miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中的表达及作用机制

目的探讨miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中的表达及作用机制。方法取对数生长期人淋巴瘤Jurkat细胞,分别向培养基中加入5 ml生理盐水配制的浓度为0、0.5、1.0、1.5μg/ml的多柔比星,取健康体检者(对照组)的单个核细胞。采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-106a以及视网膜母细胞瘤1(RB1)、E2F转录因子1(E2F1)、胱天蛋白酶3(caspase 3)mRNA的表达水平,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡能力,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测RB1、E2F1、caspase 3蛋白的表达水平。结果0μg/ml多柔比星干预人淋巴瘤Jurkat细胞miRNA-106a的表达水平明显高于对照组单个核细胞(P﹤0.01)。随多柔比星浓度升高、作用时间延长,miRNA-106a表达水平逐渐降低,光密度(OD)值逐渐降低,细胞增殖抑制率(IR)和凋亡率均逐渐升高,RB1、caspase 3 mRNA及其蛋白的表达水平均逐渐升高,E2F1 mRNA及其蛋白的表达水平均逐渐降低,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。相关性分析结果显示,miRNA-106a与RB1、caspase 3的表达均呈负相关(P﹤0.01),与E2F1的表达呈正相关(P﹤0.01)。结论miRNA-106a在人淋巴瘤Jurkat细胞中高表达,其可能通过调控RB/E2F1通路相关蛋白的表达来调节淋巴瘤进展。

采用Gateway^(TM)系统构建人Rb94基因重组腺病毒载体

目的采用GatewayTM技术构建人Rb94基因重组腺病毒载体(Ad-hRb94)。方法从人类胚胎中提取总RNA,经反转录得到目的 cDNA,PCR扩增Rb94目的基因片段。设计含有attB侧翼序列的引物,用于重组片段的PCR扩增,在BP重组酶的作用下,将含attB位点的PCR产物与受体载体pDONRTM221发生重组反应,产生入门克隆。在LR重组酶作用下,将入门克隆与带attR1、at-tR2位点的目的载体Ad/CMV/V5-DEST体外重组形成表达克隆Ad-hRb94。经PCR和测序鉴定,将Ad-hRb94线性化后转入293A细胞进行病毒的包装、扩增及病毒滴度测定。结果经PCR和测序证实目的基因Rb94片段按正确方向重组入目的载体中,带Rb94基因的目的载体在293A细胞中包装成功,获得高滴度的病毒颗粒,滴度为9.41×1010pfu/ml。结论本实验利用GatewayTM技术成功构建了Ad-hRb94,为进一步进行肿瘤基因治疗研究奠定了实验基础。

沉默LncRNA DLGAP1-AS2对人视网膜母细胞瘤增殖和迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默LncRNA DLGAP1-AS2对人视网膜母细胞瘤HXO-Rb44增殖、迁移和侵袭的影响及其可能作用机制。方法:收集病理确诊且临床资料完整的视网膜母细胞瘤组织标本25例,同时选取因外伤摘除眼球的正常视网膜组织9例为对照;qRT-PCR法检测正常视网膜组织、视网膜母细胞瘤组织、人正常视网膜血管内皮细胞ACBRI-181、视网膜母细胞瘤细胞HXO-Rb44中DLGAP1-AS2、miR-1193的表达量;将si-NC、si-DLGAP1-AS2、miR-NC、miR-1193 mimic、si-DLGAP1-AS2与miR-1193 inhibitor(共转染)分别转染至HXO-Rb44细胞;双荧光素酶报告实验检测DLGAP1-AS2与miR-1193的靶向关系;CCK-8法、平板克隆形成实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、集落形成数、迁移及侵袭;Western blot法检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果:视网膜母细胞瘤组织中DLGAP1-AS2的表达量高于正常视网膜组织(P<0.05),而miR-1193的表达量低于正常视网膜组织(P<0.05);HXO-Rb44细胞中DLGAP1-AS2的表达量高于ACBRI-181细胞(P<0.05),miR-1193的表达量低于ACBRI-181细胞(P<0.05);DLGAP1-AS2可靶向调控miR-1193的表达;转染si-DLGAP1-AS2或转染miR-1193 mimic可抑制HXO-Rb44细胞增殖、迁移及侵袭;共转染si-DLGAP1-AS2与miR-1193 inhibitor可降低转染si-DLGAP1-AS2对HXO-Rb44细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:沉默DLGAP1-AS2可通过靶向调控miR-1193表达而抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖、迁移及侵袭。

从眼科病理学角度深入认识眼内肿瘤

眼科病理学是组织病理学的重要分支，对于深入认识和揭示眼部疾病发挥着重要作用。眼科临床上常见的、严重影响人生存质量的原发性眼内恶性肿瘤是视网膜母细胞瘤（RB）和葡萄膜黑色素瘤（UM），其中RB是婴幼儿常见的原发性眼内恶性肿瘤，而UM是成年人常见的原发性眼内恶性肿瘤。研究表明，RB患者中，大约2／3是由散发的体细胞Rbl基因突变引起的，另外约1／3的RB是由生殖细胞Rbl基因突变引起的，而RB的生物学研究提示，后者发生年龄早，通常为双眼发病，有遗传性。RB高危病理因素主要包括筛板后视神经受侵和／或大范围脉络膜受累，治疗过程中也是术后辅助化学疗法的重要指征。UM缺乏有效的全身治疗措施，最终约有一半患者死于肿瘤的远处转移，多数为肝脏转移。UM预后不良与肿瘤大小、睫状体受累、上皮样细胞型、眼外扩散等有关，单体型染色体3和2类基因表达谱是目前最准确和客观的UM预后指标。

淫羊藿总黄酮保护衰老细胞端粒长度缩短的实验研究

目的探讨淫羊藿总黄酮 (EF)延缓人胚肺二倍体成纤维细胞衰老以及保护端粒缩短的作用机制。方法采用含EF的血清对人二倍体成纤维细胞 2BS细胞株进行处理 ,观察 2BS细胞寿命 ;采用荧光实时定量PCR法检测 p16基因mRNA的表达 ;ELISA法检测细胞视网膜母细胞瘤 (retinoblastoma ,Rb)蛋白和磷酸化Rb蛋白的含量 ;TRAP Hyb单管一步法检测细胞端粒酶活性 ;端粒限制性片段 (TRF)Southernblot法检测 2BS细胞端粒长度变化。结果淫羊藿总黄酮能够延长 2BS细胞的传代寿命 ;下调 2BS细胞p16基因mRNA的表达 ;增加磷酸化Rb蛋白的含量 ;延缓衰老细胞端粒长度的缩短 ,而不是激活细胞端粒酶活性。结论 2BS细胞衰老时 ,p16基因mRNA的表达增加 ,磷酸化Rb蛋白含量减少 ,细胞端粒长度缩短 ;淫羊藿总黄酮可能通过抑制p16基因表达 ,促进磷酸化Rb蛋白的产生 ,从而延缓衰老细胞端粒长度的缩短 ,具有延缓细胞衰老的作用 ,而不是通过激活细胞端粒酶的活性。

大蒜素和顺铂联合作用对人视网膜母细胞瘤细胞凋亡影响的研究

目的:探讨大蒜素和顺铂联合应用对人视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用,及其对人视网膜母细胞瘤细胞凋亡的影响。方法:人视网膜母细胞瘤细胞株,经复苏,孵育,传代分为4个实验组,分别用大蒜素、顺铂、大蒜素和顺铂联合处理人视网膜母细胞瘤细胞,在不同时间(24、48、72 h)观察细胞的形态,并应用免疫细胞化学SP法检测不同处理条件下和各时间点bcl-2和PDCD5的表达情况。结果:人视网膜母细胞瘤细胞在大蒜素、顺铂以及大蒜素和顺铂联合作用下,细胞生长增殖受到抑制,与对照组的人视网膜母细胞瘤细胞相比形态学变化明显。大蒜素、顺铂及两者联合作用均可以下调人视网膜母细胞瘤细胞中bcl-2的表达,上调人视网膜母细胞瘤细胞中PDCD5的表达,大蒜素15μg/mL和顺铂3μg/mL联合用药可增强对人视网膜母细胞瘤细胞的生长抑制,与大蒜素15μg/mL、顺铂3μg/mL单独处理人视网膜母细胞瘤细胞比较,下调bcl-2表达和上调PDCD5表达的作用差异有统计学意义(P<0.05)。结论:大蒜素和顺铂联合用药作用强于单独用药,可进一步提高药物对肿瘤细胞的生长抑制。

增强型绿色荧光蛋白与Rb94基因共表达载体的构建和表达

目的构建增强型绿色荧光蛋白与Rb94基因的真核共表达载体并鉴定其在真核细胞中的表达。方法用PCR技术对cDNA-Rb质粒中的目的基因片段进行扩增,使用BamHⅠ和SalⅠ进行双酶切,切胶回收DNA片段。将其连接入pEGFP-C1,构建pEGFP-C1/Rb94真核表达载体并再进行酶切鉴定。将重组质粒用脂质体转染法转染至人视网膜母细胞瘤细胞(HXO-Rb44)中,荧光显微镜下观察EGFP在细胞内的表达,Western blot检测Rb蛋白的表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果重组克隆载体内的目的片段序列与Rb94基因序列完全一致。pEGFP-C1/Rb94酶切鉴定结果与预期结果一致。荧光显微镜下观察可见转染后的细胞有荧光出现。Western blot检测结果表明Rb94基因得到了有效表达。流式细胞仪检测结果显示,含Rb94基因的细胞凋亡率为(21.17±0.45)%,明显高于其他组(P<0.05)。结论成功构建EGFP和Rb94真核共表达载体,并可在真核细胞中有效表达,Rb94对视网膜母细胞瘤细胞有明显抑制生长作用。

视网膜中Müller细胞分布的免疫组织化学研究

用抗非神经元烯醇化酶（ＮＮＥ）抗体研究６～３８周人胚胎、成人视网膜和视网膜母细胞瘤中Ｍüｌｌｌｅｒ细胞的分布。发现Ｍüｌｌｅｒ细胞呈放射状，胞体位于内核层，分支包绕神经元的胞体和突起。不同视网膜Ｍüｌｌｅｒ细胞的分支和ＮＮＥ含量有差异，提示与视网膜的功能状态有关。

奥沙利铂对人视网膜母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨不同浓度奥沙利铂对人视网膜母细胞瘤(RB)细胞Y79增殖及凋亡的影响。方法将Y79细胞于RPMI 1640培养基中进行培养,分别给予0.000、0.125、0.250、0.500、1.000、2.000μmol·L-1奥沙利铂对Y79细胞进行处理,检测Y79细胞增殖情况、凋亡情况及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性变化。结果不同浓度的奥沙利铂对Y79细胞增殖均有抑制作用,且随着浓度的增加,抑制作用逐渐增强(P<0.05);与0.000μmol·L奥沙利铂比较,0.250μmol·L-1奥沙利铂对Y79细胞增殖已有较强的抑制作用(P<0.05)。0.000、0.250μmol·L-1奥沙利铂处理下Y79细胞凋亡率分别为(2.18±0.43)%、(36.94±1.36)%,0.250μmol·L-1奥沙利铂处理下Y79细胞凋亡率显著高于0.000μmol·L-1奥沙利铂处理时(P<0.01)。0.000、0.250μmol·L-1奥沙利铂处理下Y79细胞中Caspase-3活性分别为(1.97±0.72)%、(5.82±0.64)%,0.250μmol·L-1奥沙利铂处理下Y79细胞中Caspase-3活性显著高于0.000μmol·L-1奥沙利铂处理时(P<0.01)。结论奥沙利铂可抑制人RB细胞增殖,并促进其凋亡。

胃癌组织端粒酶逆转录酶和Rb基因表达及其临床意义

目的 :探讨端粒酶逆转录酶 (humantelomerasereversetranscriptase ,hTERT)、Rb蛋白在胃癌中表达。方法 :应用SP法检测了 5 0例胃癌标本 ,2 5例胃癌前病变组织 ,11例正常胃黏膜组织。结果 :胃癌组hTERT阳性率为 86 0 %。胃癌组Rb表达阳性率为 5 8 0 %。hTERT活性表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移及临床分期呈显著正相关 ,P <0 0 5。Rb表达与胃癌淋巴结转移、临床分期呈显著负相关 ,P<0 0 5。hTERT表达与Rb表达呈显著负相关 ,P <0 0 5。结论 :hTERT表达与胃癌的发生高度相关 ,检测hTERT有助于胃癌的早期诊断 ;

全反式维甲酸和亚硒酸钠对HL-60细胞Rb基因的RNA表达及其产物磷酸化的影响

目的：观察全反式维甲酸（ＲＡ）和亚硒酸钠对ＨＬ６０的Ｒｂ基因的ＲＮＡ及其产物磷酸化的联合效应。方法：以ＨＬ６０细胞为实验对象，利用狭线杂交、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ和流式细胞仪进行研究。结果：狭线杂交实验表明ＲＡ和硒单独或联合都对Ｒｂ基因的ＲＮＡ无明显影响。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ结果显示：ＲＡ和硒可影响该细胞ＲＢ蛋白磷酸化与去磷酸化状态。在第４天０．１μｍｏｌ／ＬＲＡ可使去磷酸化ＲＢ蛋白增加４７％；５．８μｍｏｌ／ＬＮａ２ＳｅＯ３可使磷酸化ＲＢ蛋白减少４９％，对去磷酸化ＲＢ蛋白仅轻度增加。联合后去磷酸化ＲＢ蛋白明显增加，较对照组增加了１２７％，明显高于两单独组。实验中ＲＢ蛋白磷酸化状态与细胞分化和细胞周期关系与文献报道一致。结论：ＲＡ和硒联用对ＨＬ６０细胞的ＲＢ蛋白产物去磷酸化作用比单独作用更强。

亚硒酸钠对人早幼粒白血病细胞的RB蛋白磷酸化的影响

以人早幼粒白血病细胞（HL－60）为实验对象，利用Western－blotting方法和流式细胞仪分析，研究亚硒酸钠对HL－60细胞的RB蛋白产物磷酸化的影响和探讨其抗癌机制。Western－blotting结果显示：与对照组相比，在第四天5．8μmol／LNa2SeO3可使磷酸化Rll蛋白减少49％，去磷酸化RB蛋白仅轻度增加，但在加硒组中去磷酸化RB蛋白占RB蛋白总量的71．1％。与此同时，细胞周期的结果表明：亚硒酸钠对HL－60细胞的G2＋M和S期有一定的阻滞。该实验在蛋白分子水平上研究了亚硒酸钠抑制HL－60细胞增殖的作用机制。

粉防己碱对人视网膜母细胞瘤细胞株S0-Rb50增殖凋亡影响的可能机制研究

目的观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI 3K)/蛋白激酶B(Akt)通路对人视网膜母细胞瘤细胞株S0-Rb50增殖及凋亡的影响。方法对数期生长S0-Rb50细胞分为4组,即对照组、Tet低、中、高剂量组,分别用0、2.5、5.0、10.0μmol/L Tet处理,观察干预24h细胞形态学变化;MTT法检测干预24、48、72h时各组吸光度(A)值;流式细胞术检测干预24h各组细胞周期及细胞凋亡率;实时荧光定量PCR及Western blot法检测干预24h各组细胞PI 3K、Akt、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA和蛋白表达量及裂解的含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达量。结果倒置相差显微镜观察发现,对照组细胞形态规则、融合成片,不同干预组细胞随Tet浓度升高细胞体积逐渐减小、核质比例减小,不能融合成片,视野内漂浮细胞或细胞崩解碎片增多。与对照组比较,Tet高剂量组干预24h时A值较低,差异有统计学意义(P<0.05),Tet各剂量组干预48、72h时A值均较低,且随干预剂量升高呈降低趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组MTT试验A值随干预时间的延长呈升高趋势(P<0.05),Tet高剂量组MTT试验A值随干预时间的延长无明显变化(P>0.05)。与对照组比较,Tet各剂量组G 0/G 1、S期细胞占比、PI 3K、Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量及pAkt/Akt较低,且随干预剂量升高呈降低趋势,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,Tet各剂量组G 2/M期细胞占比、凋亡率、Bax mRNA和蛋白相对表达量及cleaved caspase-3蛋白相对表达量较高,且随干预剂量升高呈降低趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Tet可抑制人视网膜母细胞瘤细胞株S0-Rb50增殖、促进凋亡,可能与抑制PI 3K/Akt信号通路、下调Bcl-2 mRNA和蛋白、上调Bax mRNA和蛋白及cleaved caspase-3蛋白表达相关。

绿原酸对视网膜母细胞瘤细胞株HXO-RB44的生长抑制作用

目的探讨绿原酸(CHA)对体外培养人视网膜母细胞瘤(Rb)细胞株HXO-RB44的作用及机制。方法应用CCK-8体外抑制实验,筛选CHA对体外培养传6代的人Rb细胞株HXO-RB44的最佳抑癌浓度。Western blot检测人Rb细胞株HXO-RB44中抑癌基因Rb1和P16及细胞周期蛋白(Cyclin D2)和细胞周期蛋白依赖激酶(CDK 4)的表达变化;ELISA检测培养基中乳酸脱氢酶(LDH)水平。结果 CCK-8体外抑制实验结果显示,CHA对人Rb细胞株HXO-RB44的最佳抑癌浓度为80μmol/L。经80μmol/L CHA处理5d的HXO-RB44细胞株中,抑癌基因Rb1和P16均有少量表达,而在阳性对照组(HT1080细胞)和未处理的HXO-RB44细胞几乎没有表达。CHA处理5d的HXO-RB44细胞株的Cyclin D2和CDK4的表达明显低于阳性对照组(HT1080细胞)和未处理的HXO-RB44细胞(P<0.01)。CHA处理5d的HXO-RB44的培养基中LDH的含量为(226.75±42.74)U/L,明显低于正常培养的细胞培养基(425.84±31.67)U/L(P<0.01)。结论 80μmol/L CHA可能通过增加HXO-RB44抑癌基因的表达,降低细胞周期蛋白的表达及LDH水平,而抑制HXO-RB44细胞株的增殖。

人ERK2基因对人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞生长的影响

目的:构建携带Myc标签的人细胞外信号调节激酶2(ERK2)的真核表达载体,表达Myc-ERK2融合蛋白,检测其对人视网膜母细胞瘤细胞生长的影响。方法:采用PCR技术从乳腺文库中扩增人ERK2基因序列,将其插入pXJ-40载体;将重组质粒与空载体转染人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞系后,Western印迹检测表达情况,并进行生长曲线实验。结果:双酶切和测序鉴定表明Myc-ERK2真核表达质粒构建成功;转染WERI-Rb-1细胞后融合蛋白获得表达,生长曲线实验结果表明ERK2可促进肿瘤细胞的生长。结论:携带Myc标签的人ERK2基因的真核表达载体能在人视网膜母细胞瘤WERI-Rb-1细胞中表达,且能促进该细胞的生长。本实验为进一步研究ERK2在肿瘤尤其是眼恶性肿瘤中的功能奠定了基础。

miR-370通过FoxM1相关通路调控人视网膜母细胞瘤细胞凋亡机制研究

目的探讨miR-370对人视网膜母细胞瘤细胞Y79增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法通过Lipofectamine TM 2000将miR-370-mimics、miR-370-NC及miR-370-inhibitor转染至Y79细胞内,分别建立miR-370过表达组(mimics组)、对照组(NC组)和抑制组(inhibitor组),三组转染24 h、48 h、72 h和96 h时,均使用CCK-8检测各组细胞增殖活性;转染48 h后,RT-PCR检测各组细胞内miR-370表达;Annexin V-FITC/PI联合流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,Western Blot检测各组细胞PI3K、P-AKT、FoxM1蛋白表达。结果mimics组细胞miR-370 mRNA表达远高于其他两组(均为P<0.05),inhibitor组细胞miR-370 mRNA表达显著低于其他两组(均为P<0.05)。自转染48 h起,inhibitor组细胞增殖活性显著高于其他两组(均为P<0.05),而mimics组细胞增殖活性显著低于其他两组(均为P<0.05),这种趋势一直持续至转染后96 h。mimics组细胞早期凋亡率显著高于其它两组(均为P<0.05),而inhibitor组细胞早期凋亡率在三组中最低(P<0.05)。mimics组细胞内PI3K、P-AKT、FoxM1蛋白表达均显著低于其他两组(均为P<0.05),而inhibitor组细胞内PI3K、P-AKT、FoxM1蛋白表达显著高于其他两组(均为P<0.05)。结论miR-370能够抑制人视网膜母细胞瘤细胞Y79的增殖,促进其凋亡,这种影响可能是通过降低PI3K/AKT/FoxM1信号通路的活性实现的。

黄芪扶正汤抑制人甲状腺乳头状癌细胞的机制研究

目的:研究黄芪扶正汤抑制人甲状腺乳头状癌细胞增殖及诱导凋亡的机制。方法:体外培养人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞,分为对照组(加完全培养基,黄芪扶正汤药物0g/L)、不同剂量实验组(黄芪扶正汤质量浓度0.5、1.0、2.5、5、10g/L)。MTT法检测各组细胞增殖情况,IC50评价检测出最优有效浓度;流式细胞术检测对照组和最优有效浓度组的细胞周期及凋亡情况;qPCR法检测对照组和最优有效浓度组细胞Rb、CDK4 mRNA的表达情况。结果:IC50评价检测系统结果显示,实验组黄芪扶正汤抑制TPC-1增殖的最优有效浓度为6.118g/L,可引起细胞发生G0/G1期阻滞;与对照组相比,最优有效浓度组细胞凋亡明显增多(P<0.05);Rb及CDK4 mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:黄芪扶正汤可有效下调Rb及CDK4 mRNA的表达,从而抑制人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖及诱导细胞凋亡。

参芪排毒汤对宫颈癌组织人乳头瘤病毒E6/E7、P53和PRb基因蛋白表达的影响

目的:研究参芪排毒汤对宫颈癌组织人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA、肿瘤抑制基因(P53)、视网膜母细胞瘤蛋白(PRb)表达水平的影响与意义。方法:选取112例宫颈癌患者进入研究,按随机数字表划分成对照组与治疗组,两组均给予新辅助化疗联合腹腔镜宫颈癌根治术治疗,治疗组在新辅助化疗的同时给予参芪排毒汤口服;术前评估两组临床疗效,统计不良反应发生情况,术中取癌旁健康组织与病灶病理组织样本检测HPV E6和E7 mRNA表达水平并计算E6/E7比值,检测样本中P53、PRb表达水平;随访至少3年,比较两组患者的3年无病情进展生存时间(PFS)、总生存时间(OS),分析新辅助化疗后病理组织中HPV E6/E7、P53、PRb表达水平对PFS、OS的预测价值。结果:治疗组缓解率为83.93%,对照组为62.50%,治疗组缓解率高于对照组(P<0.05);治疗组不良反应发生率为12.50%,对照组为17.86%,差异比较无统计学意义(P>0.05);化疗后两组患者癌旁组织中HPV E6/E7比值比较,差异无统计学意义(P>0.05),病理组中HPV E6/E7表达高于治疗组(均P<0.05),两组癌旁与病理组织中P53、PRb比较,差异有统计学意义(均P>0.05);化疗后宫颈癌组织中HPV E6/E7、P53、PRb表达水平对于患者无病情进展生存时间PFS、OS均具有较高预测价值(AUC>0.9,P<0.05);治疗组患者PFS、OS均长于对照组(均P<0.05)。结论:在腹腔镜宫颈癌根治术前新辅助化疗中联合应用参芪排毒汤,能够提高术前疗效,抑制宫颈癌组织中HPV E6/E7表达、提升P53、PRb表达水平,从而起到延长患者无病情进展生存时间与总生存时间,改善预后的作用。

miR-34a对人脂肪间充质干细胞成骨向分化的调控

目的探讨miR-34a对人脂肪间充质干细胞(hASCs)成骨分化中相关蛋白的表达及相关作用机制。方法从西南医科大学附属医院接受选择性抽脂手术或其他腹部手术的捐赠者获得脂肪组织,并分离培养hASCs。分别使用miR-34a模拟物、抑制剂和阴性对照转染hASCs,并通过逆转录-聚合酶链反应检测miR-34a在hASCs成骨分化各时间点的表达,Western blot检测成骨细胞中RBP2、RNUX2、P27蛋白表达情况,用双荧光素酶报告基因测定系统测定海肾和萤火虫萤光素酶活性。结果与阴性对照组相比,在转染第0、4、8、12天,miR-34a模拟物组的细胞miR-34a表达水平显著升高(P<0.05),而miR-34a抑制剂组显著降低(P<0.05)。miR-34a模拟物组RBP2蛋白表达降低,而miR-34a抑制剂表达增加。双荧光素酶报告测定证实RBP2是miR-34a的直接靶标。此外,miR-34a模拟物组RUNX2和P27蛋白表达上调,而miR-34a抑制剂表达下调。结论 miR-34a在hASCs成骨分化中起促进作用,并可能通过靶向RBP2起作用。

依托咪酯通过下调circ_0000527表达对人视网膜母细胞瘤Y-79细胞生物学行为的影响

目的探讨依托咪酯(ETO)对人视网膜母细胞瘤Y79细胞的生物学行为影响以及机制研究。方法体外培养Y-79细胞,分为对照组(常规培养)、低、中、高剂量实验组(用0.2、0.4、0.8μg·mL^(-1)ETO处理)、si-NC组(转染si-NC)、si-circ_0000527组(转染si-circ_0000527)、ETO+pcDNA组(用0.8μg·mL^(-1)ETO处理后转染pcDNA)、ETO+pcDNA-circ_0000527组(用0.8μg·mL^(-1)ETO处理后转染pcDNA-circ_0000527)。用MTT法检测细胞增殖情况;用平板克隆实验检测细胞克隆形成情况;用划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移及侵袭能力;用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测circ_0000527表达情况;用蛋白质印迹法检测N-cadherin、E-cadherin蛋白表达情况。结果对照组、低、中、高剂量实验组、si-NC组、si-circ_0000527组、ETO+pcDNA组、ETO+pcDNA-circ_0000527组的细胞增殖抑制率分别为0、(17.89±1.69)%、(38.43±3.10)%、(56.97±5.06)%、(5.78±0.56)%、(48.79±4.65)%、(58.40±4.81)%和(21.23±2.17)%;克隆形成数量分别为(87.15±6.11)、(70.91±6.26)、(52.32±5.19)、(38.68±3.42)、(88.73±6.81)、(44.18±4.83)、(36.26±3.62)和(72.14±5.69)个;划痕愈合率分别为(71.02±5.58)%、(54.08±4.97)%、(39.67±3.26)%、(23.98±2.77)%、(72.01±5.61)%、(30.16±2.26)%、(22.82±2.15)%和(60.17±5.83)%;侵袭细胞个数分别为(119.80±12.93)、(88.78±6.78)、(70.73±6.18)、(52.78±4.29)、(120.18±12.48)、(62.34±5.88)、(50.88±4.07)和(92.06±8.60)个;circ_0000527表达水平分别为1.00±0.00、0.79±0.06、0.57±0.04、0.35±0.03、1.00±0.00、0.28±0.03、1.00±0.00和3.66±0.23。低、中、高剂量实验组上述指标与对照组比较,si-circ_0000527组上述指标与si-NC组比较,ETO+pcDNA-circ_0000527组上述指标与ETO+pcDNA组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论ETO可能通过抑制circ_0000527表达,阻滞Y-79细胞的迁移、侵袭及增殖。