS组NLRP3 mRNA和蛋白表达、IL-1β水平及Caspase-1活性均升高(P<0.05);与miR-22-3p control+LPS+ATP组比较,miR-22-3p mimic+LPS+ATP组NLRP3 mRNA和蛋白表达、IL-1β水平及Caspase-1活性均下降(P<0.05),miR-22-3p inhibitor+LPS+ATP组NLRP3 mRNA和蛋白表达、IL-1β水平及Caspase-1活性均升高(P<0.05)。结论:miR-22-3p可抑制人肾小管上皮细胞NLRP3活化。 展开更多
关键词 miR-22-3p 人肾小管上皮细胞 NLRP3
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重组hCGPx腺病毒对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧再复氧损伤的保护作用 被引量:5
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作者 项和立 薛武军 +4 位作者 侯军 田普训 滕琰 潘晓鸣 丁小明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期472-474,共3页
目的:研究重组腺病毒介导的人胞质型谷胱甘肽过氧化物酶(hCGPx)转染对人肾小管上皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用。方法:将含hCGPXcDNA的质粒pGEM-T-hCG-Px和重组腺病毒穿梭质粒pACCMV-pLpA重组,构建pACC-MV-hCGPx穿梭质粒后,与包装质粒... 目的:研究重组腺病毒介导的人胞质型谷胱甘肽过氧化物酶(hCGPx)转染对人肾小管上皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用。方法:将含hCGPXcDNA的质粒pGEM-T-hCG-Px和重组腺病毒穿梭质粒pACCMV-pLpA重组,构建pACC-MV-hCGPx穿梭质粒后,与包装质粒pJM17共转染293细胞,构建重组腺病毒AdCMV-hCGPx。以重组腺病毒载体AdCMV-hCGPx转染体外培养的人肾小管上皮细胞株HK-2,以转染空载体的HK-2细胞为对照组,检测转染细胞中CGPx的表达水平。将HK-2细胞经缺氧再复氧损伤处理后,分别检测细胞的存活率、凋亡率及死亡率。结果:各转染组细胞中CGPx的表达率显著高于对照组(P<0.01)。经缺氧再复氧损伤处理后,AdCMV-hCGPx转染组细胞的存活率较对照组明显增强,死亡细胞明显减少,细胞凋亡明显受到抑制。结论:重组腺病毒介导的hCGPx转染人肾小管上皮细胞可保护缺氧再复氧引起的损伤。 展开更多
关键词 人胞质型谷胱甘肽过氧化物酶 转染 肾小管上皮细胞 缺氧再复氧损伤
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黄芩素介导PI3K/Akt信号通路对高糖诱导HK-2细胞氧化应激和炎症反应的影响研究 被引量:13
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作者 杨柳 张欣雅 +6 位作者 王静 王怡 程汝阳 李晨响 李爽 赵世超 李建民 《现代中西医结合杂志》 CAS 2022年第4期455-458,463,共5页
目的探讨黄芩素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(BPI3K/Akt)通路对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)氧化应激和炎症反应的调控作用。方法实验分为5组:正常组HK-2细胞只加入DMEM低糖培养基培养48 h;高糖模型组HK-2细胞在DMEM低糖培... 目的探讨黄芩素通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(BPI3K/Akt)通路对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)氧化应激和炎症反应的调控作用。方法实验分为5组:正常组HK-2细胞只加入DMEM低糖培养基培养48 h;高糖模型组HK-2细胞在DMEM低糖培养基中加入4×10^(-2)mol/L浓度高糖培养48 h;黄芩素低、中、高剂量组HK-2细胞先分别加入1×10^(-7)mol/L、1×10^(-6)mol/L、1×10^(-5)mol/L黄芩素培养24 h后,再加入4×10^(-2)mol/L浓度高糖继续培养24 h。采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖率,按照试剂盒说明检测各组细胞中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达量,采用Western blot法检测各组细胞中磷酸化磷酸肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、TNF-α蛋白表达量。结果与正常组比较,高糖模型组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞中ROS、MDA含量及TNF-αmRNA表达量和p-PI3K、p-Akt、TNF-α蛋白表达量均明显升高(P均<0.05);与高糖模型组比较,黄芩素各组细胞存活率均明显升高(P均<0.05),细胞中ROS、MDA含量及TNF-αmRNA表达量和p-PI3K、p-Akt、TNF-α蛋白表达量均明显降低(P均<0.05)。结论黄芩素可能通过抑制高糖诱导的氧化应激反应及PI3K/Akt通路活化来减少炎症因子产生,从而发挥保护HK-2细胞作用。 展开更多
关键词 黄芩素 人近端肾小管上皮细胞 磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路 氧化应激 炎症反应
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硫化氢对TGF-β1诱导的HK-2细胞上皮间充质转化的抑制作用 被引量:3
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作者 曹慧霞 牛福坤 +3 位作者 尤冠巧 阎磊 朱清 邵凤民 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2012年第5期654-657,共4页
目的:观察硫化氢(H2S)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞转分化的影响,并初步探讨其作用的可能机制。方法:以体外培养的HK-2细胞为研究对象,分别用10μg/LTGF-β1、100μmol/LNaHS(H2S的供体)及2者联合作用进行干... 目的:观察硫化氢(H2S)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞转分化的影响,并初步探讨其作用的可能机制。方法:以体外培养的HK-2细胞为研究对象,分别用10μg/LTGF-β1、100μmol/LNaHS(H2S的供体)及2者联合作用进行干预,以正常培养的细胞作正常对照。孵育0、15、30及60min后,Westernblot检测4组细胞磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)和Smad2蛋白的表达;孵育48h后,观察细胞形态变化,Westernblot检测4组细胞E-cadherin、α-SMA蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,TGF-β1组细胞发生梭形变,E-cadherin蛋白表达下降(F=1262.535,P<0.001),α-SMA蛋白表达上调(F=1456.030,P<0.001);NaHS+TGF-β1组细胞发生梭形变的程度较TGF-β1组明显减轻,E-cadherin蛋白表达增加(F=65.330,P<0.001),α-SMA蛋白表达下降(F=288.300,P<0.001)。TGF-β1组细胞在15、30及60min时p-Smad2/3表达均较正常对照组增加,而NaHS+TGF-β1组细胞p-Smad2/3的表达较TGF-β1组降低(P<0.05)。结论:H2S可抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化,该作用可能部分通过影响Smad2/3磷酸化程度来完成。 展开更多
关键词 硫化氢 肾小管上皮细胞 TGF-Β1 上皮间充质转化 hk-2细胞
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益肾抗纤复方对HK-2细胞转分化过程作用的基因组学研究 被引量:2
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作者 孙世竹 孙伟 +5 位作者 秦雪梅 鲍军 陈燕 蒋娟娟 申志祥 高雪燕 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1129-1134,共6页
目的通过基因芯片研究中药益肾抗纤复方与苯那普利含药血清对人肾近端小管上皮细胞(HK-2细胞)向间质成肌纤维细胞转分化(renal tubular epithelial cells to mesenchymal myofibroblasts transdif-ferentiation,TEMT)过程中的影响。方... 目的通过基因芯片研究中药益肾抗纤复方与苯那普利含药血清对人肾近端小管上皮细胞(HK-2细胞)向间质成肌纤维细胞转分化(renal tubular epithelial cells to mesenchymal myofibroblasts transdif-ferentiation,TEMT)过程中的影响。方法制备SD大鼠含药血清,观察含药血清对HK-2细胞在5ng/mL转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)诱导下TEMT过程的阻抑作用。HK-2细胞随机分为空白对照组、模型组、苯那普利组和中药组。采用IlluminaBeadChip的人全基因组基因表达芯片(HumanHT-12v4),提取总RNA分离纯化后,经过逆转录、合成、杂交、洗片和扫描获得差异表达基因,并进行差异基因相关分析。结果通过基因芯片技术成功筛选差异表达基因,苯那普利组与模型组比较差异表达基因227个,其中上调表达基因118个,下降表达基因109个;中药组与模型组比较差异表达基因97个,其中上调表达基因69个,下降表达基因28个。通过基因本体论分析,益肾抗纤复方较苯那普利在细胞损伤、凋亡、生长、NF-κB、蛋白激酶、神经元及血管生长等生物过程中有更多调控作用。结论益肾抗纤复方与苯那普利对HK-2细胞TEMT过程均有阻抑作用,但益肾抗纤复方对TEMT过程早期的细胞应对损伤、凋亡、生长等有更多途径的参与。 展开更多
关键词 益肾抗纤复方 苯那普利 人肾近端小管上皮细胞 肾小管上皮细胞向间质成肌纤维细胞转分化
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新疆鼠尾草酚酸类成分对HK-2细胞氧化损伤的保护作用及机制研究 被引量:4
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作者 王晓梅 任春晖 +2 位作者 王新玲 米仁沙·牙库甫 胡君萍 《中国药房》 CAS 北大核心 2022年第19期2348-2353,共6页
目的研究新疆鼠尾草酚酸类成分对高糖高脂诱导的人肾小管上皮细胞HK-2氧化损伤的保护作用,并初步探讨其可能机制。方法将HK-2细胞分为对照组、模型组、卡格列净片组(阳性对照组,15μmol/L)、新疆鼠尾草酚酸纯化物组(10.8μg/mL)和4个单... 目的研究新疆鼠尾草酚酸类成分对高糖高脂诱导的人肾小管上皮细胞HK-2氧化损伤的保护作用,并初步探讨其可能机制。方法将HK-2细胞分为对照组、模型组、卡格列净片组(阳性对照组,15μmol/L)、新疆鼠尾草酚酸纯化物组(10.8μg/mL)和4个单体成分组(丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸,均为50μmol/L)。除对照组外,其余各组均建立高糖高脂损伤细胞模型(500μmol/L棕榈酸+30 mmol/L葡萄糖处理48 h)并加药培养48 h。检测各组细胞的凋亡率以及细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量和谷胱甘肽(GSH)活性,并检测上述5组(丹参素组、原儿茶醛组、咖啡酸组除外)细胞中核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、血红素氧合酶1(HO-1)、醌NADH脱氢酶1(NQO1)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组细胞的凋亡率显著升高(P<0.01);细胞中MDA含量显著升高(P<0.01),GSH含量和SOD活性显著降低(P<0.01);细胞中Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达显著下调(P<0.01),Keap1蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,各给药组细胞的凋亡率及细胞中MDA含量均显著降低(P<0.01),各给药组细胞中GSH含量及酚酸纯化物组、原儿茶醛组、迷迭香酸组细胞中SOD活性均显著升高(P<0.01);酚酸纯化物组细胞中Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达以及迷迭香酸组Nrf2蛋白表达均显著上调(P<0.01),酚酸纯化物组和迷迭香酸组细胞中Keap1蛋白表达均显著下调(P<0.01)。结论新疆鼠尾草酚酸类成分可减轻高糖高脂所致肾小管上皮细胞的氧化应激损伤,其作用可能与其激活Keap1/Nrf2通路、抑制氧化应激反应相关。 展开更多
关键词 新疆鼠尾草 酚酸类成分 人肾小管上皮细胞hk-2 氧化损伤 Kelch样ECH相关蛋白1 核转录因子E2相关因子2
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LPS通过TLR4信号通路诱导人肾小管上皮细胞株(HK-2)表达hBD-2 被引量:5
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作者 赵俊丽 王俭勤 王晶宇 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期222-225,共4页
目的研究LPS体外刺激人肾小管上皮细胞株(HK-2)是否诱导表达hBD-2,并进一步探讨该表达与TLR4/NF-κB信号传导通路的关系。方法给予不同质量浓度的LPS(0.01、0.1、1、10μg/ml)刺激HK-2细胞12 h,再应用TLR4及NF-κB阻断剂预处理HK-2细胞... 目的研究LPS体外刺激人肾小管上皮细胞株(HK-2)是否诱导表达hBD-2,并进一步探讨该表达与TLR4/NF-κB信号传导通路的关系。方法给予不同质量浓度的LPS(0.01、0.1、1、10μg/ml)刺激HK-2细胞12 h,再应用TLR4及NF-κB阻断剂预处理HK-2细胞1 h后,给予质量浓度为1μg/ml的LPS作用12 h,采用实时荧光定量PCR检测HK-2细胞hBD-2 mRNA的表达,ELISA检测细胞上清中hBD-2的表达。结果 1)LPS能诱导HK-2细胞hBD-2 mRNA及蛋白的表达,且这种表达具有质量浓度依赖性;2)TLR4阻断剂能抑制LPS对HK-2细胞表达hBD-2的诱导作用,与未阻断之前相比差异具有统计学意义(P<0.01);3)NF-κB阻断剂能抑制LPS对HK-2细胞表达hBD-2的诱导作用,与未阻断之前相比差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 LPS可能通过TLR4/NF-κB信号传导通路诱导HK-2细胞表达hBD-2,将为泌尿系统感染防治提供新靶点。 展开更多
关键词 人肾小管上皮细胞 人B防御素-2 TOLL样受体4 脂多糖 NF-κB
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新加糖肾康对高糖环境下HK-2细胞TGF-β/Smads信号通路的影响 被引量:3
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作者 程涛 权卓 +3 位作者 杨丽霞 田广芳 张定华 刘铜华 《西部中医药》 2015年第11期13-16,共4页
目的:通过观察新加糖肾康(TSK)对高糖环境培养下人肾小管上皮细胞(HK-2)TGF-β/Smads信号通路的影响,探讨其防治糖尿病肾病的作用机制。方法:体外培养HK-2细胞,培养基为含10%胎牛血清的1640培养基,实验分为6组:空白对照组、高糖组(30 mm... 目的:通过观察新加糖肾康(TSK)对高糖环境培养下人肾小管上皮细胞(HK-2)TGF-β/Smads信号通路的影响,探讨其防治糖尿病肾病的作用机制。方法:体外培养HK-2细胞,培养基为含10%胎牛血清的1640培养基,实验分为6组:空白对照组、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、空白血清对照组(30 mmol/L D-葡萄糖+10%空白血清)、新加糖肾康低剂量组(30 mmol/L D-葡萄糖+5%TSK药物血清)、新加糖肾康中剂量组(30 mmol/L D-葡萄糖+10%TSK药物血清)、新加糖肾康高剂量组(30 mmol/L D-葡萄糖+20%TSK药物血清)。ELISA法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、转化生长因子-β受体I(TGF-βRⅠ)、转化生长因子-β受体Ⅱ(TGF-βRⅡ)、Smad2、Smad3的表达。结果:HK-2细胞经高糖环境培养后TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad2、Smad3的含量显著增加,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。但经新加TSK干预后其含量下降,与高糖组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:中药复方TSK能够抑制肾小管上皮细胞TGF-β/Smads信号通路,具有防治糖尿病肾间质纤维化的作用。 展开更多
关键词 新加糖肾康 高糖 人肾小管上皮细胞 TGF-β/Smads通路
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福辛普利抑制LPS诱导的人肾小管上皮HK-2细胞TAK1表达 被引量:1
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作者 黄文辉 卢守燕 汤羽 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2012年第9期1088-1092,共5页
目的探讨福辛普利(FOS)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖及对转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响。方法体外培养正常HK-2细胞,分为3组:对照组(Ctrl)、LPS诱导组(10μg/L)、FOS干预组(LPS 10μg/L+FOS 1×106mol... 目的探讨福辛普利(FOS)对脂多糖(LPS)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖及对转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响。方法体外培养正常HK-2细胞,分为3组:对照组(Ctrl)、LPS诱导组(10μg/L)、FOS干预组(LPS 10μg/L+FOS 1×106mol/L)。细胞培养12、24和48 h,以甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖情况,酶联免疫吸附(ELISA)法观察细胞上清纤维黏连蛋白(FN)变化,Western blot法检测TAK1、FN蛋白表达,实时荧光定量PCR检测TAK1 mRNA的含量。结果 LPS诱导组较对照组细胞的增殖水平(在48 h分别为0.462±0.013及0.363±0.014)、胞质中FN的含量均显著增高,且自12 h开始TAK1蛋白(在48 h分别为1.627±0.101及0.547±0.010)及mRNA表达水平上调(P<0.01,P<0.05),FOS干预组细胞增殖(在48 h为0.396±0.011)、FN的含量及TAK1的表达(在48 h蛋白表达为1.308±0.097)较同时间点LPS组(在48 h蛋白表达为1.627±0.101)显著下调(P<0.01)。结论FOS可能通过抑制HK-2的增生与活化,减轻细胞外基质FN的沉积,起到延缓肾间质纤维化的作用。 展开更多
关键词 福辛普利 人肾小管上皮细胞 转化生长因子β激活激酶 肾间质纤维化
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糖耐康对TGF-β_1诱导的HK-2细胞VEGF mRNA表达的影响 被引量:1
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作者 朱春晖 康开彪 +4 位作者 杨丽霞 李晓东 刘铜华 吴丽丽 孙文 《西部中医药》 2013年第9期13-15,共3页
目的:通过观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达,进一步探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养... 目的:通过观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达,进一步探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+20%糖耐康药物血清)。药物干预24小时后,荧光定量PCR检测VEGF mRNA的表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,VEGF mRNA的表达显著上升,与空白对照组相比有统计学意义(P<0.05),经糖耐康药物血清干预后,VEGF mRNA的表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:糖耐康能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞VEGF mRNA的表达,在一定程度上具有抑制肾小管上皮细胞纤维化的作用。 展开更多
关键词 糖耐康 转化生长因子-Β1 人肾小管上皮细胞(hk-2) VEGF mRNA
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肿瘤坏死因子对HK-2细胞增殖及表达结缔组织生长因子的影响 被引量:1
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作者 张秋林 彭燕 《湖北中医药大学学报》 2014年第2期24-26,共3页
目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖及表达结缔组织生长因子(CTGF)蛋白的影响。方法采用DMEM/F12培养基体外培养HK-2细胞,分别用不同浓度的TNF-α刺激HK-2细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测HK-2细胞的增殖... 目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖及表达结缔组织生长因子(CTGF)蛋白的影响。方法采用DMEM/F12培养基体外培养HK-2细胞,分别用不同浓度的TNF-α刺激HK-2细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测HK-2细胞的增殖,用流式细胞术(FCM)检测细胞周期,ELISA方法检测培养细胞的上清液中CTGF蛋白含量。结果与对照组(不加TNF-α)相比,0.1ng/mLTNF-α组、0.5ng/mL TNF-α组、1.0ng/mL TNF-α组、5ng/mL TNF-α及10ng/mL TNF-α组,MTT法测定的吸收光度A值、细胞增殖指数、ELISA方法检测培养细胞的上清液中CTGF蛋白含量,均有极显著性升高(P<0.01),并随着TNF-α浓度的增加而递增(P<0.05或P<0.01)。但是,当培养液中TNF-α浓度到达1.0ng/mL后达到高峰,即在1.0ng/mL TNF-α、5ng/mL TNF-α及10ng/mL TNF-α组间,上述指标均无显著性差异(P>0.05)。结论炎症因子TNF-α能促进肾小管上皮细胞的增殖、分泌致纤维化因子CTGF,从而在慢性肾脏疾病的发生发展中发挥重要作用。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 肾小管上皮细胞 结缔组织生长因子
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通过基因芯片研究苯那普利对HK-2细胞TEMT过程的影响作用
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作者 孙世竹 陈燕 +4 位作者 鲍军 秦雪梅 蒋娟娟 申志祥 高雪燕 《实用老年医学》 CAS 2012年第1期26-30,52,共6页
目的通过基因芯片探讨苯那普利对人肾近端小管上皮细胞(HK-2细胞)向间质肌成纤维细胞转分化(TEMT)过程中的影响作用。方法制备苯那普利含药血清,将HK-2细胞随机分为正常组、模型组、苯那普利(洛丁新)组。采用Illumina Bead Chip的人全... 目的通过基因芯片探讨苯那普利对人肾近端小管上皮细胞(HK-2细胞)向间质肌成纤维细胞转分化(TEMT)过程中的影响作用。方法制备苯那普利含药血清,将HK-2细胞随机分为正常组、模型组、苯那普利(洛丁新)组。采用Illumina Bead Chip的人全基因组基因表达芯片(Human HT-12 v4),提取总RNA分离纯化后,经过逆转录、合成、杂交、洗片和扫描获得差异表达基因,并进行差异基因相关分析。结果通过基因芯片技术成功筛选差异表达基因,模型组与正常组比较差异表达基因80个,其中上调表达53个,下降表达27个;洛丁新组与模型组比较差异表达基因227个,其中上调表达118个,下降表达109个。通过基因GO分析,洛丁新组较模型组在细胞增殖、移动、转分化、连接酶活化等生物过程中有更多参与。结论本实验为更加全面阐明苯那普利对TEMT的调控作用提供了实验依据。 展开更多
关键词 苯那普利 人肾近端小管上皮细胞(hk-2细胞) 肾小管细胞上皮细胞向间质肌成纤维细胞转分 化(TEMT) 基因芯片 差异表达基因 基因GO分析
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消癥活络方药对TGF-β_1诱导HK-2细胞转分化的影响
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作者 叶豆丹 郭淑婷 +2 位作者 潘志 刘庆彬 王颖航 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1286-1288,共3页
目的通过离体细胞实验研究消癥活络方药含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响。方法体外培养人肾HK-2,应用不同浓度消癥活络方药含药血清处理经TGF-β1诱导活化的HK-2细胞,噻唑兰(MTT)法检测... 目的通过离体细胞实验研究消癥活络方药含药血清对转化生长因子(TGF)-β1诱导的人肾近曲小管上皮细胞(HK-2)转分化的影响。方法体外培养人肾HK-2,应用不同浓度消癥活络方药含药血清处理经TGF-β1诱导活化的HK-2细胞,噻唑兰(MTT)法检测细胞增殖,免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及结缔组织生长因子(CTGF)的表达。结果 TGF-β1可刺激HK-2细胞增殖,消癥活络方药含药血清可明显抑制TGF-β1引起的HK-2细胞增殖。TGF-β1可引起HK-2细胞α-SMA及CTGF表达上调,消癥活络方药含药血清可抑制其上调。结论消癥活络方药对TGF-β1诱导的HK-2的增殖及α-SMA、CTGF的表达具有抑制作用,可拮抗TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化作用,抑制TGF-β1刺激HK-2分泌细胞外基质可能是其抗纤维化形成的机制之一。 展开更多
关键词 消癥活络方药 转化生长因子β1 人肾近曲小管上皮细胞 转分化
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白藜芦醇对碘普罗胺诱导人肾小管上皮HK-2细胞氧化应激及Klotho蛋白表达的影响
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作者 张滨 钟小华 廖丽贞 《广东医学》 CAS 2018年第4期501-505,共5页
目的探讨白藜芦醇对碘普罗胺诱导的人肾小管上皮HK-2细胞氧化应激及Klotho蛋白表达的影响。方法应用不同剂量(137.5、275.0和550.0 mg I/mg)的碘普罗胺处理人肾小管上皮HK-2细胞12 h建立离体的对比剂肾病模型,以MTT比色法检测细胞存活... 目的探讨白藜芦醇对碘普罗胺诱导的人肾小管上皮HK-2细胞氧化应激及Klotho蛋白表达的影响。方法应用不同剂量(137.5、275.0和550.0 mg I/mg)的碘普罗胺处理人肾小管上皮HK-2细胞12 h建立离体的对比剂肾病模型,以MTT比色法检测细胞存活率、试剂盒法检测乳酸脱氢酶酶(LDH)活力以及流式细胞术检测细胞凋亡百分率。加入不同剂量(1、10和100μmol/L)的白藜芦醇或N-乙酰半胱氨(NAC)处理,检测碘普罗胺诱导的HK-2细胞存活率、LDH和细胞凋亡百分率的变化,同时使用CMH2DCFDA荧光法检测细胞内活性氧簇(ROS)荧光强度,采用Western bolt法检测各组细胞的Klotho蛋白表达情况。结果碘普罗胺处理人肾小管上皮HK-2细胞12 h后,HK-2细胞的存活率呈剂量依赖性下降,LDH和凋亡率均呈剂量依赖性地升高;加入不同浓度白藜芦醇处理后,白藜芦醇能呈剂量依赖性地抑制碘普罗胺所致的细胞存活率下降、LDH和凋亡率的升高,效果与NAC类似。此外,与对照组比较,碘普罗胺组的ROS荧光染色增加。加入白藜芦醇或NAC后,均能抑制由碘普罗胺所致的ROS荧光染色增加。在Klotho蛋白表达方面,与对照组比较,碘普罗胺组的Klotho蛋白表达下调,加入白藜芦醇后,能有效抑制由碘普罗胺所致的Klotho蛋白表达下调,而加入NAC后,并不能有效抑制由碘普罗胺所致的Klotho蛋白表达下调,其Klotho蛋白表达与单纯碘普罗胺组相当。结论白藜芦醇具有抑制碘普罗胺所致的HK-2细胞毒性作用,效果与NAC相近,其机制可能与白藜芦醇上调Klotho蛋白从而降低碘普罗胺所致的HK-2细胞氧化应激水平有关。 展开更多
关键词 白藜芦醇 碘普罗胺 人肾小管上皮HK^2细胞 KLOTHO蛋白 氧化应激 凋亡
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