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Fusion protein of single-chain variable domain fragments for treatment of myasthenia gravis
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作者 Fangfang Li Fanping Meng +4 位作者 Quanxin Jin Changyuan Sun Yingxin Li Honghua Li Songzhu Jin 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2014年第8期851-856,共6页
Single-chain variable domain fragment (scFv) 637 is an antigen-specific scFv of myasthenia gravis. In this study, scFv and human serum albumin genes were conjugated and the fusion pro-tein was expressed in Pichia pa... Single-chain variable domain fragment (scFv) 637 is an antigen-specific scFv of myasthenia gravis. In this study, scFv and human serum albumin genes were conjugated and the fusion pro-tein was expressed in Pichia pastoris. The afifnity of scFv-human serum albumin fusion protein to bind to acetylcholine receptor at the neuromuscular junction of human intercostal muscles was detected by immunolfuorescence staining. The ability of the fusion protein to block myas-thenia gravis patient sera binding to acetylcholine receptors and its stability in healthy serum were measured by competitive ELISA. The results showed that the inhibition rate was 2.0-77.4%, and the stability of fusion protein in static healthy sera was about 3 days. This approach suggests the scFv-human serum albumin is a potential candidate for speciifc immunosuppressive therapy of myasthenia gravis. 展开更多
关键词 nerve regeneration myasthenia gravis acetylcholine receptor anti-acetylcholine re-ceptor antibody single-chain variable domain fragment human serum albumin fusion protein immunosuppressive therapy autoimmune disease NSFC grant neural regeneration
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人白介素2-人血清白蛋白融合蛋白的纯化及活性鉴定 被引量:3
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作者 李波 段作营 +5 位作者 张红梅 雷楗勇 陈蕴 唐瑜菁 金坚 李华钟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期289-293,共5页
采用课题组已构建的携带人白介素2-人血清白蛋白融合蛋白(rhIL-2-HSA)基因的重组毕赤酵母Pichia pastoris GS115进行rhIL-2-HSA的分离纯化研究。发酵上清液经超滤浓缩、Blue Sepharose亲和层析、Octyl Sepharose疏水层析和DEAE Sepharos... 采用课题组已构建的携带人白介素2-人血清白蛋白融合蛋白(rhIL-2-HSA)基因的重组毕赤酵母Pichia pastoris GS115进行rhIL-2-HSA的分离纯化研究。发酵上清液经超滤浓缩、Blue Sepharose亲和层析、Octyl Sepharose疏水层析和DEAE Sepharose离子交换层析纯化获得较高纯度的目的产物,SDS-PAGE检测为单一条带。Western Blot分析结果显示,目的产物同时具有HSA和IL-2的抗原性,为HSA和IL-2的融合分子。经CTLL-2/MTT细胞增殖法测定,纯化的融合蛋白的生物学活性为1.147×107 IU/mg。 展开更多
关键词 人白介素2 人血清白蛋白 融合蛋白 纯化
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人C-型利钠肽-血清白蛋白融合蛋白质的构建及在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:3
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作者 李洁 张莲芬 +3 位作者 孙钧铭 雷楗勇 陈伟 金坚 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 2007年第5期289-293,共5页
目的构建重组表达人C-型利尿钠肽(CNP)-人血清白蛋白(HSA)融合蛋白质的毕赤酵母。方法重叠PCR拼接CNP(400 bp)-HSA(1 800 bp)成融合基因,双酶切后克隆至表达载体pPIC9K中。电穿孔法转染毕赤酵母菌KM71,摇瓶培养分泌表达。结果融合基因约... 目的构建重组表达人C-型利尿钠肽(CNP)-人血清白蛋白(HSA)融合蛋白质的毕赤酵母。方法重叠PCR拼接CNP(400 bp)-HSA(1 800 bp)成融合基因,双酶切后克隆至表达载体pPIC9K中。电穿孔法转染毕赤酵母菌KM71,摇瓶培养分泌表达。结果融合基因约为2 200 bp,序列测定正确。SDS-PAGE分析相对分子质量约为80 000,Western blot和RIA鉴定显示其为CNP与HSA的杂合分子。结论实现了HSA-CNP融合蛋白质在毕赤酵母中的分泌表达。 展开更多
关键词 C-型利尿钠肽 巴斯德毕赤酵母 融合蛋白质
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重组人骨保护素片段OPG^(179)与人血清白蛋白在毕赤酵母中的融合表达 被引量:4
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作者 刘俊丽 刘波 +5 位作者 宋淑军 司少艳 谭小青 吴军 景青萍 张建中 《生物技术通讯》 CAS 2011年第1期15-18,23,共5页
目的:在毕赤酵母中融合表达人骨保护素(OPG)片段OPG179与人血清白蛋白(HSA)。方法:通过RT-PCR扩增获得OPG179基因,构建表达质粒pHILD2-rhOPG179-HSA,转化至毕赤酵母菌中进行表达、纯化,对分泌表达产物进行SDS-PAGE及Western印迹检测。结... 目的:在毕赤酵母中融合表达人骨保护素(OPG)片段OPG179与人血清白蛋白(HSA)。方法:通过RT-PCR扩增获得OPG179基因,构建表达质粒pHILD2-rhOPG179-HSA,转化至毕赤酵母菌中进行表达、纯化,对分泌表达产物进行SDS-PAGE及Western印迹检测。结果:酶切鉴定与测序结果显示重组表达质粒pHILD2-rhOPG179-HSA正确;经Western印迹检测,融合蛋白rhOPG179-HSA的相对分子质量约为97×103,符合预期值;rhHSA-OPG179在毕赤酵母中的表达量约为80 mg/L。结论:表达并纯化制备了重组骨保护素片段与人血清白蛋白的融合蛋白,为后续的生物学活性研究奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 人骨保护素 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母 表达 纯化
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毕赤酵母系统来源的重组人血清白蛋白的制备及初步晶体学分析 被引量:4
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作者 陈蕴 黄鹏飞 +1 位作者 郭瑞庭 金坚 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期151-157,共7页
人血清白蛋白(human serum albumin,HSA),为血浆中含量最丰富的蛋白质,具有调控血液中的功能蛋白质、脂肪酸、激素、药物和维持血液渗透压功能。毕赤酵母工程菌Pichia pastoris GSll5/p PIC9K-rHSA经50L发酵罐发酵,发酵液冷冻离心,上清... 人血清白蛋白(human serum albumin,HSA),为血浆中含量最丰富的蛋白质,具有调控血液中的功能蛋白质、脂肪酸、激素、药物和维持血液渗透压功能。毕赤酵母工程菌Pichia pastoris GSll5/p PIC9K-rHSA经50L发酵罐发酵,发酵液冷冻离心,上清液超滤浓缩后,依次通过Blue Sepharose 6FF亲和层析、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析和SP Sepharose 6FF离子层析纯化,实现rHSA的规模化制备,最终rHSA的纯度可达99.9%以上。通过rHSA的结晶条件筛选实验,筛选出沉淀剂分别为PEG 1500、PEG 3350、PEG 6000、MPEG 2000和MPEG 5000五种结晶条件,结晶环境均为疏水性环境,并且结晶环境不能含有类似DTT的强还原剂。其中沉淀剂为MPEG2000条件下优化出的rHSA和pHSA蛋白晶体经X光衍射分辨率最好,分别为3.4魡和3.1魡,通过分子置换法得到rHSA和pHSA的晶体结构,二者结构大体相似,为rHSA在临床上的应用和HSA融合蛋白的晶体结构研究提供可靠的依据和基础。 展开更多
关键词 人血清白蛋白 纯化 结晶 晶体结构 融合蛋白
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人血清白蛋白和干扰素α2b融合蛋白在毕赤酵母中表达及质量控制 被引量:6
6
作者 钱凯 雷楗勇 +3 位作者 关波 陈蕴 饶志明 金坚 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1269-1274,共6页
筛选获得毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K/hsa-ifnα2b,胞外分泌表达rHSA-IFNα2b药物蛋白。经摇瓶及5 L发酵罐条件优化,确定最佳发酵条件。经50 L发酵罐工艺放大,发酵产量稳定,可达到350 mg/L。离心获得发酵上清液,超滤浓缩10倍,再依次通过... 筛选获得毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K/hsa-ifnα2b,胞外分泌表达rHSA-IFNα2b药物蛋白。经摇瓶及5 L发酵罐条件优化,确定最佳发酵条件。经50 L发酵罐工艺放大,发酵产量稳定,可达到350 mg/L。离心获得发酵上清液,超滤浓缩10倍,再依次通过Blue Sepharose 6FF亲和层析、Phenyl Sepharose 6FF疏水层析及Q Sepharose 6FF离子柱纯化。纯化产品进行SDS-PAGE纯度检测、SEC-HPLC检测、相对分子质量测定、N端测序、内毒素检测和生物活性检测。筛选获得一株高产菌,优化获得最佳的发酵条件。纯化产品检测(SEC-HPLC)纯度大于95%,相对分子质量为85 821,氨基酸的N端测序为DAHKSEVAHRFKDLG,与预期的相符。内毒素含量小于5EU/mg,符合国家药典的要求。体外生物细胞活性高达1.6×106IU/mg。具有良好的工业应用价值。 展开更多
关键词 干扰素α2b(IFNα2b) 人血清白蛋白(HSA) 毕赤酵母 质量检测 融合蛋白
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人胰高血糖素样肽-1与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达 被引量:2
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作者 龙娟 薛冲 +2 位作者 赵洪亮 杨晓红 刘志敏 《生物技术通讯》 CAS 2008年第4期488-492,共5页
目的:在巴斯德毕赤酵母中表达有降糖活性的人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)突变体(2Gly-hGLP-1)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白。方法:为将GLP-1氨基酸序列第2位的丙氨酸(Ala)定点突变为甘氨酸(Gly),根据毕赤酵母偏爱密码子合成编码2Gly-hGL... 目的:在巴斯德毕赤酵母中表达有降糖活性的人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)突变体(2Gly-hGLP-1)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白。方法:为将GLP-1氨基酸序列第2位的丙氨酸(Ala)定点突变为甘氨酸(Gly),根据毕赤酵母偏爱密码子合成编码2Gly-hGLP-1的基因;采用重叠PCR法拼接2Gly-hGLP-1和HSA的基因,使得2Gly-hGLP-1的C端与HSA的N端通过甘氨酸五肽接头连接;将该融合基因插入表达载体pPIC9构建为重组载体pPIC9/2Gly-hGLP-1-HSA,电击转化至毕赤酵母GS115细胞,通过表型筛选和诱导表达实验获得高效表达菌株;工程菌在5L发酵罐中培养后,对发酵产物进行分离纯化和生物学活性分析。结果:融合蛋白在5L发酵罐中的表达量约为200mg/L,经纯化后纯度可达95%以上;小鼠糖耐量实验表明该融合蛋白具有明显的控血糖活性。结论:在毕赤酵母中分泌表达的融合蛋白2Gly-hGLP-1-HSA具有降血糖活性。 展开更多
关键词 人胰高血糖素样肽 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母
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重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白在PichiaPink系统中的表达 被引量:3
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作者 任敏 赵洪亮 +4 位作者 薛冲 沈非 杜济良 陈冬生 刘志敏 《生物技术通讯》 CAS 2011年第6期818-822,共5页
目的:比较PichiaPink表达系统和巴斯德毕赤酵母GS115在表达外源蛋白方面的差异,对PichiaPink表达系统的潜在优点进行评价。方法:以重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白(HSA-IFN-α2b)为报告蛋白,构建相关载体,分别转化PichiaPink系统... 目的:比较PichiaPink表达系统和巴斯德毕赤酵母GS115在表达外源蛋白方面的差异,对PichiaPink表达系统的潜在优点进行评价。方法:以重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白(HSA-IFN-α2b)为报告蛋白,构建相关载体,分别转化PichiaPink系统菌株和巴斯德毕赤酵母GS115菌株,诱导HSA-IFN-α2b表达并测定表达水平;通过SDS-PAGE检测HSA-IFN-α2b在PichiaPink系统中的降解程度。结果:PichiaPink系统几乎所有的转化子都可以表达HSA-IFN-α2b,而GS115菌株只有60%的转化子能表达HSA-IFN-α2b;同一种Pink菌株中,整合有高拷贝数表达载体pPink-HC的菌株表达量高于整合有低拷贝数表达载体pPink-LC的菌株;Pink蛋白酶缺陷菌株在复杂培养基(YPD,BMMY)中HSA-IFN-α2b基本没有降解,而在合成培养基(BSM)中降解现象明显。结论:PichiaPink表达系统产生的转化子较GS115菌株产生的转化子易于筛选;PichiaPink系统蛋白酶缺陷菌株可明显减少外源蛋白降解。这些结果为利用PichiaPink表达系统高水平和大规模制备外源蛋白提供了实验依据。 展开更多
关键词 PichiaPink表达系统 巴斯德毕赤酵母 重组人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白
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人GCSF-白蛋白融合蛋白的构建及在毕赤酵母中的表达 被引量:6
9
作者 徐钰 孙钧铭 +5 位作者 张莲芬 窦文芳 李洁 朱威 朱书峰 金坚 《药物生物技术》 CAS CSCD 2008年第2期109-114,共6页
制备人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白。从新鲜人外周血中分离单核细胞,给予大肠杆菌脂多糖刺激后,RT-PCR制备G-CSF cDNA,以其为模板扩增得到人G-CSF的编码区序列(525 bp)。重叠PCR拼接HSA-GCSF融合基因(2277 ... 制备人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白。从新鲜人外周血中分离单核细胞,给予大肠杆菌脂多糖刺激后,RT-PCR制备G-CSF cDNA,以其为模板扩增得到人G-CSF的编码区序列(525 bp)。重叠PCR拼接HSA-GCSF融合基因(2277 bp),序列测定正确,中间未加入任何连接肽。插入表达载体pPIC9K中α交配因子的开放阅读框内,构建分泌型表达重组质粒pPIC9K-HSA-GCSF。电击转化毕赤酵母菌KM71,G418筛选得到高拷贝转化子。甲醇诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的相对分子质量约为84 k,Western blot分析融合蛋白为G-CSF与HSA的杂合分子,NFS-60细胞/MTT比色法测定融合蛋白具有G-CSF的生物学活性。结果:构建了可分泌表达HSA-GCSF融合蛋白的毕赤酵母工程菌,为进一步对其进行药学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人粒细胞集落刺激因子 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母
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人血清白蛋白-C肽融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:2
10
作者 周利苹 张莲芬 +3 位作者 雷楗勇 张文婷 蔡燕飞 金坚 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第3期71-75,80,共6页
目的构建重组表达人血清白蛋白(HSA)-C肽(CP)融合蛋白的毕赤酵母表达菌株。方法根据表达系统的密码子偏好性优化CP基因,酶切连接pBlue-HSA质粒(HSA1 800bp)和CP(100bp)基因,将HSA-CP融合基因双酶切后插入分泌表达载体pPIC9K中,重组质粒p... 目的构建重组表达人血清白蛋白(HSA)-C肽(CP)融合蛋白的毕赤酵母表达菌株。方法根据表达系统的密码子偏好性优化CP基因,酶切连接pBlue-HSA质粒(HSA1 800bp)和CP(100bp)基因,将HSA-CP融合基因双酶切后插入分泌表达载体pPIC9K中,重组质粒pPIC9K-HSA-CP经SalⅠ线性化后,电击转化毕赤酵母GS115,表型筛选Mut+转化子。PCR鉴定后,用甲醇诱导摇瓶分泌表达。结果融合基因约为1 900bp,序列测定正确。SDS-PAGE分析表明表达融合蛋白的相对分子量约为70kD,摇瓶培养表达量为140mg/L,Western blot鉴定显示表达的融合蛋白为HSA和CP的杂合分子。结论实现了HSA-CP融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达,细胞活性研究显示HSA-CP融合蛋白对人胚肾293细胞的生长具有一定的促进作用。 展开更多
关键词 C肽 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母
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PHLD融合蛋白在毕赤酵母中的构建和表达
11
作者 张新国 郭广君 +4 位作者 李坤 孙巧云 郭思佳 马小弟 马国艳 《生命科学研究》 CAS CSCD 2018年第6期475-482,共8页
δ-睡眠肽(delta sleep inducing peptide, DSIP)的相对分子质量较小,在体内半衰期较短,因此本研究将蛋白质转导结构域(protein transduction domain, PTD)、人血清白蛋白(human serum albumin, HSA)、连接肽(linker)以及δ-睡眠肽(DSIP... δ-睡眠肽(delta sleep inducing peptide, DSIP)的相对分子质量较小,在体内半衰期较短,因此本研究将蛋白质转导结构域(protein transduction domain, PTD)、人血清白蛋白(human serum albumin, HSA)、连接肽(linker)以及δ-睡眠肽(DSIP)进行融合表达,以获得重组PHLD睡眠肽融合蛋白。研究以pPIC9K/HSA为模板,利用PCR技术进行扩增,将获得的PHLD基因连接到表达载体pPIC9K上,然后转入组氨酸缺陷型毕赤酵母GS115,经G418筛选获得了高表达PHLD融合蛋白的酵母工程菌株,并进一步获得了高纯度的融合蛋白。本研究将为DSIP的深入研究和应用提供技术资料。 展开更多
关键词 δ-睡眠肽(DSIP) 人血清白蛋白(HSA) 连接肽 蛋白质转导结构域(PTD) 毕赤酵母 融合蛋白
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人血清白蛋白-白介素-2融合蛋白在CHO细胞中的表达
12
作者 卢慧惠 彭林 +3 位作者 段作营 蔡燕飞 金坚 李华钟 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期456-460,共5页
白细胞介素-2在人体免疫应答中具有重要作用,常用于治疗肿瘤、肝炎和免疫缺陷性疾病等多种疾病,但因其体内半衰期短而限制了其临床应用。文中构建了含有融合蛋白基因HSA-IL-2的p MH3质粒,并通过电转染的方法转入中国仓鼠卵巢细胞(Chines... 白细胞介素-2在人体免疫应答中具有重要作用,常用于治疗肿瘤、肝炎和免疫缺陷性疾病等多种疾病,但因其体内半衰期短而限制了其临床应用。文中构建了含有融合蛋白基因HSA-IL-2的p MH3质粒,并通过电转染的方法转入中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO细胞)中,利用p MH3质粒所携带的neo基因进行筛选,经96孔板培养并筛选得到稳定表达目的蛋白质的重组细胞,融合蛋白HSA-IL-2表达量达到2.26 mg/L。利用反转录PCR和Western blot对重组细胞鉴定后发现,融合蛋白编码基因整合入重组CHO细胞基因组中,而且融合蛋白同时具有HSA和IL-2双重免疫原性。利用对IL-2具有依赖性的CTLL-2细胞进行活性分析后发现,筛选得到的表达细胞分泌得到的融合蛋白具有较高的生物活性,表明成功构建具有表达IL-2生物活性能力的CHO细胞。 展开更多
关键词 人白介素-2 人血清白蛋白 融合蛋白 中国仓鼠卵巢细胞
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人甲状旁腺激素(1-34)二联体与人血清白蛋白融合蛋白的构建及表达 被引量:2
13
作者 张梅 邬敏辰 金坚 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期117-121,共5页
构建人甲状旁腺激素(1-34)二联体与人血清白蛋白融合蛋白的表达载体,并表达得到该融合蛋白。通过设计强特异性的引物,利用重叠PCR技术,定向定量的拼接得到hPTH(1-34)二联体-HSA融合蛋白的基因;将构建好的融合基因插入表达载体pPIC9K,大... 构建人甲状旁腺激素(1-34)二联体与人血清白蛋白融合蛋白的表达载体,并表达得到该融合蛋白。通过设计强特异性的引物,利用重叠PCR技术,定向定量的拼接得到hPTH(1-34)二联体-HSA融合蛋白的基因;将构建好的融合基因插入表达载体pPIC9K,大量扩增重组质粒,并用SalI线性化,电击转化毕赤酵母GS115,经组氨酸缺陷和G418抗性双重筛选得到阳性转化子;挑选阳性转化子进行甲醇诱导表达。测序结果表明得到的重组质粒pPIC9K-hPTH(1-34)二联体-HSA与目标设计完全一致;基因组PCR鉴定结果证明成功构建了hPTH(1-34)二联体-HSA融合基因的毕赤酵母(GS115)表达系统;SDS-PAGE电泳表明融合蛋白获得了表达,尿微量白蛋白试剂盒测定甲醇诱导表达3d后融合蛋白的产量为127 mg/L。 展开更多
关键词 人甲状旁腺激素(1-34)二联体 人血清白蛋白 融合蛋白 构建及表达
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转化生长因子βⅡ型受体胞外域融合蛋白的体内抗肝纤维化活性研究 被引量:2
14
作者 蔡燕飞 万爱妮 +1 位作者 陈蕴 金坚 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期246-252,共7页
研究人血清白蛋白与转化生长因子βⅡ型受体胞外域的融合蛋白(HSA-eTGFBR2)的体内抗肝纤维化作用,以期寻找更加稳定的抗肝纤维化药物。通过CCl_4诱导构建小鼠肝纤维化模型,设正常组、模型组、阳性组、eTGFBR2治疗组、HSA-eTGFBR2治疗组... 研究人血清白蛋白与转化生长因子βⅡ型受体胞外域的融合蛋白(HSA-eTGFBR2)的体内抗肝纤维化作用,以期寻找更加稳定的抗肝纤维化药物。通过CCl_4诱导构建小鼠肝纤维化模型,设正常组、模型组、阳性组、eTGFBR2治疗组、HSA-eTGFBR2治疗组和HSA组。经过苏木精-伊红染色、血清肝功能指标活性检测及Western blot等方法鉴定各组抗肝纤维化效果。结果显示:(1)CCl_4能引起肝脏结构紊乱、肝细胞坏死、胶原纤维增生,损伤肝功能,诱导纤维化;(2)HSA-eTGFBR2及其单体均能明显改善肝纤维化症状,减轻肝细胞损伤及胶原沉积,改善肝功能,降低肝脏中纤维化标志物α-SMA和COL I的表达水平,其改善肝纤维化效果与单体药物相当,而白蛋白几乎没有治疗效果;(3)与单体药物相比,HSA-eTGFBR2融合蛋白在降低给药频率的情况下能取得相当的治疗效果。综上表明HSA-eTGFBR2融合蛋白具有良好的抗肝纤维化效果,与单体药物相比,融合蛋白药物在低注射频率下也能取得较好的治疗效果,表明该融合蛋白药物半衰期更长、更稳定,具有更优的应用前景。 展开更多
关键词 转化生长因子βⅡ型受体胞外域 肝纤维化 人血清白蛋白融合蛋白
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人血清白蛋白融合技术研究进展 被引量:3
15
作者 郑炜 李杰 《长沙大学学报》 2013年第5期10-13,共4页
人血清白蛋白是血液中含量最丰富的蛋白,它半衰期长,且具有运输药物的功能,这使其成为理想的药物载体.作为延长药物半衰期的新技术,白蛋白融合技术是近年来发展迅速、应用广泛的蛋白质工程技术.通过共价偶联、非共价偶联、纳米包裹和融... 人血清白蛋白是血液中含量最丰富的蛋白,它半衰期长,且具有运输药物的功能,这使其成为理想的药物载体.作为延长药物半衰期的新技术,白蛋白融合技术是近年来发展迅速、应用广泛的蛋白质工程技术.通过共价偶联、非共价偶联、纳米包裹和融合蛋白的方式可实现白蛋白与药物分子的偶联,使药物分子的药代动力学得到明显改善.系统介绍了白蛋白融合技术的主要方式、进展以及发展方向.随着白蛋白和相关受体蛋白作用机制的研究不断深入,基于结构的白蛋白融合技术将进一步提高白蛋白融合技术在长效药物开发中的应用. 展开更多
关键词 人血清白蛋白 基因工程 融合蛋白 半衰期
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甲状旁腺激素-人血清白蛋白融合蛋白在CHO细胞中的表达
16
作者 张焕 徐栋生 +2 位作者 蔡燕飞 陈蕴 金坚 《生物化工》 2016年第5期36-39,54,共5页
人甲状旁腺激素是由人甲状腺旁腺主细胞分泌合成的一种单链多肽激素,成熟的甲状旁腺激素含84个氨基酸残基,其活性区域为N-末端1-34氨基酸片段,目前已上市的PTH药物也以34个氨基酸残基的多肽为主,主要用于治疗老年骨质疏松以及绝经后妇... 人甲状旁腺激素是由人甲状腺旁腺主细胞分泌合成的一种单链多肽激素,成熟的甲状旁腺激素含84个氨基酸残基,其活性区域为N-末端1-34氨基酸片段,目前已上市的PTH药物也以34个氨基酸残基的多肽为主,主要用于治疗老年骨质疏松以及绝经后妇女骨质疏松。但是PTH的稳定性较差,导致体内半衰期短,难以形成有治疗作用的稳态血药浓度,从而限制了其临床应用。因此,设计稳定并能保持原有生物活性的PTH药物分子至关重要。构建含有融合蛋白基因PTH-HSA的p MH3质粒,并通过电转染的方法转入中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO细胞)中,利用p MH3质粒所携带的NEO基因进行筛选,最终得到能稳定表达目的蛋白的重组细胞,并在5L发酵罐中进行表达,融合蛋白PTH-HSA表达量达到155mg/L。Western blot检测显示,该融合蛋白同时具有HSA和PTH双重免疫原性。 展开更多
关键词 甲状旁腺激素-人血清白蛋白 融合蛋白 中国仓鼠卵巢细胞
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重组人血清白蛋白与干扰素α-2b融合蛋白中聚乙二醇1500残余量测定方法研究
17
作者 张娜 杜莹莹 +4 位作者 李月 常早荣 薛冲 刘志敏 任飞 《长治医学院学报》 2019年第5期330-334,共5页
目的:探讨重组人血清白蛋白与干扰素α-2b融合蛋白中聚乙二醇1500(PEG1500)残留量的检测方法。方法:选择3个不同批次重组人血清白蛋白与干扰素α-2b融合蛋白原液作为供试品,采用聚乙二醇残余量测定法,参照药品质量标准分析方法验证指导... 目的:探讨重组人血清白蛋白与干扰素α-2b融合蛋白中聚乙二醇1500(PEG1500)残留量的检测方法。方法:选择3个不同批次重组人血清白蛋白与干扰素α-2b融合蛋白原液作为供试品,采用聚乙二醇残余量测定法,参照药品质量标准分析方法验证指导原则,分别设计专属性、线性范围、准确性、精密性、定量限实验进行测定。结果:该实验方法专属性、准确性、精密度及5.05~50.50μg/mL范围的线性关系良好,定量限为1.94μg/mL。结论:该实验方法用于人血清白蛋白与干扰素α-2b融合蛋白原液的PEG1500残余量检测,结果准确、可靠。 展开更多
关键词 重组人血清白蛋白与干扰素α-2b融合蛋白 聚乙二醇 准确性 精密度
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融合蛋白HSA-HGF的体内抗肝纤维化活性
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作者 蔡燕飞 徐栋生 +1 位作者 陈蕴 金坚 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期93-99,共7页
肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)在治疗肝纤维化过程中扮演着重要角色,但其在血液循环中并不稳定,半衰期短,提高HGF在血液循环中的稳定性是HGF应用性研究的重要内容。作者在课题组前期研究的基础上,对人血清白蛋白(human ... 肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)在治疗肝纤维化过程中扮演着重要角色,但其在血液循环中并不稳定,半衰期短,提高HGF在血液循环中的稳定性是HGF应用性研究的重要内容。作者在课题组前期研究的基础上,对人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)融合蛋白HSA-HGF的体内抗肝纤维化能力进行了研究。通过CCl4诱导构建小鼠肝纤维化模型,并设置(1)正常组、(2)模型组、(3)阳性组、(4)HSA组、(5)HGF治疗组、(6)HSA-HGF治疗组。经过苏木素-伊红染色、Masson染色、血清肝功能指标活性检测、qRT-PCR法检测肝组织中α-SMA和COLⅠ基因转录水平、TRFIA法检测体内半衰期,从而鉴定各组抗肝纤维化效果。结果显示:1)运用CCl4构建肝脏损伤小鼠模型,药物作用后结果显示融合蛋白HSA-HGF及其单体药物均可以明显地促进小鼠的肝脏恢复;2)与单体药物相比,融合蛋白HSA-HGF在降低给药频率的情况下能取得相当的治疗效果;3)小鼠体内半衰期分析显示,融合蛋白的体内半衰期由单体的3 min增加到3 h左右。表明融合蛋白HSA-HGF具有明显的抗纤维化效果,与单体药物相比,融合蛋白药物的半衰期明显延长,表明该融合蛋白稳定性更佳,具有成为抗肝纤维化药物的潜力。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 人血清白蛋白融合蛋白 肝纤维化
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基于金纳米粒-白蛋白融合蛋白递送系统的非药物靶向溶栓策略
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作者 鲁津津 刘春 +2 位作者 孙思荣 陈敬华 高敏 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期455-463,共9页
血栓是导致心肌梗塞、脑卒中等心血管疾病的主要因素之一。纤维蛋白溶酶类抗血栓药物虽然已被广泛应用于临床,但依然受到治疗窗口狭窄、半衰期短、易失活和因非靶向性造成的异常出血等不良反应的限制。因此,有效地将溶栓物质靶向输送到... 血栓是导致心肌梗塞、脑卒中等心血管疾病的主要因素之一。纤维蛋白溶酶类抗血栓药物虽然已被广泛应用于临床,但依然受到治疗窗口狭窄、半衰期短、易失活和因非靶向性造成的异常出血等不良反应的限制。因此,有效地将溶栓物质靶向输送到血栓部位并将不良反应降至最低至关重要。基于人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)在血液中的长循环效果和优异的载药特性,本研究运用基因工程技术在HSA的N末端融合一段能靶向血栓部位的功能肽(P-selectin binding peptide,PBP),经毕赤酵母表达并纯化得到具有血栓靶向功能的白蛋白融合蛋白。该融合蛋白包载金纳米粒子(gold nanoparticles,Au NPs)后能够形成均一稳定的纳米粒(PBP-HSA@Au),粒径为17.7±1.0 nm,zeta电位为-11.3±0.2 mV。细胞毒性和溶血实验证明PBP-HSA@Au生物相容性好,血小板靶向实验表明PBP的引入赋予了PBP-HSA@Au血栓靶向能力,近红外光(near infrared ray,NIR)照射后,PBP-HSA@Au能将光能快速转化为热能进而破坏纤维蛋白,表现出优异的溶栓效果。本研究设计的白蛋白融合蛋白递送系统为血栓治疗提供了一种精准、快速、非药物的治疗策略,该体系设计简单、生物相容性高,具有较强的临床应用性。研究涉及的所有动物实验均按照江南大学动物实验伦理委员会批准的方案执行[JN.No20230915S0301015(423)]。 展开更多
关键词 血栓 光热治疗 靶向溶栓 融合蛋白 人血清白蛋白 金纳米粒
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重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白质控方法与质量标准的建立 被引量:2
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作者 裴德宁 李响 +1 位作者 韩春梅 饶春明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1750-1753,共4页
目的:建立重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白(rHSA-IFNα2a)的质控方法和质量标准。方法:分别使用抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体、采用免疫印迹法对成品进行鉴别试验,采用WISH细胞病变抑制法测定成品和原液的生物学活性,原液以胰蛋白酶... 目的:建立重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白(rHSA-IFNα2a)的质控方法和质量标准。方法:分别使用抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体、采用免疫印迹法对成品进行鉴别试验,采用WISH细胞病变抑制法测定成品和原液的生物学活性,原液以胰蛋白酶酶切后,用HPLC分析肽图,其余项目按2010年版中国药典(三部)的规定进行检测。结果:样品与抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体均呈阳性反应,比活性>1.5×105 IU.mg-1,其肽图与参考品的一致,其余项目均符合2010年版中国药典(三部)的规定,根据检测结果建立了rHSA-IFNα2a的质量标准。结论:建立的质控方法和质量标准可以保证rHSA-IFNα2a的安全、有效和质量可控,可以用于rHSA-IFNα2a的常规检定。 展开更多
关键词 重组人血清白蛋白 干扰素Α2A 融合蛋白 质控方法 质量标准
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